فعالية علاجية لليزر إكسيمر 308-نانومتر مع ماترين في البهاق عن طريق تعديل الغلوبولينات المناعية في المصل والسيتوكينات الالتهابية

ملخص

وقد أدى الاستخدام المشترك لليزر إكسايمر 308 نانومتر وماترين الفموي إلى تعزيز إعادة تصبغ الخلايا البيضية بشكل ملحوظ من خلال تعزيز تجديد الخلايا الصبغية واستعادة توازن المناعة. هذا العلاج المزدوج النمط قلل من السيتوكينات الالتهابية، وطبيع الغلوبولينات المناعية، وارتفاع IL-10، وحقق فعالية سريرية فائقة مع سلامة ممتازة وتحمل للمرضى.

الملخص

البهاق هو اضطراب مزمن في إزالة التصبغ المناعي الذاتية يتميز بفقدان الخلايا الميلانوسانية الوظيفية وتنشيط مناعي شاذ. على الرغم من التقدم في العلاج الضوئي، لا تزال الاستجابات السريرية غير متسقة، ويرجع ذلك إلى حد كبير إلى النشاط الالتهابي المستمر وضعف تنظيم المناعة. بحثت هذه الدراسة في الفعالية العلاجية والآليات المناعية لدمج العلاج الضوئي بالليزر إكسيمر بتقنية 308 نانومتر مع الماترين الفموي، وهو قلوي طبيعي يتمتع بخصائص مضادة للالتهابات وتنظيم المناعة. تم تعيين 232 مريضا مصابين بالبهاق غير القطاعي بشكل مستقبلي لتلقي إما العلاج الأحادي بالليزر إكسيمر أو العلاج المركب لمدة 12 أسبوعا. تم تقييم التحسن السريري باستخدام مؤشر تقييم منطقة البهاق (VASI)، وتم تحليل غلوبولينات المناعة والسيتوكينات في الدم لتقييم التعديل المناعي الجهازي. كلا النظامين أنتج تصبغا ملحوظا، ومع ذلك حقق العلاج المركب انخفاضا أكبر في معدل VASI (من 9.72 ± 3.24 عند البداية إلى 5.76 ± 2.18 بعد العلاج) مقارنة بليزر إكسيمر وحده (من 9.68 ± 3.37 إلى 6.63 ± 2.34، الصفحة < 0.001). كانت نسبة المرضى الذين أظهروا إعادة تصبغ ممتازة أو جيدة أعلى بشكل ملحوظ مع النظام المشترك (76.7٪) مقارنة بالعلاج الأحادي (58.7٪). بالتوازي، انخفضت مستويات IgG في المصل بشكل ملحوظ (13.72 ± 2.64 جم/لتر إلى 11.85 ± 2.18 جم/لتر، p < 0.001)، في حين ارتفعت مستويات IgA بشكل طفيف (2.07 ± 0.68 جم/لتر إلى 2.23 ± 0.61 جم/لتر، p = 0.041). انخفضت السيتوكينات المضادة للالتهابات بما في ذلك IFN-γ وIL-17 بشكل ملحوظ ( كلاهما p < 0.001)، بينما ارتفع IL-10 المضاد للالتهاب من 8.3 ± 3.2 إلى 12.9 ± 3.5 بيغم/مل (p < 0.001). ارتبط تحسن VASI بشكل عكسي مع تغيرات IFN-γ (r = –0.482، p < 0.05) وIL-17 (r = –0.451، p < 0.001)، وبشكل إيجابي مع ارتفاع IL-10 (r = 0.503، p < 0.001). تظهر هذه النتائج أن الماترين يعزز فعالية ليزر إكسيمر من خلال تعزيز تجديد الخلايا الصبغية واستعادة التوازن المناعي، مما يؤسس استراتيجية ثنائية النمط قائمة على المؤشرات الحيوية لإدارة البهاق بدقة ودائمة.

