مقالة منهجية

نموذج متعدد المختبرات لشبكة تقييم السكتة الدماغية قبل السريرية للسكتة الدماغية الجلطية مع تحلل الجلطات: TE-MCAo

DOI:

10.3791/69522

⸱

ديسمبر 19, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neuroscience, Zilkha Neurogenetic Institute, Keck School of Medicine of USC, 2Department of Neurosurgery, Keck School of Medicine of USC, 3Department of Population Health Science and Policy, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Internal Medicine, Division of Hematology, Oncology and Blood & Marrow Transplantation, Carver College of Medicine, University of Iowa, 5Departments of Neurology & Neurosurgery, Carver College of Medicine, Department of Epidemiology, College of Public Health, University of Iowa, 6The Medical College of Georgia at Augusta University, 7Department of Anesthesiology, Duke University, 8University of California, San Diego, 9Department of Neurology, Yale University, 10Neurovascular Research Unit, Massachusetts General Hospital, 11Laboratory of NeuroImaging, USC Mark and Mary Stevens Neuroimaging and Informatics Institute of the Keck School of Medicine of USC, 12Department of Neurology, Keck School of Medicine of USC

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لمحاكاة السكتة الدماغية الخثرية، تم حقن الجلطة المحضرة من دم الجرذان غير المتجانس في الشريان الدماغي الأوسط، تليها إعطاء الجلطة الجهازية لإعادة التقطيع. تم تحسين هذا الإصدار من النموذج للاستخدام في شبكة مختبرات متعددة ويدعم اختبار عدة علاجات مرشحة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تؤدي نماذج السكتة الدماغية الحالية للقوارض الانتقالية إلى إحداث انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAo) باستخدام خيوط النايلون، أو الحقن من الجلطة الدماغية، أو الجلطة الداخلية داخل اللمعان، أو بطانة الأوعية الدموية 1 لمحاكاة السكتة الدماغية البشرية. من بين هذه الطرق، يحاكي حقن الجلطات الجلطية يليه تحلل الجلطات بشكل أفضل الأحداث الالتهابية العصبية التي تظهر لدى المرضى البشر، وقد يكون أفضل من طريقة خيوط النايلون الخاملة الأكثر استخداما. ومع ذلك، فإن نماذج الانصمام الخثري القياسية المستخدمة في المختبرات الفردية الرائدة قد تستغرق وقتا طويلا، وتنتج نتائج متغيرة، وتتطلب مهارة كبيرة لإتقانها. ولمعالجة هذه القيود، طورنا نموذج MCAo الجلطية الجلطية يستهدف انسداد الأوعية الدموية ويستخدم التخثر الوريدي لتحقيق إعادة التقطيع، بمحاذاة الانحلال الجهازي الذي يمارس في السيناريوهات السريرية. لتقليل عدد، طورنا طريقة لتخزين دم المتبرعة لتحضيرها لاحقا للانصمام لعدة أشخاص. استخدامنا لقسطرة دوكول الدقيقة الجاهزة يسهل تحضير الجلطات وحقنها عن طريق تحميل الجلطة في القسطرة الدقيقة التي تدرج بعد ذلك في الشريان السباتي الداخلي. لتحقيق إعادة التنقل، قمنا بحقن تينكتبلاز وريدي بجرعة 1.5 ملغ/كغ. لتعزيز قابلية التكرار، قمنا بإعداد واختبار إجراءات التشغيل القياسية والفيديوهات التدريبية وورش العمل الجراحية العملية. يستخدم النموذج نهجا جراحيا قياسيا يجب أن يكون مألوفا لجميع الباحثين الذين يستخدمون نموذج خيوط النايلون المقبول على نطاق واسع. يتم تمرير القسطرة الدقيقة إلى الشريان السباتي الداخلي البعيد، متجنبا الشريان الجناحية الحنكية، بطريقة مشابهة لإدخال خيط النايلون. قد تجرى تقييمات التعافي وما بعد السكتة الدماغية باستخدام بروتوكولات سلوكية وتصويرية وتصويرية نسيجية نموذجية. يقدم هذا النموذج نهجا عمليا، قابلا للتكرار، وسهل الوصول للباحثين الباحثين عن نموذج MCAo الانصمامي مع إعادة تقنيف محكمة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

السكتة الدماغية هي أحد الأسباب الرئيسية للوفاة والإعاقة حول العالم.1. يستفيد العديد من المرضى من التحلل الوريدي عن طريق التخثر، ويستفيد بعض المرضى المختارين من استئصال الجلطة الميكانيكية. نظرا لأن ليس كل المرضى يصلون إلى المستشفى في الوقت المناسب لإجراء انحلال الجلطة أو استئصال الجلطة، وبما أن ليس كل المرضى يستفيدون من التعافي الكامل، فلا يزال هناك حاجة كبيرة إلى تطوير علاجات إضافية أو حامية للدماغ. أكثر نماذج السكتة الإقفارية استخداما للقارض هي انسداد الشيوط الأحادية في الشريان الدماغي الأوسط (MCA) يليه إعادة تروية كاملة. يحاكي هذا النموذج انسداد الأوعية الوعائية الكبيرة (LVO)، حيث يحاكي المرضى الذين يعانون من سكتات دماغية كبيرة يخضعون لعملية استئصال ميكانيكية كاملة ناجحة. ومع ذلك، يلتقط هذا النموذج نسبة صغيرة من السكتات الدماغية السريرية. في المقابل، يعاني المزيد من المرضى من سكتات دماغية انصمامية ثانوية بسبب تصلب الشرايين (تمزق اللويحات التصلب الشرايين في الموقع أو الانصمام الشرايين الناتج عن مرض جهازي)، ويتم علاجهم بعملية الانحطاطات الجهازية فقط، والتي يفشل نموذج النايلون في تكرارها 2,3. بالإضافة إلى ذلك، يفتقر نموذج MCAo الخيطي النايلون إلى التسلسل الالتهابي المرتبط بالانسداد الجلطني 4,5. نماذج التي تستخدم جلطة الدم تليها إعطاء الجلطات الجهازية ستمثل الفيزيولوجيا المرضية والبيولوجيا الأساسية التي تحدث لدى العديد من مرضى السكتة الدماغية4،6. ومع ذلك، حتى الآن، من المعروف أن نماذج السكتة الخثرية للقوارض معقدة وصعبة التكاثر. في مختبرات معزولة مع خبراء مخصصين، يمكن تحقيق نموذج جلطية مع قابلية تكرار معقولة. هذا النموذج لا يناسب الاستخدام الواسع بسهولة، كما هو مطلوب في مشاريع متعددة المختبرات.

