Name: نهج عكس الوراثية لاختبار التكرار وظيفية خلال مرحلة التطور الجنيني (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: اكتشف كيفية اختبار التكرار الوظيفي للجينات في أجنة سمك الزرد باستخدام تقنية المورفولينو المزدوج. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات التعويض الجيني في علم الأحياء التنموي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر أعضاء المختبر ايفانز لمساعدتهم في إعداد هذا العرض. تم التحقق من سلامة الأصل morpholinos المستخدمة هنا الدكتور أودري Holtzinger. وتدعم الشركة المصرية للاتصالات عن طريق المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (وHL064282 HL056182). وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعها المعهد لرعاية الحيوان واستخدام اللجنة ، من كلية طب وايل كورنيل.

<ol><li>Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+zebrafish+model+to+study+GATA+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Using the zebrafish model to study GATA transcription factors.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).</li>
<li>Bill, B. R., Petzold, A. M., Clark, K. J., Schimmenti, L. A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+morpholino+use+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A primer for morpholino use in zebrafish.</a> Zebrafish. 6, 69-77 (2009).</li>
<li>Holtzinger, A., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gata5+and+Gata6+are+functionally+redundant+in+zebrafish+for+specification+of+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Gata5 and Gata6 are functionally redundant in zebrafish for specification of cardiomyocytes.</a> Dev Biol. 312, 613-622 (2007).</li>
<li>Peterkin, T., Gibson, A., Patient, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redundancy+and+evolution+of+GATA+factor+requirements+in+development+of+the+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Redundancy and evolution of GATA factor requirements in development of the myocardium.</a> Dev Biol. 311, 623-635 (2007).</li>
<li>Holtzinger, A., Evans, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gata4+regulates+the+formation+of+multiple+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Gata4 regulates the formation of multiple organs.</a> Development. 132, 4005-4014 (2005).</li>
<li>Sorrentino, R. P., Gajewski, K. M., Schulz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GATA+factors+in+Drosophila+heart+and+blood+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">GATA factors in Drosophila heart and blood cell development.</a> Semin Cell Dev Biol. 16, 107-116 (2005).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

كنا معا في التجربة الموصوفة هنا ، وهما morpholinos ، كل وحدها التي تولد مجموعة متميزة من الظواهر ، والعثور على النمط الظاهري مختلفة تماما عندما كانت تشارك في حقن معا. بالطبع ، نحن في حاجة لتبرير القيام بهذه التجربة في المقام الأول. نحن يشتبه بأن الجينين قد تعوض بعضها البعض للحصول على وظيفة في وقت سابق ، في هذه الحالة مواصفات القلب. وذلك لأن غاية ترتبط الجينات (وقادرة على الربط إلى نفس تسلسل الحمض النووي) ، ويتم التعبير في أنماط متداخلة خلال مرحلة التطور الجنيني 5. وعلاو...