المقدمة

البهاق هو اضطراب جلدي مزمن مكتسب ومتأثر بإزالة التصبغ يتميز بالتدمير الانتقائي أو الخلل في خلايا الميلانوسيا الجلدية، مما يؤدي إلى تطور بقع بيضاء محددة جيدا ذات أحجام وتوزيع متغيرين. يؤثر على حوالي 0.5٪–2٪ من سكان العالم، دون تمييز جنسي أو عنصري، وغالبا ما يظهر قبل سن 30 ^1,2. على الرغم من أن المرض ليس مهددا للحياة، إلا أنه يفرض عبئا نفسيا وعاطفيا كبيرا، مما يؤثر بشكل كبير على تقدير الذات، والوظائف الاجتماعية، وجودة الحياة³. يبقى مسببات البهاق متعددة العوامل وغير واضحة بشكل كامل، وتشمل الاستعداد الجيني، والإجهاد التأكسدي، وردود الفعل المناعية الذاتية، والعوامل العصبية العرقية⁴. أكدت الأدلة الحديثة بشكل خاص على الدور المحوري لاضطراب تنظيم المناعة في بدء واستمرار تدمير الخلايا الميلانوسياوية ^5,6. في البشرة، تتعرف الخلايا اللمفاوية السامة في CD8⁺ على مستضدات الخلايا الصبغية مثل التيروزيناز وgp100، وتطلق البرفورين والجرانزيم B لتحفيز الاستماتة⁷. في الوقت نفسه، تعمل السيتوكينات الالتهابية، بما في ذلك الإنترفيرون-γ (IFN-γ)، وعامل نخر الورم-α (TNF-α)، والإنترلوكين-1β (IL-1β)، وIL-6، وIL-17، في تضخيم سلسلة الالتهابات، وتعيق بقاء الخلايا الصبغية، وتثبط هجرة خلايا الصبغة⁸. يساهم الخلل بين الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) والخلايا التائية المؤثرة في تنشيط المناعة المستمر وفقدان الخلايا الميلانوسياوية⁹. لذا، فإن الاستراتيجيات العلاجية التي تهدف إلى تعزيز تجدد الخلايا الصبغية وإعادة تأسيس التوازن المناعي ذات أهمية سريرية كبيرة.

بعيدا عن التشوهات المناعية المحلية، تشير الأدلة المتزايدة إلى أن البهاق يمثل حالة مناعية ذاتية جهازية. تم توثيق تغيرات مستويات الغلوبولينات المناعية في المصل (IgG، IgA، وIgM) لدى المرضى، مما يعكس تنشيط الخلايا البائية العامة والمناعة الأخلاطية غير الطبيعية^10,11. قد يسهل إنتاج الغلوبولين المناعي غير المنظم تكوين الأجسام المضادة الذاتية ضد المستضدات الخاصة بالخلايا الميلانوية، مما يزيد من تلف الأنسجة. علاوة على ذلك، غالبا ما تظهر بيئة السيتوكينات لدى مرضى البهاق ارتفاعا في IFN-γ وTNF-α وIL-6 وIL-17 وIL-23، مما يشير إلى تنشيط مناعي جهازي يتجاوز الجلد الآفي^12,13. لا تعمل هذه الوسائط المناعية فقط كمحركات ممرضة، بل ترتبط أيضا بنشاط المرض والاستجابة العلاجية، مما يضعها كمؤشرات حيوية محتملة^{لمراقبة} العلاج. لذلك، قد تقدم التدخلات القادرة على استعادة توازن المناعة — من خلال تعديل الاستجابات المناعية الخلوية والخلاطية — نتائج سريرية متفوقة ودائمة. على الرغم من توفر الكورتيكوستيرويدات الموضعية، ومثبطات الكالسينورين، ومثبطات المناعة الجهازية، والعلاج الضوئي، إلا أن فعالية العلاج لا تزال غير مرضية للعديد من المرضى، خصوصا أولئك الذين يعانون من مرض واسع النطاق أو مقاوم للعلاج¹⁵. وبالتالي، اكتسبت الأساليب المركبة التي تستهدف عدة آليات فسيولوجية مرضية شعبية في السنوات الأخيرة.

لطالما كان العلاج الضوئي حجر الأساس في إدارة البهاق. من بين الأساليب المختلفة، برز ليزر الإكسيمر 308 نانومتر (EL) كأحد أكثر الخيارات استهدافا وفعالية للبهاق^{الموضعي 16,17}. ينقل إشعاعا UVB أحادي اللون عند 308 نانومتر مباشرة إلى الآفات التي أزالت الصبغة، مما يحفز تكاثر الخلايا الميلانوسكية وهجرتها من بصيلات الشعر مع تقليل تعرض الأنسجة السليمة المحيطة^. مقارنة بالليزر الضيق النطاق التقليدي للأشعة فوق البنفسجية، يوفر ليزر إكسيمر مزايا البدء السريع لإعادة التصبغ، وقصر وقت التعريض التراكمي، وملف السلامة المحسن^19,20. ميكانيكيا، يحفز الإشعاع المنخفض بجرعة 308-نانومتر تعديلا مناعيا محليا عن طريق تقليل نشاط خلايا لانجرهانز البشرية، وزيادة تسرب تريغ، وتعزيز تكوين الميلانوجين من خلال زيادة تنظيم التيروزيناز وعامل النسخ المرتبط بالميكروفثالميا (MITF)²¹. ومع ذلك، تظل الاستجابات متغيرة، ويفشل العديد من المرضى في تحقيق إعادة تصبغ كاملة. قد يؤدي الإشعاع المفرط أو المطول بشكل متناقض إلى إفراز السيتوكين الالتهابي — مثل IL-1β و IL-6 و TNF-α — وإصابة إضافية في الخلايا الميلينية^22،23. لذا، بينما يحفز علاج الليزر إكسيمر تجدد الخلايا الميلانوية بفعالية، قد تكون فعاليته محدودة بسبب التنشيط الالتهابي المتزامن. تؤكد هذه الثنائية الحاجة إلى علاجات مساعدة قادرة على التخفيف من الالتهاب وتعزيز تحمل المناعة أثناء العلاج الضوئي.

