يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
و"حيدة الخلية والروتيفر طريقة الاستزراع متعدد الأنواع" كاملة ومحدثة للتربية اسماك الزرد الأولى تغذية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الزرد (Danio rerio) هو كائن حي نموذجي ذو أهمية متزايدة في العديد من مجالات العلوم. ومن أكثر الجوانب التقنية تطلبا لاستزراع هذا النوع في المختبر تربية اليرقات التي تتغذى أولا على مرحلة الأحداث مع معدلات نمو وبقاء عالية. يدور التحدي الإداري المركزي لهذه الفترة التنموية حول تقديم مواد علفية عالية التغذية للأسماك على أساس مستمر تقريبا دون المساس بجودة المياه. نظرا لأن يرقات الزرد تتكيف جيدا للتغذية على العوالق الحيوانية الصغيرة في عمود الماء ، فإن عناصر الفرائس الحية مثل الروتيفر العضدي والأرتيميا والبارامسيوم معترف بها على نطاق واسع على أنها الأعلاف المفضلة ، على الأقل حتى تصل الأسماك إلى مرحلة الأحداث وتكون قادرة على التغذي بكفاءة على الوجبات الغذائية المصنعة. يصف هذا البروتوكول طريقة يتم بموجبها استزراع يرقات الزرد حديثة الفقس مع روتيفير المياه المالحة الحية (Brachionus plicatilis) في نفس النظام. يوفر نهج الاستزراع المتعدد للأسماك مصدرا غذائيا حيا غنيا بالمغذيات "عند الطلب" دون إنتاج نفايات كيميائية بمستويات من شأنها أن تحد من الأداء. الأهم من ذلك ، نظرا لأن النظام يسخر كلا من الإنتاجية الطبيعية العالية للروتيفر والتفضيلات السلوكية للأسماك ، فإن العمالة التي ينطوي عليها الصيانة منخفضة. يوضح البروتوكول التالي تفاصيل إجراء محدث خطوة بخطوة يتضمن إنتاج الروتيفر (القابل للتطوير إلى أي مستوى مرغوب) لاستخدامه في الاستزراع متعدد يرقات الزرد والروتيفر الذي يعزز الأداء الأقصى خلال أول 5 أيام من التغذية الخارجية.
المقدمة
الزرد (دانيو rerio) هو حيوان مختبر البارز تستخدم في عدد متزايد من التخصصات العلمية، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على الوراثة التنموية، وعلم السموم، والسلوك وتربية الأحياء المائية، البيولوجيا التجديدي، ونمذجة العديد من الاضطرابات الإنسان 1-5. على الرغم من أن الأنواع من السهل نسبيا للحفاظ في المختبر، وهناك عدد من التحديات الإدارية المرتبطة ثقافتهم 6. وأبرز هذه هي تربية اليرقات، خاصة عندما الأسماك لأول مرة تبدأ في وقت لاحق لتغذية التضخم المثانة الغاز 7. تحت الظروف العادية، التي تسيطر عليها، وهذا الحدث التنموي يحدث في ~ 5 أيام بعد الإخصاب (إدارة الشرطة الاتحادية)، مع 3 التالية - 5 أيام من النمو يجري حاسما بشكل خاص 7. الصعوبات الفنية المركزية خلال هذه المرحلة في الاستجابة على نحو كاف لمطالب الغذائية من اليرقات التغذية الأولى - يجب أن البنود تغذية تكون بحجم مناسب، digestible، جذابة، ومتاحة على أساس مستمر تقريبا، دون خلق النفايات المفرطة في خزانات زراعة. تاريخيا قد تحقق هذا عادة من خلال تقديم العديد من كميات صغيرة من الأعلاف للأسماك في صهاريج، جنبا إلى جنب مع روتين 8،9 صرف المياه. في حين أن هذه الأساليب هي إلى حد ناجحة، فهي غير فعالة، تتطلب مدخلات العمل عالية، والعودة المتغير الوحيد ومعدلات محدودة للنمو والبقاء على قيد الحياة 10.