هنا، نقدم بروتوكولات مفصلة لنموذج إغلاق الشريان الدماغي الأوسط الجلطني المحدث والموحد (TE-MCAo) يليه نموذج الانحلال الجهازي. على وجه التحديد، قمنا بتبسيط تحضير الخثرات، وتوحيد تحميل الخثرات في القساطر، وتأكيد قابلية التوسع لهذا النموذج للتجارب المختبرية المتعددة. طورنا هذا النموذج لاستخدامه في شبكة تقييم السكتة الدماغية قبل السريرية (SPAN). لكننا كنا نعتزم أن يكون النموذج مفيدا لأي شبكة تسعى لتنفيذ تجارب شبكية ما قبل سريرية ذات حجم كبير للعلاجات الجديدة والمرشحة. باستخدام نموذجنا الموحد، تمكنا من تحفيز TE-MCAo في 6 فئران يوميا لكل موقع دراسة خلال فترة الدراسة.

نمت شبكات SPAN وما شابهها استجابة للإخفاقات المتكررة والمستمرة في تحويل حاميات الدماغ الواعدة من البيئة ما قبل السريرية إلى النجاحفي الممارسة السريرية. في عام 2019، أطلقت المعاهد الوطنية للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (NINDS) برنامج SPAN8. يهدف SPAN إلى فحص العلاجات المحتملة بشكل أكثر فعالية من خلال تقليل التحيز من خلال التمويه المركزي، والعشوائية، والتحليل المركزي الآلي للنتائج. استخدم SPAN 1 نموذج خيوط النايلون في أول نسختين له لأن جميع المختبرات المشاركة كانت تستخدمه بالفعل، وكان من السهل نشر9. لجعل SPAN نمذجة العديد من جوانب الانصمام الجلطيري وتحلل الجلطات بشكل أكثر دقة، سعى SPAN لإنشاء نموذج TE-MCAo الموضح هنا. سيكون هذا النموذج مفيدا للجراحين ما قبل السريريين الذين ينتقلون من نموذج خيوط النايلون إلى نموذج TE-MCAo. نوصي بأن تؤكد المختبرات قبل السريرية وجود السكتة الدماغية بعد 24/48 ساعة من MCAo (أو TE-MCAo) باستخدام تقنية تصوير، مثل التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI).

تم وصف شبكة SPAN بالكامل في الدراساتالسابقة 9، وجميع إجراءات التشغيل القياسية (SOPs) متاحة على موقع SPAN الإلكتروني. باختصار، تدار الشبكة من قبل مركز تنسيق (CC) يتولى توزيع الأدوية، ومراقبة جودة البيانات، والتحقق من الالتزام بالبروتوكول، والتواصل عبر الشبكة. جميع الإجراءات القياسية تتم صياغتها من قبل اللجنة المركزية ويتم الموافقة عليها من قبل لجنة توجيهية بعد المراجعة. في SPAN، جميع القوارض لديها بطاقة أذن متوافقة مع الرنين المغناطيسي عند الوصول إلى مختبرات الأبحاث، وجميع المشاركين مسجلون في قاعدة بيانات SPAN لالتقاط البيانات الإلكترونية (REDCap). يتم عشوائية من قبل اللجنة الجماعية باستخدام جداول عشوائية مصنفة حسب الموقع والجنس. في SPAN 1 وSPAN 2، تم دراسة العلاجات المفترضة من حيث الفعالية في ستة مختبرات بحثية مشاركة. تم تغليف جميع أدوية الاختبار في قوارير ذات شكل متطابق، وتم وضع علامات عليها في مركز التنسيق، وشحنها إلى مختبرات الأبحاث في بداية المشروع.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع مختبرات SPAN المشاركة، بما في ذلك مركز التنسيق في جامعة جنوب كاليفورنيا، اتبعت إرشادات NIH وAAALAC للمعاملة الإنسانية والأخلاقية للحيوانات. تم الحصول على موافقة اللجنة المحلية في جميع المواقع.

1. تحضير الثرومبوس

ملاحظة: يجب التعامل مع جميع الدماء والجلطات وفقا لجميع الإرشادات المؤسسية المحلية للمخاطر البيولوجية. يجب إما التخلص من جميع المواد التي تلامس الدم كنفايات بيولوجية خطرة أو، في حالة الأدوات الجراحية، تنظيفها وتعقيمها جيدا بواسطة المعقم الصناعي. لتقليل استخدام المتبرعة بالدم في هذه التجربة، طورنا طريقة لتخزين دم المتبرع ثم استخدام الدم لصنع جلطة الدم عند الحاجة.

  1. سحب دم متبرع جديد من شريان إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بحجم 1.5 مل أو أنابيب دقيقة لأطفال إيثيلينيديامين رباعي أسيتيك (EDTA)، مع ملء مستوى 500 ميكرولتر فقط.
    ملاحظة: نفضل القناع في الشريان الفخذي لسحب الدم، لأن الشريان الفخذي له قطر ضوئي كبير يسمح بالقسطرة، وهو ثنائي الجانب يسمح بسحب دم منفصلين، وهو جراحة قابلة للبقاء على قيد الحياة للقوارض. يمكن تخزين الدم عند 4 درجات مئوية لمدة 4 أسابيع، حسب تجربتنا.
  2. أضف 1 مل من محلول CaCl2 (5 ملغ/مل) إلى 500 ميكرولتر من الدم المخزن المضاد للتخثر.
  3. مباشرة بعد عكس مضادات التخثر باستخدام CaCl2، يتم سحب الدم من أنبوب الطرد المركزي الدقيق إلى أنبوب PE-50 بقطر 100 سم باستخدام شفط لطيف.
    ملاحظة: التأخير سيؤدي إلى تجلط الدم قبل أن يتم سحبه إلى أنبوب PE-50.
  4. حضن الأنبوب الملفوف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) عند حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين في فرن على الطاولة.
    ملاحظة: وضع طبق البتري على صفيحة ساخنة مفتوحة يؤدي إلى نتيجة غير متسقة بسبب توزيع الحرارة غير المتناسق.
  5. في نهاية فترة الحضانة التي تستغرق ساعتين، انقل فورا أنبوب PE-50 المملوء بالدم إلى درجة حرارة 4 درجات مئوية للتخزين. سيظل قابلا للاستخدام للخطوات القادمة بين 20-72 ساعة.