الماترين، وهو قلويد طبيعي من نوع كينوليزيدين مستخرج من Sophora flavescens (كو شين)، جذب مؤخرا اهتماما كبيرا كعامل معدل مناعي ومضاد للالتهابات ذو سمية منخفضة^24,25. أظهرت الدراسات التجريبية أن المادة يمكن أن تثبط مسارات إشارات NF-κB وJAK/STAT، وتخفيض إنتاج السيتوكينات المضادة للالتهاب (بما في ذلك IFN-γ، TNF-α، وIL-6)، وتعزز التعبير عن الوسطاء المضادة للالتهاب مثل IL-10²⁶. في الأمراض المرتبطة بالمناعة، أظهر الماترين فعالية في تعديل تمايز Th1/Th17، وتعزيز وظيفة الخلايا التائية التنظيمية، وتطبيع ملفات الغلوبولين المناعي^27,28. علاوة على ذلك، تظهر الماترين تأثيرات مضادة للأكسدة ومضادة للاستماتة قد تحمي الخلايا الصبغية من الإصابات الناتجة عن الإجهاد التأكسدي²⁹. بينما تجعل هذه الخصائص الماترين مرشحا جذابا لأمراض المناعة الذاتية الجلدية، إلا أن القليل من الدراسات استكشفت دوره في البهاق. يقدم دمج المادة مع العلاج الضوئي نهجا علاجيا جديدا: يمكن للمادة أن يضعف البيئة الدقيقة الالتهابية، ويثبت توازن الخلايا الصبغية، ويعزز تكوين الميلانوجين الناتج عن الليزر. علاوة على ذلك، قد يكمل النشاط المناعي النظامي للماترين التأثيرات المحلية لليزر إكسيمر، مما يؤدي إلى فائدة سريرية تآزرية. حسب علمنا، لم تحقق أي دراسة سريرية سابقة بشكل شامل الاستخدام المشترك لليزر إكسيمر 308-نانومتر مع الماترين في البهاق أو تقييم ارتباطاته المناعية من خلال تحليل علامات المصل الحيوية.

استنادا إلى هذا المنطق، افترضنا أن دمج ليزر إكسيمر 308-نانومتر مع ماترين سيحقق فعالية علاجية أفضل مقارنة بالعلاج الأحادي بليزر إكسيمر، من خلال تعزيز تجدد الخلايا الصبغية وقمع تنشيط المناعة الشاذ في الوقت نفسه. على وجه التحديد، افترضنا أن إعطاء الأم المساعد سيعزز معدلات إعادة التصبغ السريرية، ويعدل مستويات الغلوبولين المناعي في المصل (IgG، IgA، وIgM) نحو التوازن الفسيولوجي، ويقلل من السيتوكينات الداعمة للالتهابات مثل IFN-γ، TNF-α، وIL-17، مع زيادة السيتوكينات المضادة للالتهابات. في هذه الدراسة، قمنا بتقييم النتائج السريرية بشكل منهجي والمعايير المناعية وارتباطاتها لدى المرضى المصابين بالبهاق الذين عولجوا بهذا العلاج المركب. تكمن جدة هذا البحث في تركيزه الميكانيكي المزدوج—التحفيز الضوئي البيولوجي المحلي والتعديل المناعي الجهازي—ودمجها لتحليل المؤشرات الحيوية الكمي لتوضيح الآليات العلاجية. من خلال توضيح التأثير المناعي التنظيمي للمادة عند دمجه مع العلاج الضوئي المستهدف، يهدف عملنا إلى توفير أساس قائم على الأدلة لنموذج علاجي جديد في إدارة البهاق. في النهاية، قد تدفع هذه النتائج المجال نحو استراتيجيات العلاج الضوئي الموجهة بالمناعة الدقيقة التي تحقق ليس فقط إعادة التصبغ بل أيضا استقرار الأمراض طويل الأمد والوقاية من الانتكاس.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة وفقا للمبادئ الأخلاقية لإعلان هلسنكي واللوائح المؤسسية التي تحكم البحث البشري. أجريت الدراسة وفقا للمبادئ الأخلاقية لإعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى شينغتاي الشعبي، قسم الأمراض الجلدية (رقم الموافقة: 2021[029]). قدم جميع المشاركين موافقة مكتوبة مستنيرة قبل المشاركة.