في الطبيعة، اليرقات الزرد إطعام يفترض على وفرة صغيرة الحاضر العوالق الحيوانية في عمود الماء 11. لهذا السبب، بروتوكولات تربية اليرقات التي تتضمن لقطات حية مثل المتناعلة، الدوارات، والأرتيميا وعادة ما تكون الأكثر فعالية 7. في عام 2010، أظهر أفضل والمشاركين فيها أنه كان من الممكن أن تنمو اليرقات الزرد في ثابت، والمياه المالحة مع المياه المالحة الدوارات لمدة 5 أيام الأولى من التغذية الخارجية (12). هذا النهج الذي تسخيروفاق إنتاجية عالية الطبيعية الثقافات حيدة الخلية والروتيفر لتوفير وافرة، فريسة ذات قيمة غذائية عالية دون تلويث المياه، والمحاصيل معدلات عالية جدا من نمو اليرقات والبقاء على قيد الحياة مع مدخلات العمل منخفضة 12،13. في السنوات الأخيرة، تبنت عددا متزايدا من المختبرات حول العالم أشكال مختلفة من هذا البروتوكول، والعديد من زراعة الآن الدوارات بطريقة مستمرة لدعم نظم الحضانة 14.
على مدى السنوات القليلة الماضية، تم تنقيح طرق لكلا حيدة الخلية والروتيفر / متعدد الأنواع الزرد والإنتاج حيدة الخلية والروتيفر وتحسينها لتصبح أكثر توحيدا وقابلة بسهولة. توفر هذه المقالة خطوة بخطوة تعليمات ل1) إنتاج حيدة الخلية والروتيفر المستمر والقوي و2) إنشاء حيدة الخلية والروتيفر / الزرد نظام متعدد الأنواع المستخدمة لدعم النمو القوي من الأسماك لمدة 5 أيام الأولى من التغذية الخارجية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. حيدة الخلية والروتيفر الثقافة
- المكونات الأساسية لنظام الثقافة باستخدام سفينة 100 L الثقافة
- جمع كل المكونات لإعداد ثقافة حيدة الخلية والروتيفر. يتكون الإعداد الثقافة حيدة الخلية والروتيفر سفينة الثقافة (CV) لزراعة الدوارات. سفينة مشابهة للحفاظ على الدوارات feedout (سفينة الثقافة feedout، FCV)؛ جرة ذهابا والقاع الفقس (تغذية الخزان، FR) لتخزين الخليط تغذية الطحالب (AFM)؛ إمدادات الهواء (AS) لتهوية CV، FCV وFR؛ مضخة تحوي جهاز توقيت القياس (PMT) للسيطرة على تسليم تغذية الطحالب في السيرة الذاتية وFCV. ومرشح خيط الجسيمات (الاتحاد البرتغالي) أن يجلس داخل السيرة الذاتية.
وهناك قائمة كاملة من اللوازم والمكونات في قائمة المواد: ملاحظة.
- جمع كل المكونات لإعداد ثقافة حيدة الخلية والروتيفر. يتكون الإعداد الثقافة حيدة الخلية والروتيفر سفينة الثقافة (CV) لزراعة الدوارات. سفينة مشابهة للحفاظ على الدوارات feedout (سفينة الثقافة feedout، FCV)؛ جرة ذهابا والقاع الفقس (تغذية الخزان، FR) لتخزين الخليط تغذية الطحالب (AFM)؛ إمدادات الهواء (AS) لتهوية CV، FCV وFR؛ مضخة تحوي جهاز توقيت القياس (PMT) للسيطرة على تسليم تغذية الطحالب في السيرة الذاتية وFCV. ومرشح خيط الجسيمات (الاتحاد البرتغالي) أن يجلس داخل السيرة الذاتية.