2. تحميل القسطرة

  1. قم بتوصيل أنبوب PE-50 الملفوف (القطر الداخلي: 0.58 مم) بحقنة 3 أو 5 سم مكعب مملوءة بالمحلول الملحي وطرد الجلطة بلطف إلى طبق بتري يحتوي على PBS.
    ملاحظة: قد يتطلب ذلك قوة كبيرة. حافظ على الضغط على موقع التوصيل لضمان عدم انفصال القسطرة والحقنة عند البثق. يمكن قطع قسطرة PE-50 إلى أجزاء أصغر (10-50 سم) إذا لزم الأمر لتسهيل البثق.
  2. قطع أجزاء من الجلطة بطول حوالي 6 سم باستخدام شفرة حلاقة.
  3. اغسل كل جزء من الجلطة بسحبها برفق داخل قسطرة PE-50 وطردها بالكامل 5 مرات.
  4. بعد ذلك، اغسل الجلطة بسحب الجلطة برفق إلى قسطرة PE-10 (قطر داخلي: 0.279 مم) وطردها بالكامل 15 مرة.
    ملاحظة: إذا حدث كسر متكرر خلال هذه الخطوة، فكر في استخدام التكبير باستخدام مجهر العمليات أو مكبرة جراحية لضمان سحب الجلطة بمحاذاة فتحة القسطرة.
  5. اختياري: استخدام زهرة إيفانز بلو لتخيل الجلمات
    1. حضر 4٪ من Evan's Blue في محلول PBS 1x.
    2. أضف 200 ميكرولتر من 4٪ من زيت إيفانز الأزرق إلى طبق بتري مملوء ب 10 مل من 1x PBS. هذا سيكون المحلول الأكثر تركيزا = تخفيف إيفان الأزرق #1.
    3. خذ 400 ميكرولتر من محلول Evan's Blue Dilution #1 وامزجه في طبق بتري منفصل مملوء ب 20 مل من 1x PBS. هذا محلول مخفف من Evan's Blue = Evan's Blue Dilution #2.
    4. ضع الجلطة في محلول إيفنز بلو بتري المحلول الأكثر تركيزا (التخفيف #1) لمدة ثانية ثم انقله إلى طبق إيفانز بلو بتري المخفف (التخفيف #2).
  6. تحميل خثرة مغسولة واحدة في قسطرة دقيقة مسبقة الصنع (القطر الداخلي: 0.2 مم، القطر الخارجي: 0.360 مم، الطول: 300 مم، متصلة بقفل لوير الأنثوي) بدون انسداد هوائي باستخدام طريقة الرطب إلى الرطب.
    ملاحظة: نوصي باستخدام التكبير (مثل عدسة 2.5x) لهذه الخطوة.
  7. بمجرد تحميل الجلطة بالكامل، قم ببثق كمية كافية من الجلطة بحيث يبقى بالضبط 5.0 سم في القسطرة الدقيقة. قم بقص الزائدة بشفرة حلاقة.
    ملاحظة: يمكن تخصيص طول الجلطة المحملة لتطبيقات مختلفة حسب حجم الضربة المطلوبة.
  8. حدد القسطرة الدقيقة 16 مم من الطرف، لتحديد مدى القسطرة التي يجب أن تتقدم داخل الضوء بعد تفرع الشريان السباتي الشائع.

3. جراحة والتخدير

  1. تحفز التخدير باستخدام 4٪ إيزوفلوران في خليط 30:70 من الأكسجين:أكسيد النيتروز والحفاظ على التخدير مع 1-2٪ إيزوفلوران في نفس خليط الغاز.
  2. أعط مسكنات الألم الكاربروفين 5 ملغ/كغ تحت الجلد وأتروبين 0.05 ملغ/كغ داخل الصفاق للحفاظ على راحة أثناء العملية.
    ملاحظة: يقوم العديد من الجراحين بحقن موقع الشق بجرعة 1.0 مل بوبيفاكائين (2.5 ملغ/مل).
  3. حافظ على درجة حرارة الجسم عند 37 ± 0.5 درجة مئوية طوال فترة الجراحة باستخدام وسادة تدفئة يتم التحكم بها بواسطة مسبار لدرجة حرارة المستقيم.