<table><tbody><tr><td>أحواض تفريخ الأسماك والقواطع</td><td>الموائل المائية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>شباك صيد الأسماك</td><td>الموائل المائية</td><td></td><td></td></tr><tr><td>مياه النظام</td><td></td><td></td><td>60 ملجم من Instant Ocean&amp;#8221; لكل لتر من الماء المقطر منزوع الأيونات (dH2O)</td></tr><tr><td>أطباق بتري قياس 100 ملم</td><td>BD Biosciences</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>جهاز سحب إبر الماصات الدقيقة</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97 فليمينج/بني</td><td></td></tr><tr><td>3.5&quot; أنابيب شعرية زجاجية</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-203-G/X</td><td></td></tr><tr><td>شفرة حلاقة</td><td>بيرسونا للرعاية الطبية</td><td>94-120-71</td><td></td></tr><tr><td>مطحنة دقيقة</td><td>ناريشيجي إنترناشيونال (Narishige International)</td><td>EG-4</td><td></td></tr><tr><td>عدسة مجهرية مقسمة (عدسة عينية مدرجة)</td><td>العرض الأول</td><td>MF-02</td><td></td></tr><tr><td>ميكروميتر</td><td>جناح المرضى&amp;rsquo;العلوم الطبيعية</td><td>94 W 9910</td><td></td></tr><tr><td>أجاروز فائق النقاء</td><td>Invitrogen</td><td>15510-027</td><td></td></tr><tr><td>ملعقة مختبر (Spatula)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td></td></tr><tr><td>المقياس</td><td>Mettler Toledo</td><td>AB54-S/FACT</td><td></td></tr><tr><td>أطباق وزن ذات استخدام واحد</td><td>Fisher Scientific</td><td>2-202-B</td><td></td></tr><tr><td>ميكروويف تقليدي</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>دورق إرلنماير</td><td>Corning</td><td>4980</td><td></td></tr><tr><td>شرائح المجهر</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-552</td><td></td></tr><tr><td>مخبار مدرج</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-572-6D</td><td></td></tr><tr><td>مُاصَّة أوتوماتيكية</td><td>BrandTech</td><td>2026333</td><td></td></tr><tr><td>محلول غسيل إيثانول بتركيز 70%</td><td>تار (Tarr)</td><td>801VWR</td><td></td></tr><tr><td>خزان النيتروجين (N2)</td><td>تيك إير (Tech Air)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>المحقن الدقيق</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PLI-100</td><td></td></tr><tr><td>المتلاعب الدقيق</td><td>الأجهزة الدقيقة</td><td>الاكتئاب طويل الأمد (LTD)</td><td></td></tr><tr><td>مجهر تشريحي</td><td>أجهزة Nikon</td><td>SMZ1500</td><td></td></tr><tr><td>بارافلم (Parafilm)</td><td>شركة American National Can</td><td>PM-992</td><td></td></tr><tr><td>زيت معدني</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>مناديل Kimwipes</td><td>شركة Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>&lt;تعد الإلكترونيات الدقيقة (EM) أداة أساسية في البحث العلمي الحديث، حيث تتيح للباحثين استكشاف البنى النانوية والسطحية للمواد بدقة متناهية. من خلال تسخير حزمة من الإلكترونات بدلاً من الضوء، يمكن للمجهر الإلكتروني تجاوز حدود الدقة البصرية التقليدية، مما يسمح بتصوير العضيات الخلوية، والبلورات، والجسيمات النانوية بمقاييس ذرية. يتطلب استخدام هذه التقنية تحضيراً دقيقاً للعينات، بما في ذلك التثبيت، والتقطيع الرقيق، والطلاء المعدني، لضمان الحصول على صور عالية التباين والوضوح. تساهم هذه التقنية بشكل حيوي في تطوير مجالات الطب الحيوي، وعلم المواد، والفيزياء، من خلال توفير رؤى بصرية مباشرة حول التفاعلات على المستوى الجزيئي والذري.&gt;gata5&lt;/em&gt; مورفولينو موقع الربط</td><td>Genetools, LLC</td><td></td><td>5&amp;rsquo;-TCTTAAGATTTTTACCTATACTGGA-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>حاصِر ATG لـ gata5</td><td>Genetools, LLC</td><td></td><td>5&amp;rsquo;-AAGATAAAGCCAGGCTCGAATACAT-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>&lt;المجهر الإلكتروني&gt;gata6&lt;/em&gt; حاصر ATG للنظير الطويل</td><td>Genetools, LLC</td><td></td><td>5&amp;rsquo;-AGCTGTTATCACCCAGGTCCATCCA-3&amp;rsquo;</td></tr><tr><td>ماصة باستور ذات استخدام واحد</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B</td><td></td></tr><tr><td>ميثان سلفونات التريكايين</td><td>أرجنت لابس (Argent Labs)</td><td>MS-222</td><td></td></tr><tr><td>ميثيل السليلوز</td><td>ICN Biomedicals</td><td>155495</td><td></td></tr><tr><td>كتلة تسخين</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-718-4</td><td></td></tr><tr><td>ملقط حاد</td><td>دومونت</td><td></td><td>مقاس 55</td></tr><tr><td>شرائح مجهرية للاكتئاب</td><td>VWR international</td><td>48339-009</td><td></td></tr></tbody></table>