اختيار المرضى
تم تسجيل ما مجموعه 232 مريضا تم تشخيصهم سريريا بالبهاق خلال فترة 3 سنوات من يناير 2021 إلى ديسمبر 2023. تم تشخيص جميع المشاركين بالبهاق غير القطاعي (النوع المعمم أو الموضعي) وتصنيفهم كمستقرين أو تقدميين بناء على غياب أو وجود آفات جديدة خلال 3 أشهر قبل التسجيل. تم تسجيل مدة المرض وتوزيع الآفات في البداية. شملت معايير التسجيل أفرادا تتراوح أعمارهم بين 18 و65 عاما يعانون من بهاق مستقر أو تقدمي تم تأكيدهم من قبل أطباء الجلدية من خلال الفحص السريري، وإضاءة مصباح وود، وتنظير الجلد. كانت معايير الاستبعاد هي الحمل، الرضاعة، اضطرابات الحساسية الضوئية، أمراض المناعة الذاتية الجهازية، خلل شديد في وظائف الكبد أو الكلى، والاستخدام المسبق للكورتيكوستيرويدات الجهازية، مثبطات المناعة، أو العلاج الضوئي خلال 3 أشهر. تم إجراء جميع الإجراءات تحت إشراف أخلاقي مستمر، لضمان راحة وسلامة المريض طوال فترة العلاج.

نظرة عامة على الدراسة وسير عمل العلاج
يوضح سير العمل العام للدراسة، بما في ذلك تسجيل المرضى، وتوزيع المجموعات، والتقييمات المتابعة، وتحليل المؤشرات الحيوية، في الشكل 1. تم تعيين المشاركين المؤهلين بنسبة 1:1 إلى إحدى مجموعتي الدراسة المتوازيتين: مجموعة العلاج الأحادي بليزر إكسيمر 308-نانومتر (ليزر إكسيمر وحده؛ n = 116) ومجموعة العلاج المركب (ليزر إكسيمر 308-نانومتر بالإضافة إلى ماترين الفم؛ n = 116). تم تخصيص المجموعات باستخدام تسلسل عشوائي مولد بالحاسوب أعده عضو مستقل في فريق البحث لم يكن مشاركا في تقييم النتائج؛ تم وضع الواجبات في أظرف مختومة مرقمة بالتتابع وفتح بعد التسجيل لتحديد توزيع العلاج. تكون سير العمل العلاجي من ثلاث مراحل رئيسية: (1) التقييم الأساسي والتوثيق، (2) 12 أسبوعا من العلاج النشط وفقا للنظام المخصص، و(3) التقييم بعد العلاج، بما في ذلك الاختبارات المخبرية لغلوبولينات المناعة في المصل والسيتوكينات الالتهابية. تلقى كل مريض خطة رعاية موحدة، وفترات متابعة متطابقة، وإجراءات تحليل مخبرية موحدة. تم إجراء صور سريرية وتقييم VASI من قبل أطباء جلدية غير معينين لتوزيع العلاج. تم إجراء جميع الإجراءات في جناح العلاج الضوئي للأمراض الجلدية في مستشفى شينغتاي الشعبي تحت ظروف محيطة مضبوطة (درجة حرارة الغرفة 22–24 درجة مئوية، الرطوبة النسبية 40٪–60٪).

تحضير منطقة العلاج
قبل كل جلسة ليزر، كانت المناطق المستهدفة مزيعة الصبغة تنظف بلطف باستخدام محلول ملحي فسيولوجي معقم وتجفف بشاش طبي خال من الوبر. تم فحص جلد الآفات للتأكد من عدم وجود عدوى أو استئصال أو تقشر أو تغطية. عندما تم علاج أكثر من آفة في زيارة واحدة، تم تجهيز كل آفة وعلاجها بشكل متتابع. تم تقسيم الآفات التي تتجاوز مجال إشعاع واحد إلى حقول إشعاع متجاورة، وتم حماية الجلد الطبيعي المحيط بطبقة معتمة من الأشعة فوق البنفسجية لكل حقل لتقليل التعرض غير الضروري. تم توجيه المرضى لتجنب العوامل الموضعية، أو مستحضرات التجميل المسببة للضوء، أو العطور لمدة 24 ساعة قبل العلاج. ارتدى كل من المريض والمشغل نظارات واقية طوال الإجراء.