- ترتيب
- رفع السيرة الذاتية وFCV على الوقوف أو الجدول بحيث الثقافات يمكن حصادها بسهولة عن طريق استنزاف المناسب إلى جمع تابعainer (الشكل 1). استخدام مرنة أنابيب العرض الجوي لتوصيل AS على طول الأنبوب جامدة في كل سفينة الثقافة. تأكد من أن أنابيب طويلة بما فيه الكفاية لإيصال الهواء إلى أسفل CV أو FCV.
- استخدام خط الهواء ذات السعة الصغيرة لتوصيل AS على طول الأنبوب جامدة الذي يمتد إلى أسفل FR الذي يحتوي على AFM. تثبيت صمام في كل سطر الهواء لتنظيم تدفق الهواء. ربط FR إلى PMT مع تسليم تغذية الأنابيب، وتشغيل أنابيب من PMT في حفرة حفرها إلى جانب CV / FCV، بالقرب من أعلى الشكل 1.
- أبدء
- ملء وعاء الثقافة إلى 90٪ من حجم المتاحة مع التناضح العكسي المياه (RO). إذا RO غير متوفر، واستخدام المياه البلدية النظيفة، وإزالة الكلور. ومع ذلك، ينبغي إجراء تقييم للمخاطر الأمن الحيوي لضمان عدم الكائنات الحية المسببة للأمراض قد تكون موجودة في المياه مصدر. ملاحظة: يمكن إجراء مثل هذا التحليلمن قبل أي مختبر المياه المؤهلين.
- جرعة الثقافة السفينة المياه مع الملح الحوض للوصول إلى الملوحة من 15 غرام / L. ضبط تدفق الهواء في الإناء بحيث تحافظ على "الغليان"، وبعد ذلك ببطء إضافة يقاس مقدار الملح في وعاء الثقافة حتى يذوب تماما من قبل التهوية. تواصل تهوية الماء ل> 1 ساعة للتأكد من الاوكسيجين بشكل كامل.
- جعل الخليط تغذية الطحالب. 3 L نظيفة، إزالة الكلور النقي (0 جزء في المليون) المياه إضافة 100 غرام من NaHCO 3 و 100 غرام من الأمونيا التعادل (hydroxymethylsulfonate الصوديوم). يوفر هذا كاشف الماضي فائدة إضافية تتمثل في القضاء على أي الكلور المتبقي من ماء الصنبور أو التبييض بقايا من تعقيم المعدات الثقافة. فمن الأهمية بمكان لضمان أن هذه المركبات يتم حله بشكل كامل. ثم يضاف 1 لتر من التركيز الطحالب (الكتلة الحيوية الوزن الجاف ~ 15٪). يضاف خليط العلف إلى FR وتخزينها في 4 درجات مئوية.
- إضافة الثقافة بداية من 5-10٬000٬000 الدوارات Brachionus plicatilis إلى السيرة الذاتية تحتوي على 15 غرام الهوائية / لتر ماء الملوحة. إذا كان قد تم برود الدوارات أثناء الشحن أو التخزين، ينبغي أن تكون تدريجيا (خلال 30 دقيقة أو أكثر) تأقلم لدرجة حرارة الماء في وعاء الثقافة (25-27 درجة مئوية).
- بدوره على PMT والبدء في ضخ تغذية الطحالب في سفينة الثقافة حيدة الخلية والروتيفر. باستخدام ميزة الموقت للPMT، تعيين معدل الولادة من خليط العلف الطحالب بحيث ~ 1.6 مل من الطحالب خليط العلف يتم تسليمها لكل مليون الدوارات في الثقافة، في اليوم الواحد. توزيع الوجبات في أجزاء صغيرة على فترات منتظمة على مدى فترة 24 ساعة. وأكثر تواترا الرضاعة، كلما كان ذلك أفضل.
- معايرة معدل تسليم المضخة عن طريق تحويل يدويا على PMT لفترة محددة (على سبيل المثال، 1 دقيقة) وجمع الطحالب أنه يضخ خلال هذه الفترة إلى الاسطوانة أو الكأس. على سبيل المثال، إذا كان جرعات PMT 5 مل من الطحالب في 1 دقيقة، ثم معدل الجرعة ستكون5 مل الطحالب / دقيقة.