نهج عكس الوراثية لاختبار التكرار وظيفية خلال مرحلة التطور الجنيني

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

عادة ما يتم تعريف وظيفة الجين خلال مرحلة التطور الجنيني من فقدان وظيفة ، من التجارب ، على سبيل المثال عن طريق الطفرات المستهدفة (خروج المغلوب) في الماوس. في النموذج الزرد ، وقد وضعت التقنيات الجينية العكسية الفعالة باستخدام microinjection من العقاقير morpholinos الجينات المحددة. Morpholinos استهداف مرنا من خلال المزاوجة قاعدة محددة وظيفة الجين كتلة عابر عن طريق الترجمة أو تثبيط الربط لعدة أيام خلال مرحلة التطور الجنيني (ضربة قاضية). ومع ذلك ، في الفقاريات مثل الماوس أو الزرد ، ويمكن حجب بعض وظائف الجينات بواسطة هذه الأساليب بسبب وجود جين آخر أن يعوض عن الخسارة. هذا صحيح خصوصا بالنسبة للأسر تحتوي على جينات المورثات الشقيقة التي شاركت في وأعرب في نفس الأنسجة النامية. في الزرد ، ويمكن اختبارها التعويض وظيفية بطريقة الإنتاجية العالية نسبيا ، عن طريق الحقن المشترك للmorpholinos أن الهدف ضربة قاضية لكل من الجينات في وقت واحد. وبالمثل ، وذلك باستخدام morpholinos ، يمكن أن يكون أظهر تفاعل الجينات الوراثية بين أي اثنين من ضربة قاضية لكل من الجينات معا في شبه عتبة المستويات. على سبيل المثال ، يمكن معاير morpholinos بحيث لا ضربة قاضية فرد يولد النمط الظاهري. إذا ، في ظل هذه الظروف ، وشارك في كل من الحقن morpholinos يسبب النمط الظاهري ، يظهر التفاعل الجيني. نحن هنا لشرح كيفية اظهار التكرار وظيفية في سياق اثنين من العوامل المتصلة النسخ غاتا. غاتا عوامل ضرورية لتحديد الأسلاف القلب ، ولكن كشف هذا فقط بسبب فقدان كل من Gata5 وGata6. نعرض كيفية اجراء تجارب microinjection ، التحقق من صحة morpholinos ، وتقييم التعويض عن النمط الظاهري تخلق القلب.

ويمكن أن تحجب وظيفة الجين في خسارة وظيفة من التجارب اذا كان هناك تعويض آخر الجينات. نموذج الزرد يوفر نسبيا عالية الإنتاجية وسائل للكشف عن التكرار وظيفية من هذا القبيل في الأجنة الحية.