إجراء إشعاع ليزر إكسيمر 308 نانومتر
تم استخدام نظام ليزر إكسيمر أحادي اللون بحجم 308 نانومتر من كلوريد الزينون (XeCl). تم إجراء جميع جلسات الليزر بواسطة طبيبين مدربين في أمراض الجلد وفق بروتوكول موحد لضمان إخراج طاقة متسقة، ومسافة تعريض، وقابلية التكرار. تم التحقق من مخرج الجهاز بواسطة عداد طاقة UV معاير قبل كل يوم علاج، وخضعت جميع الأنظمة لمعايرة أسبوعية بواسطة فني معتمد للحفاظ على هامش خطأ أقل من ±5٪. قبل أول عملية تعريض للعلاج، تم تحديد الحد الأدنى من جرعة الحمراء (MED) لكل مريض بتطبيق جرعات إضافية (100–400 مللي جول/سم^مربع) على مناطق اختبار صغيرة في الساعد الداخلي وتقييم استجابة الحمراء بعد 24 ساعة؛ تم تصوير النتائج وتسجيلها في سجلات المرضى. تم توفير توثيق تمثيلي لطب الطب وجدول تعديل الجرعة على حدة جلسة في الجدول التكميلي 1. تم تعريف MED بأنها أدنى جرعة اختبار تنتج احمرارا موحدا وواضحا عند 24 ساعة. تم تحديد جرعة العلاج الأولية عند 80٪–90٪ من الدواء الفردي، وتبعت تغييرات الجرعة اللاحقة خوارزمية محددة مسبقا بناء على استجابة الحممرة لمدة 24 ساعة في الجلسة السابقة (زيادة بنسبة 10٪–20٪ للاحمرار الغائب أو الخفيف، الحفاظ على نفس الجرعة للاحمرار المتوسط، وتقليل بنسبة 10٪–20٪ للبثور أو الألم الشديد). تم تحديد الجرعة العلاجية الأولية بين 150–250 ميلي جول/سم^مربع (أي حوالي 80٪–90٪ من الدواء الفردي). تبدأ كل جلسة بجلوس المريض بشكل مريح على كرسي قابل للتعديل. تم تثبيت قطعة الليزر بشكل عمودي (90°) على الجلد على مسافة 10–15 سم، وتم محاذاة حقول الإشعاع الدائرية أو المستطيلة لتغطية المناطق التي أزالت الصبغة بشكل طفيف جدا. استمر التعريض من 1 إلى 3 ثوان لكل مجال تعريض، حسب الطلاقة. تمت زيادة الجرعات لاحقا بنسبة 10٪–20٪ لكل جلسة وفقا للاستجابة السابقة للحمراء؛ إذا حدث احمرار متوسط، كانت الجرعة السابقة تحافظ عليها، بينما كان البثور أو الألم يستدعي انخفاضا بنسبة 10٪–20٪. لم تتجاوز الجرعة القصوى 2000 ميلي جول/سم^مربع. كل جلسة غطت جميع الآفات الظاهرة واستمرت من 10 إلى 20 دقيقة حسب المدى. تم إجراء العلاجات مرتين أسبوعيا مع استغرق 72 ساعة على الأقل بين الجلسات خلال فترة إجمالية تبلغ 12 أسبوعا (24 جلسة). بعد الإشعاع، تم وضع طبقة رقيقة من جل المعقم القائم على الألوة لتخفيف الحمار الموضعية. تم توجيه المرضى لتجنب التعرض للشمس لمدة 48 ساعة واستخدام واقي شمس واسع الطيف (SPF >30) طوال فترة العلاج. استمرت الآفات التي أظهرت >50٪ إعادة تصبغ تحت نفس المعايير حتى تم تحقيق تصبغ مستقر.

إعطاء الأم الفموي
في المجموعة المركبة، تم تحضير مستخلص مائي معقم من جذور Sophora flavescens وفقا للفارماكوبيا الصينية (طبعة 2020)³⁰ وتم توحيده إلى تركيز 5 ملغ/مل مع نقاء ≥98٪، تم التحقق منه بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). تم تخزين المحلول عند 4 درجات مئوية في زجاجات زجاجية كهرمانية لمنع التحلل الضوئي. أكدت الاختبارات العشوائية على دفعات تركيز القلويات (5 ± 0.3 ملغ/مل) وتعقيم الميكروبات. تلقى كل مريض محلول الأم عن طريق الإعطاء الفموي بجرعة 0.3 جرام (60 مل) مرتين يوميا لمدة 12 أسبوعا، متزامنة مع جدول العلاج بالليزر. تم اختيار الجرعة بناء على بيانات دوائية سابقة أظهرت زيادة مناعية فعالة مع ملف أمان إيجابي^{في أمراض الجلد} الالتهابي المزمن. تم توجيه المرضى لتناول المحلول بعد 30 دقيقة من الوجبات لتقليل الانزعاج في الجهاز الهضمي وتجنب الكحول والشاي القوي والأطعمة الحارة أثناء العلاج لتقليل العبء الكبدي. تم التحكم في الغثيان أو التعب الخفيف بإعطاء كمية صغيرة من الماء الدافئ. تم تقييم الالتزام بالعلاج من خلال يوميات الأدوية والتحقق من عودة الزجاجة في كل زيارة متابعة. تم تقييم السلامة في كل زيارة من خلال الاستفسار المنظم عن الأعراض وتوثيق الأحداث السلبية، بما في ذلك انزعاج الجهاز الهضمي، والإرهاق، وأي علامات تشير إلى عدم تحمل الكبد. لم يسمح بأي أدوية جهازية إضافية أو الكورتيكوستيرويدات الموضعية أو مثبطات المناعة خلال فترة المراقبة لمنع التأثيرات المربكة.