- حساب معدل التغذية اليومي المطلوبة بضرب عدد من الدوارات الحالية، في الملايين، بنسبة 1.6 مل. على سبيل المثال، فإن ثقافة حيدة الخلية والروتيفر مع حجم السكان من 100 مليون الدوارات تتطلب ~ 160 مل من العلف يوميا (100 × 1.6 مل).
- تعيين PMT إلى إعطاء جرعات من مجموع الاحتياجات العلف اليومي على فترات منتظمة طوال فترة 24 ساعة. على سبيل المثال، يمكن أن يتم تسليمها الولادة من إجمالي كمية العلف اليومي من 160 مل في أجزاء مرة واحدة كل ساعة 3 خلال فترة 24 ساعة باستخدام مجموعة PMT مع معدل ضخ جرعات من 5 مل / دقيقة لمدة 4 دقائق، 8 مرات يوميا (5 مل / دقيقة × 4 دقيقة = 20 مل × 8 = 160 مل الرضاعة).
- السماح للثقافة أن تنمو حتى يولد السكان المطلوب، وعادة 48-72 ساعة، قبل الحصاد. في 24 ساعة بعد بدء، إضافة مرشحات الجسيمات الخيط إلى سفينة الثقافة والبدء الصيانة العادية.
- صيانة
ملاحظة: الثقافة تعمل على أساس مستمر ويتطلب routinالصيانة الإلكترونية التي ينبغي من الناحية المثالية أن يؤديها في نفس الوقت كل يوم، في التسلسل التالي.- ملء FCV إلى 90٪ من حجم المتاحة مع نظيفة، إزالة الكلور المياه العذبة، مداوي مع 10 جم / لتر أملاح الحوض. تأكد من أن الماء هو تمتزج جيدا، وأن كل من الملح يذوب تماما. ضبط تدفق الهواء في الإناء بحيث تحافظ على "الغليان". قياس الملوحة مع الإنكسار والتأكد من أن الملوحة 10 غرام / L. فمن الأهمية بمكان لتحقيق هذا الهدف ولا تزيد على ذلك.
- أخذ عينات من الدوارات في السيرة الذاتية: تأكد من أن الثقافة هي جيدة الامتزاج، ثم جمع 3 عينات من 2-3 مل لكل منهما باستخدام ماصة نقل أو autopipettor، من مناطق مختلفة من الثقافة. الجمع بين هذه العينات في أنبوب أو قارورة من حجم مناسب (على سبيل المثال، 10 مل).
- نقل 1-2 مل من العينة مجتمعة على طبق بتري بحيث يمكن تصور تحت المجهر تشريح. تحقق من جودة الثقافة (السباحة سلوكالدوارات، وجود البيض منفصلة، وتلويث البروتوزوا).
- لشل حركة الدوارات في العينة مجتمعة المتبقية عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من 50٪ Lugols محلول اليود إلى العينة. في غضون ثوان بعد إضافة Lugols، ومراقبة الدوارات لوقف السباحة. الآن، عد بسهولة الدوارات.
ملاحظة: الإيثانول ومواد التبييض المخفف، أو الخل يمكن استخدامها في مكان Lugols. الخل (2 قطرات / 10 مل) لديها مزايا كونه غير خطرة، لا تفقد قوتها في التخزين كما التبييض واليود حلول يمكن، وعدم جعل العقد الدوارات، لذلك تبقى الهالة من أهداب و "القدم" الموسعة و الحيوانات تبدو أكثر طبيعية. - تأكد من أن العينة المختلطة جيدا (والدوارات يجمد يستقر بسرعة)، ثم سرعان ما أخذ مل عينة فرعية ~ 2 في الماصة البلاستيكية والاستغناء 1 مل في شريحة العد سيدجويك-رافتر (20 × 50 1 ملم الساحات) (الشكل 2 ). باستخدام تشريح أو مركب المجهر، والاعتماد على الدوارات سليمة ورعدد املجموع البيض تعلق على هذه الدوارات (الشكل 2). عد أكبر قدر من ناحية الشريحة عند الضرورة إلى الاعتماد ~ 100 الدوارات. حساب عدد من الدوارات لكل مل، وسجل ذلك في جدول بيانات أو دفتر.