عادةً ما يتم تحديد وظيفة الجين أثناء التكوين الجنيني من خلال تجارب فقدان الوظيفة، على سبيل المثال عن طريق الطفرات الموجهة (التعطيل الجيني) في الفأر. في ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد ما إذا كان هناك جينان متكرران وظيفيًا فيما يتعلق بتحديد سلالة خلوية معينة. يتم تحقيق ذلك أولاً من خلال تحديد النمط الظاهري لفقدان الوظيفة لكل جين على حدة باستخدام المورفينات النوعية للجينات التي يتم حقنها في أجنة أسماك الزيبرا النامية. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في تطوير مقايسة لقياس تحديد السلالة الخلوية أو التمايز كميًا.على سبيل المثال، باستخدام سلالة أسماك مبلّغة، كما سنوضح هنا. وتتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في الجمع بين اثنين من الـ morph FENOs لاستهداف فقدان الوظيفة لكلا الجينين في وقت واحد. أما الخطوة الأخيرة من الإجراء فهي تقييم النمط الظاهري الناتج عن عملية التثبيط المزدوج (double knockdown).وفي نهاية المطاف، يمكن الحصول على نتائج تُظهر فقدان الوظيفة أو اكتسابها لخلايا من سلالة محددة من خلال فحص مراسل السلالة أو تحليل التعبير عن علامة خاصة بالسلالة. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية، مثل دمج عمليات التعطيل الجيني في نموذج الفأر، في إمكانية استهداف جينين أو حتى ثلاثة جينات في نموذج السمك ببساطة عن طريق دمج مورفينوات مُتحقق من صحتها في تجربة واحدة. ويمكن حقن أكثر من 100 جنين وتقييم الأنماط الظاهرية على مدار عدة أيام.يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة جوهرية. ففي علم الأحياء النمائي، كما هو الحال عند تحديد المسارات النسخية التي تتحكم في مصير الخلية، غالبًا ما تُمثل المسارات التنظيمية الرئيسية بواسطة عائلات صغيرة من الجينات ذات الصلة التي تتسم بالتكرار الوظيفي. لذا، فإن دورها لا يكون واضحًا من دراسات تعطيل الجينات في الفئران بسبب التعويض من الجينات الشقيقة.على الرغم من أن هذا النموذج يمكن أن يوفر رؤى حول التخلق الجنيني لسمك الزيبرا، إلا أنه يمكن تطبيق النتائج على أنظمة أخرى مثل الفأر، بما أن البرامج الجينية نفسها تكون محفوظة بشكل جيد عادةً عبر التطور. قم بتجهيز أطباق الحقن المجهري قبل حقن الأجنة. صب حوالي 12 milliliters من 2%agros في الماء النظامي، وهو ماء نظيف يتم أخذه مباشرة من نظام خزان الأسماك، في الغطاء المقلوب لطبق بتري بقطر 100 millimeter.ضع شريحتين مجهريتين بزاوية 45 درجة تقريباً في جانبي الغطاء. عند تصلب الأجار، اسحب الشرائح برفق بعيداً عن الغطاء، مما يؤدي إلى تكوين أخاديد تستقر فيها الأجنة أثناء الحقن. تُحفظ مخزونات morpholino في درجة حرارة الغرفة بتركيز 1 mM في ماء مقطر منزوع الأيونات ومعقم قبل الحقن. يتم تحضين مخزونات morpholino عند درجة حرارة 65 °C لمدة خمس دقائق لضمان ذوبانها تماماً في المحلول.اترك المحاليل المخزونة لتبرد حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة. يجب التحقق تجريبيًا من نشاط كل مورفو (morpho) مصمم حديثًا ومدى تحمل الأجنة له. في أنابيب جهاز الطرد المركزي الدقيقة، ابدأ بإجراء تخفيف تسلسلي واحد إلى اثنين للمورفو المخزون في ماء مقطر منزوع الأيونات للحصول على تركيزات تشغيلية تبلغ 1 millimolar و 0.5 millimolar و 0.25 millimolar و 0.125 millimolar.تحت مجهر التشريح، استخدم عملية الشفط للتعبئة الأمامية لإبرة حقن معايرة مثبتة في الميكرو-مانيبولاتور (micro manipulator) ومتموضعة بشكل صحيح. عبئ الإبرة بنحو 1 µL من محلول المورفو (morpho) ذي التركيز الأدنى. استخدم ماصة نقل لنقل الأجنة المخصبة ذات الخلية الواحدة إلى أحواض لوحة الحقن المجهري.استخدم الماصة لإزالة الماء الزائد من الطبق بحيث تستقر الأجنة في قاع الميزاب. ضع طبق الحقن تحت المجهر، ثم أنزل الإبرة عبر الغشاء الكوريوني وصولاً إلى المح. احقن كل جنين قبل سحب الإبرة وإعادة وضع طبق الحقن للوصول إلى الجنين التالي.عند تعلم كيفية الحقن، قد يكون من المفيد استخدام صبغة حيوية لتصور عملية الحقن داخل الخلية كما هو موضح هنا، ثم يتم نقل الأجنة مرة أخرى إلى طبق بتري بقطر 100 مليمتر يحتوي على ماء النظام لاستنباتها عند درجة حرارة 28.5 درجة مئوية. تخلص من أي محلول morpho متبقٍ في الإبرة، واملأها بتركيز morpho الأعلى التالي لحقن الدفعة التالية من الأجنة في مرحلة النمو المناسبة. افحص الأجنة بحثاً عن الأنماط الظاهرية عند كل تركيز morpho محقون.تعتبر الجرعة العتبية لكل morpho هي أدنى جرعة يظهر عندها نمط ظاهري محدد وموثوق. قد تكون هناك حاجة إلى عدة جولات من المعايرة لتحديد العتبة غير الدقيقة. وذلك للبحث عن تفاعل جيني بين جينين متميزين.قم بتحضير خليط من اثنين من المورفولينوات (morphos) المستهدفة، بحيث يكون كل منهما بتركيز العتبة الخاص به. من المهم مراعاة أن الأجنة قد لا تتحمل أكثر من 20 nanograms من إجمالي المورفولينو لكل حقنة. قم بحقن الأجنة بنفس الطريقة المتبعة سابقاً.حافظ على ثبات أحجام الحقن بين المجموعات التجريبية ومجموعات الضبط، والتي يجب أن تشمل مجموعات تم حقنها بكل morpho بمفرده تحت المجهر التشريحي. راقب الأجنة المحقونة مباشرة بعد الحقن وعدة مرات على مدار اليوم، واستخدم ماصة نقل لإزالة أي أجنة ميتة أو تحتضر. وبما أن هذه الأجنة يمكن أن تؤثر سلباً على حيوية الأجنة المتبقية، فقم بنقل الأجنة المخدرة أو التي تم قتلها رحيماً في أي وقت باستخدام ماصة نقل.انقل العينة إلى شريحة مقعرة للفحص. وللتصوير الفوتوغرافي، استخدم ملاقط دقيقة لإزالة الغشاء الكوريوني إذا لزم الأمر.قم بتثبيت الجنين في قطرة من Methyl cellulose بنسبة 3%، وافحص الأجنة للبحث عن نمط ظاهري متميز، يكون فريداً لمزيج المورفولينوهات مقارنة بنفاذية أعلى للنمط الظاهري للمورفولينوهات المفردة. تظهر هنا عدة أجنة من النوع البري عند حقنها بالمورفولينوهات عند الحد الأدنى. بالنسبة لـ gata five، فإن النمط الظاهري النموذجي هو cardio bifida أو وجود قلبين، وذلك بسبب فشل الخلايا السليفة في الالتحام عند الخط المتوسط.لاحظ الخلايا العضلية القلبية الموجبة لـ GFP والمشار إليها بالأسهم. يتضمن النمط الظاهري لستة من حالات المورفين قلوباً مشوهة تفشل في الالتفاف بشكل صحيح. كما تطور هذه الأجنة خلايا عضلية قلبية موجبة لـ GFP.ومع ذلك، فإن الأجنة التي حُقنت بمزيج من مورفانوهات gata five و gata six الموضحة هنا، تظهر فقداناً تاماً لتطور الخلايا العضلية القلبية، مما يشير إلى ضرورة تعبير إما gata five أو gata six لكي تتطور الخلايا العضلية القلبية. هذان الجينان متكرران وظيفياً فيما يتعلق بتحديد هوية الخلايا العضلية القلبية.عند محاولة تطبيق هذا الإجراء، من المهم أولاً التحقق بشكل كامل من المورفوس (morphos) والتأكد قدر الإمكان من أنها تمثل تثبيطاً حقيقياً للجين المستهدف الواحد بعد اتباع هذا الإجراء. كما يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل دمج الأليلات الفارغة للمؤشرات الشرطية في الفئران لإظهار أن الجينات نفسها تؤدي الوظيفة ذاتها، وبالمثل في الثدييات.بعد مشاهدة الفيديو، ينبغي أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحديد ما إذا كان جينان متكررين وظيفيًا أثناء التكون الجنيني.