تقييم الاستجابة السريرية
تم تقييم تغيرات التصبغ في البداية وفي الأسابيع 4 و8 و12 من قبل طبيبين جلديين ذوي خبرة تم إعفائهم بمعلومات العلاج. تم التقاط صور رقمية موحدة تحت إعدادات إضاءة وكاميرا متطابقة (المسافة 60 سم، التعريض 1/60 ثانية، ISO 200). تم قياس درجة إعادة التصبغ باستخدام مؤشر تقييم منطقة البهاق (VASI). تم تصنيف الآفات أيضا إلى أربع فئات: ممتازة (≥75٪ من إعادة التصبغ)، جيدة (50٪–74٪)، متوسطة (25٪–49٪)، فقيرة (<25٪). كما أكمل المرضى مقياس الرؤية التناظرية (VAS) المكون من 10 نقاط للرضا وتخفيف الأعراض. تم توثيق أحداث جانبية مثل الحمراة، والحرقان، والحكة، والبثور، وفرط التصبغ في كل زيارة.

جمع عينات المصل
لتحليل المؤشرات الحيوية، تم جمع دم محيطي صائم (5 مل) من كل مريض في البداية وفي نهاية الأسبوع الثاني عشر باستخدام أنابيب فصل المصل. تركت العينات لتجلط لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتم طردها بحرارة 800 × جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم تقسيم المصل الفائق إلى مجمدات بسعة 0.5 مل وتم تخزينه عند −80 درجة مئوية حتى التحليل. تمت معالجة جميع العينات خلال ساعتين من الجمع لتقليل تدهور السيتوكينات.

قياس كمية الغلوبولينات المناعية في المصل
تم تحديد تركيزات IgG وIgA وIgM في المصل باستخدام قياس المناعة الآلي وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إعداد منحنيات المعايرة باستخدام تخفيف تسلسلي للمعايير المرجعية. تضمن كل اختبار مصل مراقبة الجودة بتركيزات عالية ومنخفضة. تم التعبير عن القياسات بالجرام/لتر وتكررها مرتين لضمان تباين داخل الاختبار < 5٪. تم التحقق من دقة الجهاز ومعايرته يوميا باستخدام معايير التحكم القابلة للتتبع. تم تسجيل النتائج إلكترونيا ومراجعتها من قبل فنيين مستقلين غير معينين عن معلومات المرضى.

قياس السيتوكينات الالتهابية
شملت التوصيف السيتوكيني IFN-γ وTNF-α وIL-1β وIL-6 وIL-17 وIL-10، تم قياسها باستخدام منصة اختبار ELISA المرتبطة بالإنزيمات المناعية (ELISA). تم تحضير المواد الكيميائية وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة القياسي. باختصار، أضيف 100 ميكرولتر من المصل المخفف إلى كل بئر مغطاة بالأجسام المضادة وحضانته لمدة ساعتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. بعد الغسل بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات يحتوي على 0.05٪ Tween-20 (PBST)، أضيف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد للكشف البيوتينيلاتي وحضانه لمدة ساعة واحدة. ثم تم حضن الآبار ببيروكسيداز ستربتافيدين-الفجل الحار لمدة 30 دقيقة، تليها تطور اللون باستخدام ركيزة التتراميثيلبينزيدين (TMB) لمدة 10 دقائق في الظلام. تم إيقاف التفاعل ب 50 ميكرولتر من 2 مول/لتر حمض الكبريتيك، وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوتينغ. تم توليد منحنيات قياسية من تخفيفات متسلسلة للسيتوكينات المؤتلفة، وتم التعبير عن تركيزاتها ب pg/mL. تم قياس جميع العينات بنسخ. لضمان قابلية التكرار، تم الحفاظ على معامل التباين بين الاختبارات (CV) تحت 10٪. احتوت الآبار الفارغة على مخزن اختبار بدون مصل، واحتوت آبار التحكم السالبة على مصفوفة خالية من السيتوكينات تمت معالجتها بنفس الطريقة مع العينات ومعادلة لمعيار 0 pg/mL لتأكيد خصوصية الاختبار. تم استبعاد أي عينات تحلل دموي أو لحمية من التحليل النهائي.

التحليل الإحصائي
تم إدخال البيانات في قاعدة بيانات إلكترونية مخصصة وتم التحقق منها من قبل مديرين مستقلين للبيانات للتحقق من الدقة. تم تقدير حجم العينة بناء على حجم التأثير المتوقع (كوهين d = 0.5) ب α = 0.05 والقوة (1–β) = 0.8، مما أدى إلى عدد المشاركين المحدود ل 100 مشارك في كل مجموعة. للتحكم في مقارنات متعددة عبر السيتوكينات، تم تطبيق تصحيح بونفيروني عند الاقتضاء. تم تطبيق الانحدار الخطي متعدد المتغيرات عند الحاجة لتعديل العوامل المحتملة المربكة، بما في ذلك العمر، الجنس، مدة المرض، ومنطقة الآفة الأساسية. تم التحقق من التوزيع الطبيعي للمتغيرات المستمرة باستخدام اختبار شابيرو-ويلك. تم تقديم الإحصاءات الوصفية كمتوسط ± انحراف معياري (SD) للبيانات الموزعة بشكل طبيعي أو كمتوسط (نطاق رباعي، IQR) للبيانات المنحرفة. تم تحليل التغيرات قبل وبعد العلاج باستخدام اختبارات t مزدوجة، بينما تم تحليل المقارنات بين المجموعات باستخدام اختبارات t ذات عينات مستقلة أو اختبارات مان–ويتني U حسب الاقتضاء. تمت مقارنة البيانات الفئوية مع مربع الكاي أو اختبار فيشر الدقيق. تم تقييم الارتباطات بين مستويات السيتوكينات والمناعة الغلوبولينات وتحسن التصبغ باستخدام معامل الارتباط الخاص ببيرسون. أجريت جميع التحليلات باستخدام SPSS v26.0 (RRID: SCR_002865)، واعتبر تقييم P ثنائي الجانب < 0.05 ذا دلالة إحصائية.