- الحصاد ~ 30٪ من حجم الدوارات في السيرة الذاتية: إزالة العرض الجوي وتصفية الخيط، فتح الصمام ببطء في الجزء السفلي من السيرة الذاتية، والسماح لتدفق المياه إلى أحد هواة جمع العوالق مع شاشة شبكة 53 ميكرون. جمع المياه المتدفقة من الجزء السفلي من جامع بعد تصفية في دلو أو نزيف. استخدام لطيف لتدفق معتدلة لتجنب إتلاف الدوارات. لا تسمح الدوارات حتى يجف على الشاشة.
- لأسباب الثبات، فإنه من المستحسن أن إنشاء FCV مع عدد قياسي من الدوارات كل يوم. لذلك، بناء على CV الكثافة حيدة الخلية والروتيفر والحصاد حجم المعروفة، وضبط حجم إجمالي FCV لتحقيق الكثافة النهائية متناسقة (على سبيل المثال، 1500 الدوارات / مل). إضافة روتي تحصدFERS إلى FCV: بلطف نقل الدوارات من الشاشة جمع باستخدام زجاجة غسل مملوء بالماء والملح نظيفة (10-15 جم / لتر). عكس الشاشة على FCV وغسل الدوارات في FCV مع تيار لطيف من المياه المالحة. بدء PMT لتقديم الأعلاف (~ 1.57 مل لكل مليون الدوارات في اليوم) إلى FCV.
- فرك داخل كامل من السيرة الذاتية مع نظيفة، لينة فرشاة النايلون أو وسادة فرك.
- جعل مزيج جديد من 15 جم / لتر ماء عن طريق إضافة كمية مناسبة من الملح لقياس كمية المياه RO نظيفة في دلو 5 غالون ليحل محل حجم المياه المفقودة لموسم الحصاد. إضافة الملح إلى الماء في دلو ويحرك بقوة حتى يذوب تماما، ثم تضاف إلى السيرة الذاتية.
- استخدام رذاذ الضغط العالي في بالوعة، وشطف تصفية الخيط حتى أنها خالية من الحطام، ومن ثم إعادته إلى السيرة الذاتية.
- ضبط معدلات التغذية من الطحالب تسليمها إلى السيرة الذاتية عن طريق تغيير مدة كل حدث الجرعات، وفقا لتعداد اليومي من الدوارات / مل.استخدام العمليات الحسابية المقدمة في خطوة 1.3.8، أعلاه لتحديد كمية مناسبة من العلف ليتم تسليمها.
- وبعد نحو 24 ساعة، وتكرار هذه العملية. تبدأ من خلال حصاد الدوارات المتبقية في FCV (أنه لا توجد حاجة لليوم السابق) بنفس الطريقة كما هو موضح أعلاه (الخطوات 1.4.2 - 1.4.10). التركيز عليها في 2 لتر من المياه العذبة، نظيفة إزالة الكلور (5 ز / L الملح). ويمكن تخزينها في 4 ° C باعتبارها إمدادات النسخ الاحتياطي، أو تستخدم لتغذية مراحل لاحقة من الأسماك، وراء ما يوصف في هذا البروتوكول.
ملاحظة: هذا البروتوكول يسمح ما يصل إلى 2-3 أيام من خفض صيانة الثقافة (مع التغذية التلقائية العادية)، وذلك لأن الدوارات في السيرة الذاتية يمكن أن يتسامح مع إغفال المحاصيل دون عواقب وخيمة.
