تطوير العلاجات التوافقية لإصابة الحبل الشوكي باستخدام توصيل الخلايا الجذعية

في هذه الدراسة، تم تطوير منصة توصيل الخلايا التوافقية لعلاج إصابات الحبل الشوكي باستخدام الهيدروجيلز المستخلطة من الأنسجة. يتم تحليل فعالية إزالة الخلايا وقابلية بقاء الخلايا في الهيدروجيلات المركبة لتحديد إمكاناتها كمنصة زراعة ثلاثية الأبعاد. ستسمح النتائج بمزيد من التحقيق في الإمكانيات العلاجية لإصابة الحبل الشوكي.

مؤخرا، في مجال إصلاح إصابات الحبل الشوكي، تم استخدام إزالة الخلايا بشكل واسع في سياق الهيدروجيلا. تقوم هذه العملية بإزالة جميع الحطام الخلوي والنووي من الأنسجة أو الأعضاء لمنع الاستجابة المناعية السلبية، مع الحفاظ على مكونات المصفوفة خارج الخلية. الآن بعد أن تم تحسين الهيدروجيلز العصبية المركبة، سيستمر في توصيف المنصة لتعظيم السلوك التجديدي العصبي لمراكز التجميل العصبي لإصلاح الحبل الشوكي.

سيساهم هذا العمل في تطوير العلاجات التركيبية لإصلاح إصابات الحبل الشوكي، خاصة تعزيز علاج الخلايا الجذعية لإمكانية الترجمة السريرية. للبدء، قم بإذابة الحبل الشوكي المجمد عند درجة حرارة أربع درجات مئوية في الثلاجة لمدة 18 إلى 24 ساعة قبل إزالة الخلايا. باستخدام مقص معقم، أزل الجافة بعناية.

اقطع الحبل الشوكي إلى قطع صغيرة، بطول حوالي سنتيمتر واحد. ضع ثلاث قطع في أنبوب سعة 50 ملليتر. اشطف الحبل الشوكي بماء منزوع الأيونات على درجة حرارة أربع درجات مئوية لمدة 18 إلى 24 ساعة عند 60 دورة في الدقيقة.

بعد ذلك، شطف الحبل الشوكي ب 0.025٪ تريبسين EDTA، ثم شطف PBS لمدة 15 دقيقة مرتين. ثم شطف الحبل الشوكي بالمحاليل التالية لإزالة الخلايا المعدنية. وأخيرا، اشطف الحبل الشوكي بماء منزوع الأيونات لمدة ساعة مرتين، ثم شطف PBS لمدة ساعة.

ثم قم بتخميد الحبل الشوكي بدرجة حرارة 0.01 مليبار و56 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام قبل تخزينه حتى الاستخدام. قم بإذابة العصب الوركي الخارجي المجمد سابقا عند أربع درجات مئوية في الثلاجة لمدة 18 إلى 24 ساعة قبل إزالة الخلايا. الآن، اقطع العصب الوركي إلى قطع صغيرة، بطول حوالي سنتيمتر واحد.

ضع ثلاث قطع في أنبوب سعة 50 ملليتر. اشطف العصب الوركي بماء منزوع الأيونات لمدة سبع ساعات. ثم شطف العصب الوركي بالمحاليل التالية لإزالة الخلايا الخارجية.

ثم قم بتخميله بحرارة 0.01 مليبار و56 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام قبل تخزينه حتى الاستخدام. ابدأ باستخدام مقص المعقم لتقطيع الحبل الشوكي والعصب الوركي الذي تم فصله من خلايا الخنزير إلى مسحوق. هضم الأنسجة بشكل منفصل في محلول حمض الهيدروكلوريك العادي 0.01 يحتوي على ملليغرام واحد لكل ملليلتر من البيبسين بتركيز 15 ملليغرام لكل مليليتر.

ضع قضيبا مغناطيسيا في المحلول وحرك على 500 دورة في الدقيقة لمدة لا تقل عن أربعة أيام عند أربع درجات مئوية لتوليد محاليل ما قبل الجل. امزج بين العصب الوركي والتهاب الحبل الشوكي. ثم يتم تخفيف الهيدروجيل إلى التركيز المطلوب باستخدام وسط M199 وPBS.

استخدم هيدروكسيد الصوديوم العادي وحمض الهيدروكلوريك لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4. بمجرد ضبط الرقم الهيدروجيني، أعد تعليق الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية في الجل التحضيري بكثافة مليون خلية لكل ملليلتر. قم بتخفيف الجل المسبق إلى 12 ملليغرام لكل ملليلتر باستخدام PBS.

ضعه في الآبار، ثم ضع غطاء PDMS على الجل المسبق. حضن الطبق لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. ثم أضف PBS إلى الآبار.

أزل غطاء PDMS والمحلول. أضف وسط نمو ASC إلى الهيدروجيلاتين المحملة ب ASC وحضن عند 37 درجة مئوية للزراعة.