النتائج

أظهرت الخصائص السريرية الأساسية ملفات ديموغرافية ومرضية مماثلة بين المجموعات
تم تسجيل ما مجموعه 232 مريضا مصابين بالبهاق غير المقطعي وتوزيعهم بالتساوي إلى مجموعة الإكسيمر (n = 116) أو مجموعة العلاج المركب التي تلقت الليزر بالإضافة إلى الأم الفموية (n = 116). المعايير الديموغرافية والسريرية الأساسية، بما في ذلك العمر (35.8 ± 6.0 مقابل 35.4 ± 5.6 سنوات)، توزيع الجنس (ذكر/أنثى: 59/57 مقابل 59/57)، مدة المرض (4.8 ± 1.0 مقابل 4.7 ± 0.8 سنة)، نوع ...

المناقشة

تقدم هذه الدراسة نهجا علاجيا مشتركا يدمج ليزر إكسيمر 308 نانومتر مع الماترين الفموي لعلاج البهاق غير القطاعي. الاقتراح المركزي هو أن التعديل المزدوج—التحفيز الضوئي البيولوجي الموضعي للخلايا الصبغية مع تنظيم المناعة الجهازي—يمكن أن يحقق إعادة تصبغ أكثر قوة واستدامة من مجموعة الإكسيمر. تدعم النتائج هذه الفرضية: العلاج المركب أدى إلى تصبغ محيطي مبكر، وتقليل أكبر في VASI، ورضا أعلى من ليزر إكسيمر وحده. رافق هذه النتائج تطبيع واسع لمؤشرات المناعة في المصل، بما في ذلك انخفاض السيتوكينات المؤيد...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
نظام ليزر XeCl إكسيمر 308 نانومتر	ستراتا لعلوم الجلد (XTRAC)	فيلوسيتي 400 (الطراز)	ليزر UVB مستهدف بعرض 308 نانومتر لعلاج آفات البهاق؛ تحقق من النموذج في موقعك؛ أو جهاز مكافئ
– 80 & درجة؛ C فريزر فائق الارتفاع	ثيرمو ساينتفيك	سلسلة فورما 900 (موديل 980)	تخزين المصل طويل الأمد
ألواح ELISA ذات 96 بئر (عالية الرابط)	كورنينغ كوستار	9018	إذا كنت تستخدم الطلاء الداخلي أو سير عمل البلكس الفردي
كرسي طبي قابل للتعديل	منتصف العلامة	رئيس الإجراءات 641	تموضع المريض لمسافة إشعاع ثابتة
جل مهدئ قائم على الألوة	3M	9236	طبقة رقيقة بعد الإشعاع لتخفيف الحمرام؛ أو ما يعادل الجل الطبي
زجاجة الكهرمان الزجاجية (500 مل)	فيشربراند	02-897-2J	التخزين المحمي بالضوء عند 4 ودرجة مئوية؛ C لمحلول ماترين
التوازن التحليلي (0.1 ملغ)	ميتلر توليدو	ME104E	التحضير الجرافيمتري ومراقبة الجودة
جهاز المناعة الآلية	سيمنز هيلثاينرز	نظام BN ProSpec	يقيس IgG/IgA/IgM حسب الشركة المصنعة' س IFU
ملصقات الباركود (Cryo-safe)	التكنولوجيا الحيوية المتنوعة	CRY-1000	تتبع عينات وسلسلة الحجز
مجموعة الأجسام المضادة للكشف البيوتينيلية	MSD	مشمولة مع لوحة	مطابقة للأجسام المضادة القابلة للالتقاط
واقي شمس واسع الطيف وواقي شمس و... 30	النيوتروجينا	070501017052 (فائق شفافية خارق شمس 50)	الحماية الضوئية بعد الجلسة؛ موضوع الاستشارة الخارجية
معايرات لغلوبولينات المناعة	سيمنز هيلثاينرز	معيار N للبروتين SL	المعايرة القابلة للتتبع لقياس النفيلومترية
مصل التحكم (عالي/منخفض) لاختبارات ال Ig	سيمنز هيلثاينرز	ضوابط البروتين N/T	مراقبة الجودة اليومية لسباقات النيفيلومتريك
قوارير التبريد، 0.5 مل	النونك العلمي الحراري	375418	Serum aliquots; الخيط الخارجي؛ DNase/RNase الخالي من DNase
ديرماتوسكوب	ديرملايت	DL4	منظار الجلد المحمول المستقطب لفحص الآفات
بطاقة مقياس تنظير الجلد/التصوير الفوتوغرافي	3Gen	بطاقة مرجعية للمقياس/اللون	يضمن اتساق الألوان عبر النقاط الزمنية
