التصوير المقطعي والتصوير الضوئي من-تكون العظم الأوعية الدموية اقتران لتقييم دمج القحف طعم ذاتي العظام والمغايرة

زرع الطعوم العظمية ذاتي وخيفي تشكل قبول النهج لعلاج الرئيسية فقدان العظام القحفي. ومع ذلك، فإن تأثير تكوين الكسب غير المشروع على التفاعل بين اتساع الأوعية الدموية، تمايز الخلايا وتكوين العظام غير واضح. نقدم بروتوكول التصوير المتعدد الوسائط التي تهدف إلى إلقاء الضوء على الترابط الأوعية الدموية، تكون العظم في القرب الكسب غير المشروع.

الهدف العام من هذا الإجراء هو مراقبة تكامل ترقيع العظام القحفية من حيث تجديد العظام والأوعية الدموية الجديدة باستخدام أساليب التصوير متعدد الوسائط. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الطب التجديدي ، مثل اقتران تكوين الأوعية الدموية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر تحديدا ثلاثي الأبعاد عالي الوضوح للأوعية الدموية الثلاثة ، وتسمح بدراسة العضو الكامل الذي يوضح الإجراء سيكون دورون فيك ، طالب دكتوراه في مختبري بعد القتل الرحيم لفأر البحر باب البالغ من العمر سبعة إلى ثمانية أسابيع.

وفقا لبروتوكول النص ، استخدم ماكينة قص الشعر لحلاقة المنطقة الجليسية عكس اتجاه نمو الشعر. ضع 70٪ من الأيزوبروبانول على الذبيحة ، ورأسه للتطهير. ثم استخدم مشرطا رقم 11 لقطع جلد فروة الرأس وإزالة السمحاق باستخدام مثقاب أسنان وسنا بقطر داخلي 4.5 ملم.

افصل جزءا دائريا من عظم الجلجلة. انقل جزء العظم إلى طبق بلاستيكي 100 ملم يحتوي على محلول ملحي معقم. في هذه المرحلة ، لاحظ الدم والأنسجة الرخوة المرتبطة بجزء العظام باستخدام ملاقط منحنية.

أمسك قطعة عظم واحدة في كل مرة واستخدم قضيبا قطنيا مليئا لمسحها جيدا. إزالة أي أنسجة دماغية وأنسجة رخوة ودم. استخدم مقصا ناعما لقطع أي رقائق عظمية تظل ملتصقة بالكسب غير المشروع برفق بحيث يكون للكسب غير المشروع شكل دائري مثالي.

اغمس كل طعم مرة واحدة في أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 70٪ إيثانول ومرتين في أنابيب سعة 15 مليلتر تحتوي على PBS لغسل الإيثانول. قم بتجميد الطعم الخيفي في فريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر في أنابيب التبريد لمدة أسبوع واحد على الأقل بعد التجميد. تأكد من أن الطعم الخيفي يبدو شفافا بالعمل مع الفئران المعدلة وراثيا المتلقية التي تعبر عن لوسيفيراز تحت سيطرة محفز أوستيوكالسين.

بعد تخدير أنثى فأرة عمرها من سبعة إلى ثمانية أسابيع باستخدام التخدير عن طريق الحقن والتحقق من التخدير. استخدم ماكينة قص الشعر عكس اتجاه نمو الشعر لحلاقة المنطقة الجلسية. ضع مزيل شعر لإزالة أي بقايا من الفراء واستخدم شاشا جافا لمسحه بعد مدة لا تزيد عن دقيقتين.

ثم استخدم الشاش المنقوع في المحلول الملحي لمسح المنطقة. تطهير فروة الرأس عن طريق وضع 5٪ كلورهيكسيدين تحت الجلد. حقن خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام من الكاربروفين المخفف في 200 ميكرولتر من المحلول الملحي.

ضع مرهم العين لمنع الجفاف والحفاظ على على وسادة حرارية في جميع الأوقات. ثم ضع تحت مناظير التشغيل. بعد ذلك ، باستخدام مقص ناعم وملاقط ، قم بعمل قطع بيضاوي بطول سنتيمتر واحد في جلد فروة الرأس باستخدام الملقط.

امسك السمحاق واستخدم مقصا دقيقا لقطعه باستخدام مثقاب أسنان وقطر خارجي بقطر خمسة ملليمترات ، قم بحفر العيب الجليزي على بعد ملليمترين من خياطة لامدويد لتجنب تغلغل الأم الجافة. حفر ثلاثة أرباع الطريق في العظم واستخدم ملعقة لفصل جزء العظم. تتمثل إحدى الخطوات الحاسمة في البروتوكول في إنهاء موقع العيب.

