وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج سرطان البنكرياس قبل السريري للنقائل الكبدية عبر تقنية الطحال الهيمي. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء معلق خلية واحدة أولا من الخلايا السرطانية O2 المزروعة. الخطوة الثانية من الإجراء هي التعبير عن طحال فأر مخدر بالكامل وتقسيمه.

الخطوات التالية هي حقن الخلايا السرطانية في طحال نصفي واحد وإزالة الطحال النصفي المحقون. الخطوة الأخيرة هي إغلاق البطن واستعادة الفأر من التخدير. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر الاختلافات في تطور المرض النقيلي من خلال مراقبة البقاء على قيد الحياة ، يليها تشريح الكبد ، والتصوير الإضافي غير الجراحي.

يمكن أن تساعد هذه التقنيات في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث السرطان ، مثل تحديد العوامل الرئيسية في العملية النقيلية ، واختبار العوامل العلاجية الجديدة ، وإجراء أبحاث مناعة الورم. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج سرطان البنكرياس لأن الفئران ذات الكفاءة المناعية تخضع لتلقيح ورم متطابق ، وتطور الورم باستمرار ونقطة زمنية متسقة قبل التحضير للجراحة. جهز خليتين من البانكو في PBS بمعدل 20 مليون خلية لكل مليلتر مخزنة على الجليد.

بعد ذلك ، قم بتخدير أنثى تتراوح أعمارها بين ثمانية و 12 أسبوعا C 57 فأر أسود سداس. باستخدام جرعات مقسمة ثم تأكد من تخدير الماوس عن طريق اختبار ردود أفعاله. قم بإعطاء جرعات إضافية حسب الحاجة ، واعتني بعيون الفأر بالمرهم ، ثم استمر في حلق البطن.

بمجرد الحلاقة ، نظف الجلد بمقشرات بديلة بنسبة 70٪ من الإيثانول واليود. ثم ثنى الماوس. ابدأ بالشق تحت الضلعي الأيسر بما يتماشى مع الأذن اليسرى عبر الجلد والصفاق باستخدام مشرط.

ثم عبر الطحال من خلال الشق عن طريق الضغط الرقمي المتزامن على طول جوانب الجمجمة والتدليل من الشق. مع ظهور الطحال ، حدد موقع الأوعية الدموية الطحال في نهايته السفلية. بعد ذلك ، قسم الطحال.

ضع مقطعين من مشبكي ربط متوسط الحجم في وسطه. كن حذرا من الأوعية الدموية الطحالية في قطبي الطحال. تتلف بسهولة.

الآن ، ضع القطب العلوي من الطحال مرة أخرى في الصفاق لتجنب التلوث. استعد لحقن الورم عن طريق سحب 150 ميكرولترا من PBS أولا في حقنة قياس 26 بقياس خمسة ثمانية بوصات. ثم ارسم 100 ميكرولتر من خليتين من خليتين من البانكو المحضرة على الجليد في نفس المحقنة.

احتفظ بالمحقنة في وضع مستقيم حتى لا تختلط الطبقات كثيرا قبل إجراء الحقن ، اغمس الإبرة في محلول إيثانول بنسبة 70٪. ثم حقن الخلايا ببطء في الطحال النصف المكشوف مع وضع المحقنة في وضع مستقيم. راقب شطبة المحقنة من خلال كبسولة الطحال للتأكد من عدم إصابة الخلايا الموجودة أسفل الطحال.

يجب أن يبيض الطحال مع الحقن. الآن ارفع الطحال وقم بتطبيق مقطع أفقي متوسط واحد تحت الطحال لسد الأوعية الدموية الطحالية. ثم ضع مشبك أفق صغير على الجانب الأكثر بعدا من البنكرياس وأوعية الطحال.

مع وضع المشابك في مكانها ، قم بربط البنكرياس وأوعية الطحال من الطحال عن طريق القطع فوق المشابك. بعد الربط ، ضع الفأر على جانبه وقم بري الشق بالماء المقطر. قم بإنهاء الجراحة عن طريق إغلاق الصفاق بأربع خيوط جري.

ثم ضع مشابك إلى ثلاثة مشابك جلدية لإغلاق شق الجلد على الفور ، وقم بإعطاء الكاربروفين بمعدل أربعة ملليغرام لكل كيلوغرام تحت الجلد لتخفيف آلام ما بعد الجراحة. انقل الماوس إلى وسادة تدفئة حتى يصبح متحركا ويتنفس بانتظام. لا تعيد الفأر إلى صحبة الأخرى حتى يظهر التنفس المنتظم ويتحرك بشكل طبيعي بعد 30 إلى 60 يوما بعد الجراحة ، سيبدأ الفأر في إظهار الأعراض السريرية للورم الخبيث ويتطلب القتل الرحيم.

بمجرد أن لا يستجيب ، استخدم المقص لعمل شق في الصفاق لكشف البطن. ثم باستخدام ملقط ومقص ، اعزل الكبد بعناية عن البطن. نقل الكبد إلى OCT مركب التجميد الفلاش باستخدام النيتروجين السائل وتخزين الكبد عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.

بدلا من ذلك ، قم بتثبيت الكبد في فورمين عازل محايد بنسبة 16٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة ، متبوعا بالبارافين. التضمين للمعالجة. يتم تقديم تقنية إنشاء النقائل الكبدية في البنكرياس.

مع خليتين سرطانيتين في 100٪ من أكثر من 100 فأر معالج بشكل صحيح ، شكلت خليتان سرطانيتان تم حقنهما في الطحال النصفي نقائل في الكبد. بالإضافة إلى ذلك ، لم يلاحظ أبدا نقائل الرئة والبريتونية في جميع التجارب التي أجريت حتى الآن. مات اثنان من الفئران المحقونتين في بانكو تركوا دون علاج مع نقائل كبدية بين 30 و 60 يوما.

في التشريح ، لوحظت دائما نقائل كبدية متعددة تؤدي إلى حقن خلايا أخرى إلى نقائل مماثلة ، كما هو الحال مع الخلايا السرطانية KPC. الخلايا السرطانية KPC هي خط خلايا ورم البنكرياس متزابق من الفئران ذات الطفرات الخاصة ب KRAS و P 53 الخاصة بالأنسجة. مع العلاج العلاجي المعروف ، يمكن أن يحدث تثبيط أو تأخير في تكوين النقائل.

وبالتالي ، يمكن أن يكون هذا نموذجا فعالا لاختبار العوامل العلاجية الجديدة. أداة أخرى لاستخدامها هي الموجات فوق الصوتية للحيوانات الصغيرة ، والتي تسمح بتحليل الكبد في الجسم الحي بدقة كافية لعرض النقائل النامية بعد هذا التطور. مهدت هذه التقنيات الطريق لأبحاث سرطان الباتيه لاستكشاف العملية النقيلية بالإضافة إلى اختبار عوامل العلاج الجديدة في سرطان البنكرياس.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء نموذج سرطان البنكرياس قبل السريري للنقائل الكبدية باستخدام تقنية الطحال الهيمي.