4. جمع دم المتبرع

  1. اجمع دم المتبرع عبر قسطرة شريانية عظمية. مطابقة الجنس البيولوجي للمتبرع والمتلقين.
  2. إذا كان من المقرر استخدام الدم في نفس اليوم:
    1. جهز ثلاثة أنابيب طرد مركزي بسعة 1.5 مل. ضع علامة على كل أنبوب عند علامة 500 ميكرولتر بقلم مختبر لا يمحى.
    2. جهز ثلاث مجموعات من أنابيب PE-50، كل منها بطول 100 سم، متصلة بحقنة 1.0 مل عبر إبرة غير حادة عيار 23.
  3. إذا كان من المقرر تخزين الدم للاستخدام لاحقا، حضر ستة أنابيب دقيقة لأطفال من نوع EDTA. قم بفك الأغطية لتسهيل الاستخدام لاحقا.
  4. جهز أنبوب PE-50 بطول 10.0 سم، مثبتا من أحد الطرفين بمشبك مطاطي ومشبك مشطوع في الطرف الآخر.
    1. لصنع مشبك مطاطي، أدخل قطعة واحدة من مشبك دموي قياسي في أنبوب PE-100 وقم بتقليم لتناسب الجهاز. كرر ذلك في الجانب الآخر.
    2. لجعل PE-50 مائلة بحافة مائلة، اقطع الطرف أولا بزاوية مائلة. ثم قم بقص طرف نقطة الميل باستخدام مقص دقيق.
      ملاحظة: من المهم إزالة النقطة لتجنب ثقب الجدار الخلفي للشريان بعد الإدخال، ولكن إذا تمت إزالة جزء كبير جدا من الطرف، فإن فقدان تأثير الانحناء سيجعل من الصعب جدا إدخال القسطرة داخل الفتحة.
  5. قم بإجراء قطع قياسي على الشريان الفخذي.
  6. جهز (حلق منطقة الفخذ الداخلية)، وضعه في وضعية الاستلقاء الظهرية على طاولة الجراحة. قم بتعقيم الجلد بثلاث غسلات من الإيثانول بنسبة 70٪ تليها غسولة واحدة باستخدام بيتادين أو محلول مطهر آخر.
  7. ثبت الساقين الخلفيتين بطريقة ممدودة باستخدام قيود ناعمة.
  8. قم بعمل شق عمودي في الفخذ الداخلي بطول حوالي 1.5-2 سم على طول الطية الطبيعية للتقاطع الإربي مع الساق. سيكون هذا الشق متعامدا مع المسار التشريحي المتوقع للشريان الفخذي.
  9. باستخدام تشريح حاد، قم بتحليل دقيق حتى الأوعية الفخذية. افصل الشريان الفخذي بعناية عن الوريد والعصب اللذين يمتدان في نفس الحزمة.
  10. أغلق الشريان الفخذي من البعد بشريط حرير 5-0 واستخدم ذيل الغرز لتوفير توتر خفيف من الخلف باستخدام الهيموستاتات.
  11. قم بهيكل عظمي للشريان الفخذي بأقرب ما يسمح به، مع تتبع الشريان إلى مصدره الخلفي الجهدي. ضع حلقة من حرير 5-0 بشكل فضفاض حول الشريان الفخذي واستخدم الذيل مرة أخرى لتوفير شد لطيف على الطرف القريب من الشريان. لا تشد عقدة الحرير في هذه المرحلة. هذا التوتر يسبب الارتعاش الدموي بعد إجراء عملية فتح الشريان.
    ملاحظة: يمكن تحريك الحلقة إلى الاقتراب أكثر باستخدام مشبك تمدد الأوعية.
  12. بعد حوالي ثلثي المسافة من حلقة الغرز القريبة، ضع قطعة من خياطة الحرير تحت الشريان وقم بعمل شق شريان صغير بعيدا عن الغرز الفضفاض باستخدام مقص دقيق. سيتم ربط الخيط المرتخي لتثبيت القسطرة داخل اللمعة بعد القناة الغازية.
  13. باستخدام ملقط حاد، ارفع الفتحة العلوية لفتحة الشرايين وأدخل القسطرة المشطوفة العريضة إلى الفتحة. ادفع القسطرة إلى أقرب نقطة ممكنة.
    ملاحظة: قد يكون هناك احتكاك بين القسطرة وجدار الوعاء الداخلي. هناك أمران يمكن أن يساعدا: 1) تغطية الجزء الخارجي من نهاية القسطرة بسائل مصلي من داخل الساق قبل إدخاله إلى الوعاء، و2) استخدام ملقط غير حاد ومخدد، لتثبيت الوعاء الخارجي أثناء دفع القسطرة في نفس الوقت. هذا يمنع الوعاء من التقدم مع القسطرة.
  14. بمجرد أن يتقدم طرف القسطرة تقريبا إلى نقطة الحلقة القريبة، أطلق الشد من ذيل تلك الخياطة. يجب منع النزيف بإحكام القسطرة داخل الوعاء.
  15. تقدم القسطرة بما يكفي بحيث تحيط الحلقة المرتخية بالقسطرة عند شدها. شد الغرز برفق، مع التأكد من أن الغرز لم يشد حتى يصل إلى انسداد القسطرة. أيضا، تأكد من أن الغرز ليست على حافة القسطرة، نظرا للطبيعة المدببة لهذه القسمة.
  16. حرر المشبك المطاطي. يجب أن يمتلئ القسطرة فورا بالدم.
  17. املأ أنابيب الطرد المركزي المفتوحة أو أنابيب EDTA الصغيرة للأطفال، بحيث لا تتجاوز 500 ميكرولتر في أي من مقبس التجميع.
  18. بمجرد ملء الأنابيب الدقيقة، أزل قسطرة PE-50 من الشريان الفخذي، وربط الطرف القريب، وأغلق الشق بخياطة برولين 5-0 متقطعة.
  19. إذا كان من المقرر استخدام الدم لاحقا، ضع الأغطية على أنابيب EDTA للأطفال المملوءة واحتزنها عند 4 درجات مئوية.
  20. إذا كان من المقرر تجهيز الجلطة للاستخدام في نفس اليوم، تابع الخطوة 1.2 أعلاه.
  21. كرر فورا مع أنابيب الطرد المركزي المتبقية.
  22. قد يعاد المتبرعون بالدم الشرياني إلى الجسم الحيوي بعد التعافي من التخدير إذا تم إجراء قسطرة أحادية الجانب. يمكن قسطرة الشريان الفخذي المقابل لاحقا، ولكن بعد القسطرة الثنائية الشريان الفخذي، يجب أن يتم القتل الرحيم للمتبرعين وفقا للوائح IACUC.

5. تي-ماكاو

ملاحظة: يستخدم نهج TE-MCAo القطع القياسي على الشريان السباتي الشائع. اختيار التخدير والنهج المختصر يعود للمستخدم. يبدأ البروتوكول هنا من النقطة التي يكون فيها الجراح قد عزل بالفعل الشريان السباتي المشترك (CCA)، والشريان السباتي الداخلي (ICA)، والشريان السباتي الخارجي (ECA).