ستؤدي إصابة خياطة اللابو إلى نزيف حاد. لذلك ، يجب توخي الحذر حتى لا تعطل مقياس التحمل الأساسي والسهمي العلوي. لزرع طعم تلقائي.

استخدم 10 مل من المحلول الملحي المعقم في صفيحة بلاستيكية مقاس 10 ملم لغسل جزء العظام. قم بإزالة الجلطات الدموية دون إزالة الأنسجة الرخوة لزرع ذوبان الطعم الخيفي مسبقا وتطبيع العينة إلى درجة حرارة الغرفة. ثم اغسل جزء العظام بملاقط منحنية.

ضع الطعم العظمي في العيب حتى لا يلمس هوامش العيب. ثم باستخدام هلام الفيبرين ، قم بلصق الكسب غير المشروع على عظم المضيف. خياطة الجلد بأربعة خياطة فيكريل وتطبيق بوفيدون اليود على الجرح الجراحي.

ضع علامة على أذن الماوس وحقن 0.25 ملليغرام لكل كيلوغرام مضاد للسيدان. لعكس تأثير التخدير للحوم. قم بإجراء رعاية ما بعد الجراحة وفقا لبروتوكول النص.

تحضير محلول ملحي هيبارين بوزن 2000 وحدة من هيبارين الصوديوم ونقله إلى أنبوب سعة 50 مل. أضف 20 مل من المحلول الملحي المعقم إلى الأنبوب ورجه. املأ جيدا حقنة قفل إغراء سعة 20 ملليلتر ب 15 مل من محلول ملحي هيبارين دافئ وقم بتوصيل المحقنة بمجموعة أوريد فروة الرأس قياس 23.

بتثبيت المحقنة على مضخة حقنة واضبط المضخة على 10 ملليلتر بمعدل مليلتر واحد في الدقيقة. بعد تخدير الماوس وفقا لبروتوكول النص ، قم بتأكيد التخدير بقرصة إصبع القدم وقم بتثبيت الماوس. ظهره إلى لوحة تثبيت ملفوفة ببطانة سطحية ماصة.

بعد ذلك ، قطع الجلد من البطن إلى الرقبة. قطع جدار البطن حتى عملية الخنجري. ثم قم بقص القفص الصدري على جانبه الجانبي ، مع التأكد من أن القلب مكشوف بالكامل وعدم تلف القلب والرئتين.

استخدم تمرق لسحب القص. أدخل إبرة الفراشة بمقدار ثلاثة ملليمترات في البطين الأيسر. ثم باستخدام ثلاث ثوان من الغراء ، قم بلصق الإبرة على القلب وجدار الصدر يعد إدخال إبرة الفراشة في البطين الأيسر إجراء دقيقا.

حاول تجنب الإدخال في البطين الأيمن أو في عمق البطين الأيسر لأنه سيخترق جدار القلب الخلفي. بعد ذلك ، قم بتنشيط المضخة على الفور. بعد دقيقة ، قم بتشريح الوريد المشي المائي السفلي لخفض ضغط الأوعية الدموية.

قم بإمالة اللوح بحيث تتدفق السوائل بعيدا عن الرأس. سيؤدي التروية الناجحة إلى تطهير الكبد والأوعية الدموية. الآن يتم دمج 10 ملليلتر من 4 ٪ فورمالديهايد.

تجنب تغلغل فقاعات الهواء في الأوعية الدموية. عندما يكتمل التروية كما يتضح من تصلب الذيل ، استخدم 10 مل من المحلول الملحي الهيباريني لطرد الفورمالديهايد. قم بإعداد عامل التباين الراديوي غير الشفاف وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

عن طريق خلط المركب المخفف وعامل المعالجة في أنبوب بلاستيكي ، قم بتفريف بعامل التباين بمعدل واحد مليلتر في الدقيقة. يجب أن تتحول الشرايين المعوية والكبدية التاجية إلى اللون الأصفر عند اكتمال التروية. اقطع الأنبوب إلى إبرة الفراشة ولف الذبيحة بالورق لمنع تسرب المحلول إلى منطقة الجلدي.