2. الاستزراع متعدد الأنواع
- التثبيت
- جمع الأجنة الزرد عن حدث التبويض عن طريق سكب أجنة ولدت من خلال الشاي مصفاة ثم الشطف بلطف مع الجبهة الاسلامية للانقاذ معقمةح الماء (أو أي مصدر آخر غير الملوثة من حل مكيفة بشكل مناسب، على سبيل المثال، المتوسط الجنين، E3، وما إلى ذلك) من زجاجة غسل في أطباق بتري.
- احتضان الأجنة في 25-28 درجة مئوية في أطباق بتري في مناطق ذات كثافة من 40-50 الأجنة في طبق لمدة 5 أيام.
- تبدأ المرحلة متعدد الأنواع في يوم 5 بعد الإخصاب، أو عندما يزيد عن 90٪ من اليرقات والسباحة بنشاط في عمود الماء.
- تلقيح
- إضافة 500 مل من ثقافة حيدة الخلية والروتيفر مباشرة من FCV إلى خزان الحضانة 3.5 L؛ إدراج المياه ثقافة حيدة الخلية والروتيفر يوفر تغذية الطحالب التي تحافظ على المحتوى الغذائي من خلال الدوارات متعدد الأنواع.
- صب بلطف اليرقات من طبق بتري واحد في خزان الحضانة. ضمان عدم وجود اليرقات لا تزال في الطبق.
- إضافة 500 مل من المياه النظيفة والأسماك مكيفة من نظام إعادة تدوير أو مصدر للمياه مخصص لخزان للوصول إلى الحجم النهائي من 1 L والصورة النهائيةalinity من 5 ز / L.
ملاحظة: هذه الملوحة أمر بالغ الأهمية لبقاء اليرقات الزرد وسوف تتأثر سلبا إذا الملوحة> 7 ز / L والبقاء على قيد الحياة حيدة الخلية والروتيفر ستتأثر سلبا إذا الملوحة <2 ز / L.
- مرحلة الاستزراع متعدد الأنواع
ملاحظة: يجب أن تستمر المرحلة متعدد الأنواع لمدة تصل إلى 4 أيام بعد التلقيح (أي ما مجموعه 5 أيام، الموافق 5-9 أيام بعد الإخصاب).- مراقبة الخزان متعدد الأنواع مرة واحدة يوميا على الأقل خلال هذه الفترة لضمان الدوارات والأسماك موجودة ومتنامية. تأكد من أن الدوارات واضحة في جميع أنحاء عمود الماء. تأكد من أن لfishs واضحة أيضا في عمود الماء، والسباحة بين الدوارات.
- بدء تدفق المياه الطبيعي عن طريق الخزان. وضع الشاشة أو يربك عبر منفذ استنزاف لضمان أن اليرقات لا يخرجوا من الخزان.
ملاحظة: في نهاية هذه المرحلة، فإن الأسماك تكون كبيرة بما يكفي لاستهلاك المواد فريسة أكبر مثل الأرتيمياتغذية بنود البعد يرقية أو معالجتها في نطاق حجم 75-125 ميكرون.
ملاحظة: تم قياس ديناميات السكان حيدة الخلية والروتيفر في خزان متعدد الأنواع تمثيلي عن طريق اخذ عينات / عد الدوارات من الخزان بنفس الطريقة كما هو موضح في الخطوات 1.4.2 - 1.4.5. وقد تم ذلك مرة واحدة يوميا من بداية مرحلة الاستزراع متعدد الأنواع حتى تم الانتهاء منه.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
النظام الثقافة حيدة الخلية والروتيفر المستمر الموصوفة هنا هو دينامية، وأنه من الطبيعي لأعداد حيدة الخلية والروتيفر لتتقلب إلى حد صغير مع مرور الوقت إذا كان هناك اختلافات في معدلات التغذية والحصاد اليومي. سكان الدوارات في واحدة من الثقافات العاملة في مرافق تربية الأحياء المائية في مستشفى الأطفال في بوسطن، حافظت على النحو المبين أعلاه، تم رصدها لمدة 30 يوما (الشكل 3). كانت كثافة ثقافة المتوسط خلال هذه الفترة 932 الدوارات / مل، وبحد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التنفيذ الناجح لأسلوب متعدد الأنواع حيدة الخلية والروتيفر لتغذية أوائل الزرد اليرقات يتطلب بروتوكولات فعالة لمهمتين: إنشاء وصيانة نظام الثقافة حيدة الخلية والروتيفر المستمر لتغذية الأسماك، وزراعة تغذية أول اليرقات الزرد جنبا إلى جنب مع الدوارات في الدبابة نفسها.