  1. اعرض CCA واسحب بشريط حرير 3-0. افعل الشيء نفسه مع ECA وICA.
  2. باستخدام رباط أو كي، كشف وإغلاق الشريان القذالي.
  3. كشف وسحب أو إغلاق الشريان الجناحية الحنكية (PPA).
    ملاحظة: مع اكتساب خبرة كافية، يمكن استثناء هذه الخطوة. نوصي دائما بتنفيذ هذه الخطوة عند تعلم الإجراء.
  4. باستخدام سحب لطيف، انقل ECA وICA إلى تكوين "T".
  5. اربط رباط CCA فقط بعد الانتهاء من جميع الخطوات السابقة.
  6. قم بعمل شق الشرايين في ECA (منهجية Zea Longa CCA المفتوحة10) باستخدام المقص الدقيق.
  7. باستخدام طريقة الحافة العريضة الموضحة في الخطوة 4.4.2، جهز طرف أحد القسطرة الدقيقة المحملة مسبقا (القطر الداخلي: 0.2 مم، القطر الخارجي: 0.360 مم، الطول: 300 مم، متصل بقفل لوير الأنثوي).
  8. أدخل القسطرة الدقيقة بحذر مع جلطة محملة مسبقا في ECA. قم بفك حلقة تقييد ICA وتقدم القسطرة الدقيقة داخل الجمجمة إلى 16 مم عند انقسام السباتي تحت الرؤية المباشرة لتجنب الانتقال غير المقصود لعضلة PPA خارج الجمجمة.
    ملاحظة: إذا كانت القسطرة تفضل الدخول إلى CCA، فإن الضغط اللطيف باستخدام أداة تطبيق قطنية مدببة قد يساعد في توجيه القسطرة المتقدمة نحو ال ICA.
  9. ثبت القسطرة الدقيقة داخل اللوئية على ICA وCCA باستخدام حرير 3-0، مع الحذر من عدم شد أكثر من اللازم.
  10. حقن 20 ميكرولتر في حقنة 1 مل بمضخة حقنة آلية بمعدل 10 ميكرولتر/دقيقة لمدة دقيقتين.
    ملاحظة: عادة لا تتقدم مضخة الحقنة في البداية حتى يتراكم ضغط كاف.
  11. حقن 20 ميكرولتر إضافي من محلول ملحي معقم باستخدام نفس إعدادات المضخة.
    ملاحظة: خلال دراسة تدفق الدم باستخدام التصوير المرقط بالليزر، وجدنا نجاحا بنسبة 100٪ مع تدفق 20 ميكرولتر.
  12. قم بإزالة القسطرة الدقيقة وربط القسطرة الدقيقة بشكل دائم باستخدام خياطة قريبة من موقع فتح الشريان. أزل جميع حلقات التقييد. راقب جيدا أي تسرب دم وثبته بأربطة إضافية إذا لزم الأمر.
  13. أغلق الشق الجلدي مؤقتا بدبابيس أو بخياطة برولين 5-0 المستمرة.
  14. أخرج من التخدير وضعه في قفص دافئ للتعافي.
  15. اختياري: قد تستخدم المختبرات قياس تدفق دوبلر بالليزر لتأكيد نجاح انسداد MCA. بدلا من ذلك، يمكن الحصول على تصوير بالرنين المغناطيسي عند 24 أو 48 ساعة لتأكيد وقياس الاحتشاء الدماغي.
    ملاحظة: يفضل العديد من المستخدمين إعطاء 1.5 مل من محلول رينجر الملحي أو الحلي تحت الجلد عند انتهاء الجراحة.

6. التحلل الجلطية الجهازي

ملاحظة: يمكن شراء تينكتيبلاز (TNK، 1.5 ملغ/مل) لاستخدامه كعملية تحلل جثمية جهازي. قد يفضل المستخدمون وكلاء ليتيك آخرين. يتم إعادة تكوين القوارير الفردية بسعة 50 ملغ ب 50 مل من الماء المقطر، ثم يتم جمع 2.5 مل بدقة إلى قوارير بسعة 3.0 مل. يمكن تجميد الأليكوات عند -20 درجة مئوية لاستخدامها لاحقا. استقرار منشط البلازمينوجين المعاد تركيبه المعاد تشكيله المخزن عند -20 درجة مئوية هو 60 يوما11.

  1. قم بإذابة قطعة مجمدة من TNK لكل موضوع. إذابته في درجة حرارة الغرفة لمدة حوالي 15 دقيقة.
  2. باستخدام حقنة سعة 1 سي سي، اسحب بالضبط 1.5 ملغ/كجم. على سبيل المثال، فأر يزن 300 جرام سيحتاج إلى 0.45 ملغ.
  3. أعد تخدير وأزل الإغلاق المؤقت للجلد.
  4. كشف أي فرع من الوريد الوداجي الخارجي.
    ملاحظة: يمكن استخدام وريد الذيل إذا كان المختبر أكثر راحة مع هذا المسار. فضلنا استخدام الوريد الوداجي لأن جراحي SPAN يشعرون براحة أكبر مع تحريك الأوردة الوداجي الخارجية، ويتم ذلك بشكل روتيني في نموذج الخيط لدينا.
  5. باستخدام إبرة 30 أو 32 جيلون، أوصل TNK عن طريق الثقب المباشر في الوريد.
    ملاحظة: في البداية، قد يرغب المستخدمون في عزل الوريد بين 3-0 حلقات حريرية. مع الممارسة، لن يكون هذا ضروريا.
  6. أغلق الشق بقطع 5-0 برولين أو أي خياطة غير قابلة للامتصاص أخرى.
  7. أعد إلى قفص التعافي كما في الخطوة 5.14.

7. الطرق الإحصائية

  1. لعمل الإحصاءات الوصفية، استخدم المتوسط والانحراف المعياري للبيانات الرقمية الموزعة بشكل طبيعي، واستخدم النطاق الوسيط والرباعي للبيانات غير الموزعة بشكل طبيعي. قدم البيانات التصنيفية كتوزيعات ترددية. لاختبار الفرضيات، تطبيق اختبار t أو ANOVA حسب المناسب للبيانات البراميترية الموزعة بشكل طبيعي؛ وإلا، لا تجري اختبار الفرضيات.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 1: جمع الدم من المتبرعة والتحضير للجلطة. تم سحب الدم من المتبرع عبر قسطرة الشريان الفخذي ونقله إلى أنبوب طرد مركزي دقيق يمكن تخزينه حتى 4 أسابيع أو بدون استخدام EDTA (الاستخدام في نفس اليوم). لتحضير الجلطة، أضيف محلول كلوريد الكالسيوم إلى أنابيب الدم المخزنة وتم استنشاقه فورا إلى قسطرة PE-50. تم حضن أنبوب PE-50 الملفوف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) عند حرارة 37°C لمدة ساعتين في فرن طاولة. بعد ساعتين، تم نقل أنابيب PE-50 المملوءة بالدم فورا إلى 4°C للتخزين. راجع القسم 1 في البروتوكول لمزيد من المعلومات. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-2
الشكل 2: تحميل الجلطة في القسطرة للحقن. (أ) في يوم جراحة MCAo، تم إخراج جلطة من أنبوب PE-50 إلى طبق بتري يحتوي على متلازمة PBS. (ب) في طبق البتري، كان يقص التخثر إلى حوالي 6 سم طوله باستخدام شفرة حلاقة. (ج) تم غسل ثرومبوس بأنابيب PBS عن طريق سحبها إلى أنبوب PE-50 وطرده 5 مرات ثم إلى أنبوب PE-10 15 مرة. (د) تم نقل ثرومبوس إلى طبق بتري يحتوي على محلول إيفان الأزرق المركز. (ه) تم نقل ثرومبوس إلى طبق بتري يحتوي على محلول إيفانز بلو المخفف وتم تحميله في قسطرة دقيقة مسبقة الصنع. (و) تم دفع القسطرة الدقيقة عبر الشريان السباتي الداخلي للجرذ حتى مر 16 مم من طرف القسطرة من تفرع الشريان السباتي المشترك وحقنه باستخدام مضخة حقنة محركة. راجع القسم 2 في البروتوكول لمزيد من المعلومات. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل. 