كاميرا رقمية للصور الموحدة	القانون	EOS 80D	المسافة الثابتة 60 سم؛ التعريض 1/60 ثانية؛ ISO 200؛ موصى بتركيب حامل ثلاثي
الطرد المركزي المبرد بزاوية ثابتة	إبندورف	5810 R	800 &00; g، 10 دقائق، 4 & درجة؛ فصل مصل C
عمود HPLC (C18، 4.6&00؛ 250 مم، 5 وميكرو؛ m)	أجيلينت	زورباكس إكليبس بلس C18، 959990-902	فصل قلويدات روتيني؛ أو ما يعادلها
نظام HPLC	أجيلينت	1260 إنفينيتي II (G7111B)	التحقق من النقاء وتوحيد الدفعات للمادة
تحليل الصور / القياس	ImageJ (NIH)	1.54 (RRID:SCR_003070)	قياس منطقة الآفات اختياري من الصور
شاش طبي خال من الوبر (معقم)	جونسون & جونسون	546112	منطقة التجفيف بعد التنظيف
ماترين (&ge؛ 98٪، HPLC)	ميدكيم إكسبريس	HY-N0156	تحضير المحلول الفموي؛ تحقق من الامتثال المحلي للمورد والأدوية
قارئ الميكروبليت (450 نانومتر)	BioTek (Agilent)	التآزر H1	الامتصاص عند 450 ميل بحري؛ تصحيح طول المسار
جهاز غسالة الميكروبليت	BioTek (Agilent)	ELx405	دورات الغسل الآلية؛ يقلل من التباين
لوحة السيتوكين البشرية متعددة الأبعاد (6-أبراج مخصصة)	اكتشاف مقياس ميزو (MSD)	منصة يو-بليكس (K15067L)	تشمل IFN-γ، TNF-α، IL-1β، IL-6، IL-17A، IL-10؛ أو ما يعادلها
أقراص PBS	جيبكو	18912-014	تحضير PBS للغسل/المخازن
أفلام صفائح الختم	بيو-راد	MSB1001	يمنع التبخر أثناء الحضانة
نظارات الحماية فوق البنفسجية (المشغل)	أوفيكس (هانيويل)	S0360X ألترا-سبيك 2000	حماية عين المشغل؛ استخدم زوجا مخصصا
نظارات الأشعة فوق البنفسجية الواقية (للمريض)	أوفيكس (هانيويل)	S0360X ألترا-سبيك 2000	نظارات حاجمة للأشعة فوق البنفسجية لسلامة المرضى أثناء الإشعاع
أنابيب فصل المصل (SST II Advance)	بي دي فاكوتينر	367955	جمع الدم أثناء الصيام في البداية والأسبوع الثاني عشر
البرمجيات الإحصائية	آي بي إم	إحصائيات SPSS الإصدار 26.0 (RRID:SCR_002865)	تحليل البيانات الأولية لكل بروتوكول
محلول ملحي فسيولوجي معقم (0.9٪)	باكستر	2B1324 (500 مل)	تنظيف الآفات قبل كل جلسة ليزر
حل الإيقاف (2 مليون H2SO4)	سيغما-ألدرتش	258105	يوقف تفاعل TMB
ستريبتافيدين-HRP	ثيرمو ساينتفيك	N100	مادة الكشف؛ متوافق مع المجموعات
ركيزة TMB (ELISA)	ثيرمو ساينتفيك	34028	التطور الكروموجيني؛ 10 دقائق في الظلام
حامل ثلاثي مع علامة المسافة	مانفروتو	MKCOMPACTLT-BK	يحافظ على مسافة ثابتة بين الكاميرا والموضوع
المراهقة (ل PBST 0.05٪)	سيغما-ألدرتش	P1379	مادة خافضة للتوتر السطحي بمخزن الغسيل
مقياس الأشعة فوق البنفسجية / مقياس الطاقة	تقنيات الضوء الدولية	ILT2400	للتحقق اليومي من الناتج واختبار MED؛ مع كاشف SED240/NS254 أو ما يعادله
الدرع أو الغطاء المعتم الذي يحجب الأشعة فوق البنفسجية	ثورلابز	قماش BK5 بلاكاوت	تغطي الجلد الطبيعي لتجنب التعرض غير المقصود؛ أو ما يعادلها
أوراق تسجيل VASI (مطبوعة)	داخليا	NA-VASI-2025	نماذج التقييم السريري الموحدة؛ الأرشيف مع معرف الموضوع
الخشب' مصباح S (UV-A، 365 نانومتر)	الطيف	ENF-260C	التشخيص السريري وتقييم حافة الآفات
الخشب' غطاء درع المصباح	ديرملايت	دي إل هود	تحسين التباين تحت اختبار UV-A