a-reverse-genetic-approach-to-test-functional-redundancy-during

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

طريقة الوراثية العكسية للتكيف الزرد لتقييم وظيفة الجين خلال مراحل لاحقة من التطور والتوازن الفسيولوجية مثل تجديد الأنسجة باستخدام الحقن داخل البطينات من morpholinos الجينات المحددة.

عكس النهج الوراثية عن طريق القلب البطيني Morpholino حقن لبالنقل متعددة يصعب الهدف الأنسجة في الزرد اليرقة

نصف بويضة Xenopus ونظام غطاء حيواني للتعبير عن استنساخ الجينات القادرة على إحداث استجابة في الأديم الظاهر المختص ، ونناقش تقنيات التحليل اللاحق لهذه الجينات. هذا النظام مفيد في التحديد الوظيفي لمجموعة واسعة من المنتجات الجينية.

الاستنساخ وظيفية باستخدام<em&gt; القيطم</em&gt; نظام التعبير البويضة

والهدف من هذا البروتوكول هو لوصف loss- وكسب من طريقة وظيفة التي تنطبق على تحديد neogenin بمثابة مستقبلات مرحلة معينة أن يؤدي إلى الأديم الظاهر الغاذي والخلايا الداخلية التمايز الشامل في الأجنة قبل الغرس الماوس.