في دراسة جدوى تجريبية، قمنا بتسجيل 135 شخصا في 6 مختبرات بحثية. على الرغم من أن المشاركين تم تقسيمهم عشوائيا إلى واحدة من 8 علاجات، إلا أننا نقدم هنا تقريرا مجمعا فقط لتوضيح جدوى النموذج. من بين 135 شخصا مسجلا، تم إعطاء TNK بالجرعة والوقت الصحيحين في 132 (98٪). تم إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي بعد 3 أيام من TE-MCAo في 102 (75٪) بسبب وفاة قبل الفحص في 33 (24٪). كان فقدان قبل اليوم الثالث ثابتا في جميع المختبرات الستة (الجدول 1)، مما يشير إلى أن النموذج يمكن نشره في مواقع متعددة. كان متوسط حجم الإصابة في العضلات الصلبية ± 13 ± 16٪ (تشمل منطقة الآفة نقص التروية والوذمة كنسبة مئوية من نصف الكرة النفسي) مع بعض التفاوت بين المختبرات (الجدول 2). يمكن رؤية صور MR التمثيلية والجلمات بعد الوفاة في الشكل التكميلي 1.

المختبر
المتغيرالمدعي العامدي كيIWMGSDYL
حجم العينة (N)233011282419
تم إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي19249231413

الجدول 1: الجدوى حسب المختبر. كانت مختبرات الدراسة هي جامعة أوغوستا (AG)، ديوك (DK)، جامعة أيوا (IW)، مستشفى ماساتشوستس العام (MG)، جامعة سان دييغو (SD) وجامعة ييل (YL). تم عرض عدد المسجلة (N) وعدد النجات التي نجت لإجراء فحص بالرنين المغناطيسي في اليوم الثالث بعد السكتة الدماغية. تدعم هذه البيانات جدوى النموذج.

الموقعحجم العينة (N)حجم الآفة (٪) متوسط ± SDمؤشر التحول في منتصف الخط (٪)
مين ± SD
المدعي العام1911 ± 1411 ± 12
دي كي2418 ± 1719 ± 13
IW908 ± 1313 ± 12
MG2309 ± 1115 ± 17
SD1314 ± 2104 ± 19
YL1218 ± 2214 ± 15

الجدول 2: حجم الآفة التي شوهدت في فحوصات اليوم الثالث بالرنين المغناطيسي، حسب الموقع. لتحديد قابلية تكرار النموذج عبر ستة مواقع دراسة، تم مقارنة حجم الآفة (نقص التروية مع الوذمة) وانحراف الخط الأوسط. يعبر عن حجم الآفة كنسبة نسائية من نصف الكرة النفسي المقابل. يعبر عن إزاحة الخط الأوسط كنسبة خطية من أقصى عرض للمساحة داخل الجمجمة. تؤكد البيانات التباين بين المختبرات.

الشكل الإضافي 1: صور تمثيلية. (A-E) صور متعددة الصدى ومتعدد المسح (MEMS) لأدمغة الفئران التقطت بعد 48 ساعة من TE-MCAo. الأقسام تقع تقريبا بمقدار 1 مم أمام البريغما. (ف-ج) عدة أمثلة على الانسداد الداخلي المثبت في أصل MCA. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الشكل.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قمنا بتحسين نموذج القوارض الخثرية للسكتة الدماغية الإقفاري لاستخدامه في شبكة اختبارات ما قبل سريرية متعددة المختبرات، SPAN. قللنا بشكل كبير من عدد المستخدمة من خلال تطوير طريقة لتخزين دم المتبرعين لاستخدامها لاحقا. كما قمنا بتبسيط تحضير الجلطة والنهج الجراحي لتسهيل إجراء عدة إجراءات MCAO في يوم واحد. هدفنا هو أن يصل TE-MCAo إلى نفس مستويات راحة المستخدم وحجم العمليات الجراحي الممكنة مع نسخة الخيوط النايلون المستخدمة على نطاق واسع من MCAo. لتحقيق هذه النتيجة، عقدنا ورشتين تدريب شخصي للجراحين، وكان جميع الجراحين المشاركين في هذه الدراسة لديهم بالفعل عدة أشهر، إن لم يكن سنوات، من الخبرة مع نموذج الخيط الأكثر قياسية. أثبتنا الجدوى عبر ستة مختبرات بحثية مختلفة وأظهرنا التزاما ممتازا بالبروتوكولات.

عند اختيار تنفيذ هذا البروتوكول، يجب على الباحث أن يأخذ في الاعتبار العناصر التالية التي تحدد نجاح البروتوكول. أولا، العناية الدقيقة في جمع الدم ستؤثر على نجاح تكوين الجلطمات. يجب جمع الدم الشرياني وليس الوريدي لتجنب التجلط المبكر. ثانيا، من المهم جمع كمية دم أكثر مما يبدو ضروريا. أحيانا تفشل عينة واحدة في التخثر خلال الليل، بينما تفشل العينات الأخرى. ثالثا، نوصي بشدة بأن يتم تحميل القسطرة باستخدام التكبير البصري، سواء باستخدام عدسة جراحية مع مصباح رأس أو عدسة مكبرة مع إضاءة. رابعا، التشريح الحذر والحذر لاختبارات CCA وICA وECA ضروري لتجنب التمزق والجلطة داخل الأوعية الدموية. كما أنه من الضروري تصور قسطرة PPA لضمان دخول قسطرة الولادة إلى ICA بشكل صحيح. خامسا، من النادر رؤية أي آثار جانبية في القوارض بسبب حقن الجلطمات. في دراساتنا، لم نر أي أحداث جانبية، مثل الوذمة الوعائية أو النزيف المحيطي، بعد حقن TNK. هذا لا يعني أنه غير ممكن، لكننا لا نعلم بأي تقارير عن آثار جانبية جهازية للخثرات في القوارض. قد ينصح الباحث الذي يختار تنفيذ هذا البروتوكول لأول مرة بالتشاور مع أحد الباحثين المذكورين كمؤلف مشارك هنا، حيث وجدنا أن التعليم الشخصي مفيد جدا.

عند اختيار نموذج مرض حيواني لاختبار العلاجات المرشحة، من المهم تمثيل مجموعة المرضى التي يقصد بها الدواء علاجها بدقة. تشمل نماذج السكتة الدماغية الإقفاري البؤرية نماذج الجلطة الضوئية من روز بنغال، وانسداد الشريان القشري القشري، وحقن بطانة البطانة 1 المجسمة 13,14,15. تتميز هذه النماذج بخلق آفات قابلة للتكرار في مناطق متوقعة من القشرة. هذه الميزة تجعلها مفضلة في دراسات الآليات الخلوية، أو في ربط موقع الآفات بالنتائج السلوكية. التكلفة الإضافية، والتعقيد، ونقص مكون إعادة التروية تجعلها أقل فائدة في فحص الأدوية.