ضع على أربع درجات مئوية طوال الليل للسماح بالبلمرة في اليوم التالي. لتشريح المنطقة الجلجلية ، استخدم مشرطا لقطع الجلد بشكل جانبي قدر الإمكان ، وتجنب إتلاف منطقة الجمجمة ذات الاهتمام. حدد موقع الطعم العظمي ثم استخدم مقصا دقيقا لقطع عظم الجمجمة على بعد 10 ملليمترات من الكسب غير المشروع.

باستخدام ماسح التصوير المقطعي المحوسب الصغير. اضبط مجال الرؤية على 20.5 ملم من طاقة الأشعة السينية إلى 55 كيلو فولت في الثانية شدة إلى 145 ميكروأمبير وألف إسقاط لكل 360 درجة ووقت تكامل يبلغ 200 مللي ثانية. فحص عينة عظم الجلسنة المعزولة.

لاحظ الشرائح المعاد بناؤها ثنائية الأبعاد التي تم إنشاؤها بواسطة برنامج التصوير المقطعي المحوسب الصغير. تأكد من مسح منطقة الاهتمام بشكل صحيح ثم تحديد موقع العيب الجليمي. إذا كان من السهل التعرف على الأوعية المنفوخة ، فاستخدم 6٪ من حمض ثلاثي كلورو أسيتيك المخفف في الماء المقطر المزدوج.

لإزالة الكلس من العينة ، أعد مسح العينة ضوئيا باستخدام نفس المعلمات كما هو موضح للتو. حدد موقع خياطة lambdoid في شرائح 2D المعاد بناؤها. حدد حجما أسطوانيا مهما أو VOI بارتفاع ملليمترين وقطره ثمانية ملليمترات يكون عرضيا للخياطة.

هذا هو الموقع التشريحي للعيب. بجانب تقسيم العظم من الأنسجة الرخوة. اضبط الحد الأدنى على 130 وقم بتطبيق مرشح غاوسي ثلاثي الأبعاد مقيد لقمع الضوضاء جزئيا في وحدات التخزين.

توليد إعادة بناء 3D. التأكد من وضع VOI بشكل صحيح باستخدام برنامج IPL وكائن DT. تقوم وظيفة Peram بإنشاء خريطة سمك.

تصف هذه الوظيفة حجم الوعاء لكل قطر للوعاء ، وإجراء التصوير والتصوير المقطعي المحوسب الدقيق. وفقا لبروتوكول النص ، كما هو موضح هنا ، بعد سبعة أيام من الجراحة ، أظهر التصوير المقطعي المحوسب حجما أكبر بكثير من الأوعية الدموية ذات القطر الصغير والمتوسط التي تغذي منطقة الكسب غير المشروع بأكملها في الفئران التي تلقت توقيعات على عكس الفئران التي تلقت طعوما خيفية حيث بدا أن الأوعية تخترق من الخارج. بالإضافة إلى ذلك ، أظهر التصوير الفلوري ارتفاعا ملحوظا في نضح الدم في المعالجة بالتوقيعات.

بحلول اليوم 14 ، تصل الشجرة الوعائية في الطعم الخيفي إلى جميع الطعوم على مقربة. ومع ذلك ، كان حجم السفن أقل بكثير مقارنة بمجموعة Autographt. كان هذا الاختلاف أكثر بروزا عندما تمت مقارنة الأوعية التي يتراوح قطرها من 0.08 إلى 0.1 ملم كما هو موضح هنا بعد 28 يوما من الجراحة ، وعاد حجم الأوعية الدموية إلى خط الأساس بعد سبعة أيام من الجراحة.

أظهرت مجموعة الطعم الذاتي تمعدنا أكبر للعظام بشكل ملحوظ كما يتضح من التصوير الفلوري باستخدام مسبار موجه للهيدروكسيباتيت. تشكلت العظام في جميع أنحاء قرب الكسب غير المشروع في هذه المجموعة بينما تشكلت فقط عند هوامش العيوب في مجموعة الطعم الخيفي كما هو موضح بشكل حلقة بعد 56 يوما من الجراحة ، كان حجم العظام أعلى بكثير وكان سمك الكسب غير المشروع أكبر بكثير في التي تلقت توقيعات مقابل الطعوم الخيفية بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية الجراحية في حوالي 25 دقيقة. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء التصوير الفلوري باستخدام تحقيقات أخرى من أجل الإجابة على أسئلة إضافية ، على سبيل المثال ، أنشطة ناقضات العظم وإشراك الاستجابة المناعية.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تصوير تجديد العظام في تكوين الأوعية الدموية الأساسي.