Loss- ونهج كسب من وظيفة إلى التحقيق في خلية المبكر مصير محددات في سابق للانغراس أجنة الفئران

تفاصيل هذه المقالة الفيديو مباشرة في منهجية الجسم الحي والتي يمكن استخدامها لمنهجية وكفاءة تميز مكونات مسارات الإشارات المعقدة وشبكات تنظيمية في العديد من الأجنة اللافقاريات.

قوة البساطة: قنفذ البحر الأجنة كما<em&gt; في فيفو</em&gt; نماذج التنموية لدراسة مجمع خلية الى خلية اشارة شبكة التفاعلات

غالبا ما تحتوي على البروتينات المجالات المتعددة التي يمكن أن تمارس الوظائف الخلوية المختلفة. الجينات ضرب الرافضة (KO) لا يعتبرون هذا التنوع الوظيفي. هنا، نحن الإبلاغ عن النهج المستندة إلى هيكل الوظائف بوساطة إعادة التركيب الصرف كاسيت (RMCE) في KO الخلايا الجذعية الجنينية التي تسمح للتشريح الجزيئي للمجالات أو أنواع من البروتين وظيفية مختلفة.

الدراسات هيكل الوظائف في الخلايا الجذعية الجنينية الماوس عن طريق بوساطة Recombinase-كاسيت تبادل

نقدم بروتوكول شاشة القامع بسيطة في انشطار الخميرة. يعد هذا الأسلوب كفاءة خالية مطفر والانتقائي للطفرات التي غالباً ما تحدث في موضع الجينوم واحد.  البروتوكول مناسبة لعزل المكثفات التي تخفف من عيوب النمو في الثقافة السائلة التي تنتج عن طفرة أو دواء.

شاشة القامع عميق--التسلسل-ساعد، عفوية في "انشطار الخميرة" شيزوساكتشاروميسيس بومبي

لقد طورنا نهجا جديدا لفقدان الوظيفة يتضمن إدخال تسلسل الحمض النووي الريبي الدقيق الاصطناعي ودمجه الجينومي في أجنة الفرخ باستخدام التثقيب الكهربائي في البويضات ونظام ترانسبوزون Tol2. توفر هذه التقنية منهجية قوية ومستقرة لضربة قاضية للجينات لدراسات وظيفة الجينات أثناء التطوير.

نهج فقدان الوظيفة في شبكية العين الجنينية باستخدام التعبير الوراثي بوساطة Tol2 transposon للحمض النووي الريبي الدقيق الاصطناعي

اختبار الانتقال الضوء / الظلام هي واحدة من أكثر الاختبارات المستخدمة على نطاق واسع لقياس القلق تشبه السلوك في الفئران. هنا ، ونحن تقديم الفيلم الذي يعرض على إجراءات تفصيلية حول كيفية اجراء الاختبار.

الضوء / الظلام لاختبار الانتقال الفئران

هذا الفيديو يوضح ثقافة جديدة ، وهي الطريقة التي يتم تربيتها افراخ الدجاج خارج البويضة لمدة تصل إلى 24 ساعة. هذه الطريقة تمكن واحد لدراسة التطور المبكر (مسحة البدائية إلى 14 سوم) ، وهي الفترة المقابلة ل9 - E7 في الماوس. تطبيقات هذه التقنية تشمل electroporation ، التهجين في الموضع والمناعية.

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

هذا الفيديو يوضح 2 لون جبل بأكمله في الموقع التهجين ، وهي الطريقة التي نمط التعبير المكاني والزماني لل2 جينات مختلفة يمكن تصور افراخ الدجاج في الشباب. وقدم أصلا من قبل هذه الطريقة ويلكنسون ديفيد ، هنريك دومينغوس ، إنجهام فيل وديفيد العش - Horowicz.

الجامعة جبل مزدوجة في الموقع التهجين لافراخ الدجاج في وقت مبكر

اكتشف كيفية اختبار التكرار الوظيفي للجينات في أجنة سمك الزرد باستخدام تقنية المورفولينو المزدوج. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات التعويض الجيني في علم الأحياء التنموي.

نهج عكس الوراثية لاختبار التكرار وظيفية خلال مرحلة التطور الجنيني

استكشف المزيد من الفيديوهات