MCAo مع الخيط الأحادي داخل السطح أو الانصمام الخثاري هي النماذج المفضلة المعتمدة لانسداد الأوعية الكبيرة (LVO)10,16,17. نموذج الفتيل الأحادي المطلي بالسيليكون بسيط التنفيذ ويستخدم على نطاق واسع. على الرغم من أن موقع وحجم الآفة أقل قابلية للتنبؤ، إلا أن هذا التباين يعتبر ميزة في اختبارات الأدوية واسعة النطاق لأن السكتات البشرية أيضا متجانسة إلى حد كبير18,19. من عيوب طريقة المونوفلامنت أن الانسداد غير خامل بيولوجيا. في المرضى، ينتج عن الجلطات وتحلل الجلطات سلسلة التهابية مرتبطة بإفراز الثرومبين، البلازمينجين، وعناصر أخرى من الجلطات20،21،22. لتجاوز هذا القيد، اقترح الكثيرون نماذج للجلطة الخثارية في دراسات الأرانب والخنازير والرئيسيات غير البشرية23، 24، 25، 26، 27. هذه الدراسات معقدة وتتطلب خبرة متخصصة بشكل عام. ومع ذلك، سعينا لتكييف نموذج الجلطات الخثرية لاستخدامه في شبكة الاختبارات متعددة المختبرات قبل السريرية. تطلب ذلك تبسيط تحضير الجلطة الجلدية، وتبسيط النهج الجراحي، وتقليل عدد المطلوبة بشكل كبير. قمنا بتطوير نموذج للجلطات الخثرية، وهو TE-MCAo، يمكن نشره بنجاح في ستة مختبرات مختلفة مع التزام ممتاز بالبروتوكول (الجدول 1) وحجم آفة متسق إلى حد معقول (الجدول 2). كان معدل الإنتاجية كافيا، حيث بلغ متوسط 6 مواضيع في الأسبوع.

هناك عدة خطوات لاستكشاف الأخطاء قد تكون مفيدة. فشل الدم في التخثر هو المصدر الأكثر شيوعا لفشل البروتوكولات، وغالبا ما يكون بسبب تلوث القسطرة الجاهزة ب EDTA أو الهيبارين إذا وضعت على طاولة الجراحة. نوصي بتقنية جمع دقيقة دقيقة. نوصي أيضا بتحضير محلول كلوريد الكالسيوم المستخدم لتعطيل EDTA طازجا كل أسبوع أو كل أسبوعين. بعد إخراج الجلطة من قسطرة التحضير، قد يكون من الصعب تقطيع الجلطة إلى القطع المطلوبة بحجم 5 سم. بعض الجلطات هشة وسهلة الكسر. نوصي بتحضير الجلطات بتكبير البصر، وفي الحالات القصوى، الانتقال إلى جلطة متبرعة أخرى. يتطلب استنشاق وسحب الجلثات مستوى متوسط من المهارة؛ لذا نوصي بفترة تدريب طويلة جدا. تأكد من أن طرف قسطرة الشفط خال من العقبات باستخدام التكبير البصري. يمكن حشر الجلطات في قسطرة الزرع - نوصي بالتناوب اللطيف بين الشفط والاستنساخ. بالنسبة للجراحين ذوي الخبرة في نموذج خيوط MCAo النموذجي، قد يكون تحديد PPA خطوة جديدة. نوصي بشدة بتسمية الجلطة باللون الأزرق إيفان، حتى يمكن تتبع القسطرة ومتابعتها أثناء صعودها عبر ICA. يمكن تحديد تفرع ICA/PPA بسهولة من خلال تشريح عميق ودقيق بعد ال ICA، وهو موجود بشكل موثوق عميقا في فرع رقيق من العصب السباتي الداخلي.

هذا البروتوكول يأتي مع بعض القيود. هناك عنصر من المهارة الجراحية اللازم لإجراء قنيب الشرايين السباتي القوارض. ومع ذلك، ينطبق هذا أيضا على نموذج الخيط. التعامل مع جلطات الدم يتطلب أيضا مهارة جراحية. كما هو الحال مع جميع نماذج الانصمام الخثري، هناك معدل احتشاء ناجح أقل مقارنة بنموذج الخيط. إذا كان هدف التحقيق هو حدوث حوادث احتشاء أكثر تكرارا، فسيكون نموذج الخيط مفضلا. من ناحية أخرى، إذا كان الهدف هو تكرار الجلطات وتحلل الجلطات فهذا النموذج مرغوب فيه.

يهدف هذا النموذج إلى اختبار الواقيات الدماغية المرشحة باستخدام نموذج يستخدم الجلطات وتحلل الجلطات بدقة. قد تشمل الاتجاهات المستقبلية أيضا دراسات العلاج المساعد التي تستهدف ظاهرة عدم إعادة التدفق. اقترح الكثيرون مضادات تخثر وعوامل مضادة للصفيحات الدموية لهذا الغرض.