تم تعديل الإعداد لنظام إنتاج المياه المالحة حيدة الخلية والروتيفر المستمر للمختبرات الزرد وصف لأول مرة من قبل لورانس والمشاركين فيها 14 وعززت ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعمل EC هنري ريد تربية الأحياء البحرية، وشركة، وهي الشركة التي توفر الدوارات ومركزات الطحالب، وغيرها من الإمدادات لتربية الأحياء المائية والأسماك أسواق الهاوي.
شكر وتقدير
تم إجراء الرعاية واستخدام الأسماك ولدت لنتائج ممثلة الموصوفة في هذا البروتوكول بما يتفق تماما مع المبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في مستشفى بوسطن للأطفال، بروتوكول # 14-05-2673R.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Rotifer Culture Infrastructure< / strong>< / em> | |||
| 100 L Culture Vessel | Aquaneering | ثقافة بولي كربونات مخصص ، مخروطي القاع ، مع صمام تصريف | |
| 5 جالون مجموعة دلو ثقافة | القصب للزراعة البحرية | CCS Starter Kit | ثقافة صغير الحجم للمرافق |
| الصغيرة أنابيب صلبة شفافة 1/2 "OD ، 36 بوصة | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | أنابيب صلبة شفافة لتوصيل الهواء |
| أنبوب شبكي | Pentair Aquatic | Ecosystems RT444X | دعم أنبوب شبكي لمرشح الخيط |
| Rotifer | Floss Reed Mariculture | Rotifer الخيط 12 × 42 بوصة | مصيدة نفايات الجسيمات |
| مضخة مؤقت القياس التمعجي ، 5 GPD | Grainger | 38M003 & nbsp ؛ | مضخة قياس مع مؤقت لتغذية الجرعات إلى الروتيفر |
| مضخة مؤقت القياس التمعجي ، 1-100 مل / ساعة (للثقافة على نطاق أصغر) | Coral Vue | كود التخزين التعريفي: مضخة قياس IC-LQD-DSR | مع مؤقت لتغذية الجرعات إلى أنابيب |
| السيليكون المدورة ؛ | كول بارمر | لتسليم الطحالب إلى السفينة الروتيفر | |
| أنابيب شفافة صلبة "OD ، 36" | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | أنابيب صلبة شفافة لتوصيل الهواء إلى معجون الطحالب |
| أنابيب صلبة شفافة OD ، 36 " | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | أنابيب صلبة شفافة لتوصيل الطحالب |
| Rotifers< / strong>< / em> | |||
| Live Rotifers Brachionus plicatilis Type L | Reed Mariculture | Type L 5 مليون | Rotifer Stock Culture لبدء تشغيل النظام |
| Rotifer Feed< / strong>< / em> | |||
| هيدروكسي ميثيل سلفونات الصوديوم | القصب تربية الأحياء البحرية | ClorAm-X® < / sup> 1lb حوض | الأمونيا مخفض لمزيج تغذية الطحالب |
| بيكربونات الصوديوم | فيشر S25533B العلمية | عازلة الأس الهيدروجيني لمزيج تغذية الطحالب | |
| الدقيقة تركيز الطحالب | القصب Mariculture | Rotigrow Plus ® ؛ < / sup> كيس سعة 1 لتر | تغذية روتيفر محسن من الناحية التغذوية |
| RG Complete | Reed Mariculture | RG زجاجة كاملة بسعة 6 أونصات | الكل في واحد الأعلاف القائمة على الطحالب الدقيقة للثقافات الصغيرة |
| الحجم < قوي > إعداد المياه < / قوي >< / em > | |||
| ؛ بلورات الشعاب المرجانية ملح الشعاب المرجانية | التي تضع الأسماك | 198210 | ملح لصنع مياه الاستزراع (ملاحظة: هذا البند مثال فقط ؛ يمكن استخدام أي تركيبات ملح خالية من الملوثات). |
| مقياس الانكسار | Pentair Aquatic Ecosystems | SR6 | قياس الملوحة |
| Rotifer Culture Equipment < / strong >< / em> | |||
| جامعي العوالق 12 بوصة ضياء ، 53 ميكرون | Pentair Aquatic Ecosystems | BBPC20 | شاشة شبكية لجمع |
| وسادات فرك | rotifers Pentair Aquatic Ecosystems | SCR-58 | وسادة فرك للتنظيف داخل أوعية الاستزراع |
| فرك فرشاة | |||
| دلو | Grainger Supply | 43Y530 | دلو متدرج لخلط مياه الاستزراع |
| جرة تفريخ | Pentair Aquatic Ecosystems | J30 | تخزين مزيج علف الطحالب |
| Lugol ' s الحل ، عامل مخفف | فيشر العلمي | S99481 | يستخدم لشل حركة الروتيفر الحي لعد شريحة |
| عد العوالق Sedgewick-Rafter مع الشبكة & nbsp ؛ | Pentair Aquatic Eco-Systems | M415 | عد الروتيفر< |
| م >< قوي >متنوع< قوي >< / em> | |||
| مصفاة الشاي | Kitchenworks | 971972 | تستخدم لجمع أجنة أسماك الزرد بعد التفريخ |
المراجع
- Ribas, L., Piferrer, F. The zebrafish (Danio rerio) as a model organism, with emphasis on applications for finfish aquaculture research. Reviews in Aquaculture. 6, 209-240 (2014).
- Poss, K. D. Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals. Nature reviews. Genetics. 11, 710-722 (2010).
- Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in genetics TIG. 29, 611-620 (2013).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122, 2337-2343 (2012).
- Selderslaghs, I. W. T., Blust, R., Witters, H. E. Feasibility study of the zebrafish assay as an alternative method to screen for developmental toxicity and embryotoxicity using a training set of 27 compounds. Reproductive Toxicology. 33 (2), 142-154 (2012).
- Lawrence, C. The husbandry of zebrafish (Danio rerio): A review. Aquaculture. 269, 1-20 (2007).
- Harper, C., Lawrence, C. The Laboratory Zebrafish (Laboratory Animal Pocket Reference). , CRC Press. (2010).
- Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish, A Practical Approach. , Oxford University Press. (2002).
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish. , University of Oregon Press. (2007).
- Carvalho, P., Arau, L. Rearing zebrafish (Danio rerio) larvae without live food: evaluation of a commercial, a practical and a purified starter diet on larval performance. Aquaculture Research. 37, 1107-1111 (2006).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol Rev Camb Philos Soc. 83 (1), 13-34 (2008).
- Best, J., Adatto, I., Cockington, J., James, A., Lawrence, C. A novel method for rearing first-feeding larval zebrafish: polyculture with Type L saltwater rotifers (Brachionus plicatilis). Zebrafish. 7 (3), 289-295 (2010).
- Lawrence, C. Advances in zebrafish husbandry and management. Methods in Cell Biology. 104, 429-451 (2011).
- Lawrence, C., Sanders, E., Henry, E. Methods for culturing saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) for rearing larval zebrafish. Zebrafish. 9, 140-146 (2012).
- Biology and Culture of Channel Catfish. Tucker, C. S., Hargreaves, J. A. 34, 634-657 (2004).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