في الختام، تم تعديل بروتوكول TE-MCAo المعروض هنا للسماح بالنشر في مختبرات متعددة. قمنا بتبسيط تحضير الجلطات وجعلنا الطريقة الجراحية مبسطة. ابتكرنا طريقة لتخزين دم المتبرعين، مما قلل بشكل كبير من عدد المطلوبة.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تبلغ PL عن الدخل من Apex Innovations للاستشارات. لدى CA اتفاقيات استشارية مع BioAxane Biosciences ومستشفى Charite في برلين، وهي عضو في مجلس استشاري علمي مع Neurelis. إل هو محقق خاص في تجربة سريرية لاختبار OX1، منتج قائم على حمض اليوريك من شركة فري أوكس بيوتيك (Freeox Biotech). لا يوجد مؤلفون آخرون لديهم إفصاحات.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل منح من المعاهد الوطنية للصحة الأمريكية (NIH): تحت 24 NS113452 وتحت 24 NS130600 (PL)؛ U01NS113388 (AKC وECL)؛ UE5 RPPR 5UE5NS099008 (ML); U01NS130588 (كاليفورنيا)؛ U01NS130590، (DH، MK، KD)؛ U01NS130598 (الثانوية)؛ 1U01NS130557 (BH); U01NS130585 (LS).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حقنة بحجم 1 ملBD309628
عدسة 10x
حقنة 1ccتيروموSS-01T
إبرة غير حادة بحجم 23 جرامغراينجر5FVK7
حقنة 3.0 سم مكعبBD309656
رباط حرير 3-0
إبرة 30 جرامBD305128
5-0 برولين سوتيرإثيكون8698لإغلاق القطع الجلدي
رباط حرير 5-0إثيكونA182
مشبك التمدد الشريان
كبريتات الأتروبينالطبيب البيطريNDC86136-006-10تقليل الإفرازات القصبية
ملقط مخدود غير حاد
بوبيفاكينشركة زيليا للأدويةNDC70594-118-01المخدرات الموضعية
كلوريد الكالسيومسيغماC7902
الكاربروفينشركة زويتيسNADA #141-199مسكن الألم
أنابيب الطرد المركزيإبندورف22364111لجمع الدم
الإيثانولكوبتكUN1170
إيفان' s BlueسيغماE2129
وسادة التدفئةجهاز هارفاردK021-435
مشبك دموي
إيزوفلورانالطبيب البيطريNDC13985-528-60
حلقات النسج النهائية من صنع نفسيمجموعات هورايزنغير قابل للتطبيقالقيود اللينة
المقص الدقيقف.إس.تي.15000-00
القسطرة الدقيقةشركة دوكولPE-FL-360-200-300قساطر حقن مسبقة الصنع
قسطرة PE-10BD427401
أنابيب PE-100إنتراميدك7426
أنابيب PE-50BD427410
أنابيب EDTA للأطفالBD MicrotainerK2E-363706دم المتبرع في المخزن
طبق بتريإبندورف30702115
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتفيشرB2438
بريفانتيكسPDI Inc.NDC10189-1080-1المطهر
عود قطنVWR89031-288
شفرة الحلاقةأكيوتيك برو71960
المحلول الملحيهوسبيرا، إنك.NDC 0409-4888-02
المقصف.إس.تي.14958-11
الملقط الحاد
مضخة الحقنةشركة نيو إيرا بومبز إنك.BS-300
فرن الطاولةبوكل132000
تينكتبلاس (TNK)جينينتيك، سان فرانسيسكوNDC50242-120-47الانحلال الجلطاني
بطاقة الأذنمختبر RapID، سان فرانسيسكو، كاليفورنيا علامات RapID

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GBD 2021 Causes of Death Collaborators. Global burden of 288 causes of death and life expectancy decomposition in 204 countries and territories and 811 subnational locations, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet. 403 (10440), 2100-2132 (2024).
  2. Saini, V., Guada, L., Yavagal, D. R. Global epidemiology of stroke and access to acute ischemic stroke interventions. Neurology. 97 (20 Suppl 2), S6-S16 (2021).
  3. Adams, H. P. Jr Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment. Stroke. 24 (1), 35-41 (1993).
  4. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp Transl Stroke Med. 1 (1), 8(2009).
  5. Zhang, Z., Chopp, M., Zhang, R. L., Goussev, A. A mouse model of embolic focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 17 (10), 1081-1088 (1997).
  6. Sokolowski, J. D., et al. Preclinical models of middle cerebral artery occlusion: new imaging approaches to a classic technique. Front Neurol. 14, 1170675(2023).
  7. National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke. N Engl J Med. 333 (24), 1581-1587 (1995).
  8. Lyden, P. D., et al. The Stroke Preclinical Assessment Network: rationale, design, feasibility, and stage 1 results. Stroke. 53 (5), 1802-1812 (2022).
  9. Lyden, P. D., et al. A multi-laboratory preclinical trial in rodents to assess treatment candidates for acute ischemic stroke. Sci Transl Med. 15 (714), eadg8656(2023).
  10. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  11. Davis, S. N., Vermeulen, L., Banton, J., Schwartz, B. S., Williams, E. C. Activity and dosage of alteplase dilution for clearing occlusions of venous-access devices. Am J Health Syst Pharm. 57 (11), 1039-1045 (2000).
  12. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  13. Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7 (5), 398-406 (2012).
  14. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Ann Neurol. 17 (5), 497-504 (1985).
  15. Ansari, S., et al. Endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser Doppler flowmetry guidance in rat. J Vis Exp. (72), e50014(2013).
  16. Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A rat model of focal embolic cerebral ischemia. Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).
  17. Koizumi, J. Experimental studies of ischemic brain edema. 1. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
  18. Morais, A., et al. Embracing heterogeneity in the multicenter Stroke Preclinical Assessment Network (SPAN) trial. Stroke. 54 (2), 620-631 (2023).
  19. Voelkl, B., Vogt, L., Sena, E. S., Wurbel, H. Reproducibility of preclinical animal research improves with heterogeneity of study samples. PLoS Biol. 16 (2), e2003693(2018).
  20. Ye, F., Garton, H. J. L., Hua, Y., Keep, R. F., Xi, G. The role of thrombin in brain injury after hemorrhagic and ischemic stroke. Transl Stroke Res. 12 (3), 496-511 (2021).
  21. Lee, S. R., Wang, X., Tsuji, K., Lo, E. H. Extracellular proteolytic pathophysiology in the neurovascular unit after stroke. Neurol Res. 26 (8), 854-861 (2004).
  22. Lo, E. H., Wang, X., Cuzner, M. L. Extracellular proteolysis in brain injury and inflammation: role for plasminogen activators and matrix metalloproteinases. J Neurosci Res. 69 (1), 1-9 (2002).
  23. Kaufman, H. H., Anderson, J. H., Huchton, J. D., Woo, J. A new canine model of proximal internal carotid embolism. Stroke. 10 (4), 415-418 (1979).
  24. Gralla, J., et al. A dedicated animal model for mechanical thrombectomy in acute stroke. AJNR Am J Neuroradiol. 27 (6), 1357-1361 (2006).
  25. Thomas, G. R., et al. Optimized thrombolysis of cerebral clots with tissue-type plasminogen activator in a rabbit model of embolic stroke. J Pharmacol Exp Ther. 264 (1), 67-73 (1993).
  26. Wu, D., et al. A clinically relevant model of focal embolic cerebral ischemia by thrombus and thrombolysis in rhesus monkeys. Nat Protoc. 17 (9), 2054-2084 (2022).
  27. Kuge, Y., et al. Serial changes in cerebral blood flow and flow-metabolism uncoupling in primates with acute thromboembolic stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 21 (3), 202-210 (2001).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة