نموذج متعدد المختبرات لشبكة تقييم السكتة الدماغية قبل السريرية للسكتة الدماغية الجلطية مع تحلل الجلطات: TE-MCAo

نطاق أبحاثنا هو تطوير نموذج لسكتة دماغية انصمامية مع تحلل خثري متحكم به لاستخدامه في اختبارات علاجية متعددة المختبرات قبل سريرية صارمة. يتناول بروتوكولنا غياب نموذج بسيط وقابل لإعادة إنتاج السكتة الدماغية الخثرية الذي يحاكي التحلل السريري ويدعم التجارب السريرية متعددة المراكز. للبدء، قم بتصيير أنبوب PE-50 بشكل غير حاد عن طريق قطع الطرف بزاوية مائلة.

قص طرف نقطة الميل باستخدام مقص دقيق. بعد تجهيز الفأر المخدر للجراحة، قم بعمل شق عمودي في الجزء الداخلي من الفخذ، طوله حوالي 1.5 إلى سنتيمترين على طول الطية الطبيعية لتقاطع الإربية مع الساق. يجب أن يكون الشق متعامدا مع المسار التشريحي المتوقع للشريان الفخذي.

باستخدام تشريح حاد، قم بتحليل دقيق حتى الأوعية الفخذية. ثم افصل الشريان الفخذي عن الوريد والعصب اللذين يمتنان في نفس الحزمة. قم بتهيكل الشريان الفخذي في أقرب مكان ممكن، مع تتبع الشريان إلى مصدره الخلفي الصفاقي.

ضع حلقة من حرير 5-0 بشكل غير محكم حول الشريان الفخذي، واستخدم الذيل لتوفير توتر لطيف على الطرف القريب من الشريان. ثم أغلق الشريان الفخذي من الخلف بشريط حرير 5-0، واستخدم ذيل الغرز لتوفير توتر خفيف من الخلف باستخدام مشابك دموية (دموي). على بعد حوالي ثلثي المسافة من حلقة الغرز القريبة، ضع قطعة من خياطة الحرير تحت الشريان وقم بعمل شق شرياني صغير في البعيد عن الغرز الفضفاض باستخدام مقص دقيق.

باستخدام ملقط حاد، ارفع الفتحة العلوية لفتحة الشرايين وأدخل قسطرة PE-50 المشطوفة في الفتحة. حرك القسطرة إلى الأبعد قدر الإمكان، بحيث عند شد الحلقة المرتخية، تحيط بالقسطرة. شد الغرز برفق، مع التأكد من عدم انسداد القسطرة أو الجلوس على الحافة البحرية.

حرر مشبك الأحذية المطاطية. يجب أن يمتلئ القسطرة فورا بالدم. املأ ثلاثة أنابيب طرد مركزي بسعة 1.5 ملليتر، وخزنها عند أربع درجات مئوية.

بعد ملء الأنابيب، قم بإزالة قسطرة PE-50 من الشريان الفخذي، وربط الطرف القريب، وأغلق الشق بغرز برولين 5-0 متقطعة. لتحضير الجلطة، انقل 500 ميكرولتر من دم المتبرع الطازج أو المخزن إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملليتر، وأضف ملليلتر واحد من كلوريد الكالسيوم لعكس مضادات التخثر. ثم استنشق الدم فورا من أنبوب الطرد المركزي الدقيق إلى أنبوب PE-50 بقطر 100 سنتيمتر، باستخدام شفط لطيف، وحضن الأنبوب الملفوف في أنبوب PBS مسخن مسبقا عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين في فرن طاولة.

بعد طرد الجلطة في طبق بتري يحتوي على PBS، قطعها إلى أجزاء بطول حوالي ستة سنتيمترات باستخدام شفرة حلاقة. اسحب كل خثرة برفق داخل قسطرة PE-50 واخرجه بالكامل خمس مرات لغسلها. اغسل الجلطة مرة أخرى عن طريق سحبها برفق إلى قسطرة PE-10 وطردها بالكامل 15 مرة.

أضف 200 ميكرولتر من 4٪ إيفانز الأزرق إلى طبق بتري يحتوي على 10 ملليتر من PBS لتكوين التخفيف رقم 1. ثم يتم تعبئة 400 ميكرولتر من التخفيف رقم 1 في طبق بتري منفصل يحتوي على 20 ملليتر من PBS لتكوين التخفيف رقم 2. ضع الجلطة في محلول صحن إيفانز الأزرق المركز لثانية واحدة، ثم انقلها إلى طبق إيفانز الأزرق المخفف.

تحميل جلطة مغسولة واحدة في قسطرة دقيقة مسبقة الصنع بدون جلطة هوائية، باستخدام طريقة الرطب إلى الرطب. بمجرد تحميل الجلطة بالكامل، قم ببثق كمية كافية من الجلطة بحيث يبقى بالضبط خمسة سنتيمترات في القسطرة الدقيقة. قم بقص الزائدة بشفرة حلاقة.

حدد القسطرة الدقيقة على بعد 16 مليمترا من الطرف لتحديد مدى القسطرة التي يجب أن تتقدم داخل الفتحة. تم حقن الجلطات المحملة مسبقا في الشريان السباتي الداخلي ل 135 شخصا عبر ستة مختبرات بحثية لاختبار جدوى نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط الخثري. تم إجراء تصوير بالرنين المغناطيسي بعد ثلاثة أيام على 102 حيوان، مما يشير إلى معدل إكمال المسح بنسبة 75٪.

كان فقدان الحيوانات قبل التصوير ثابتا في جميع المختبرات الستة. كان متوسط حجم الآفات عبر جميع المواقع 13٪ من نصف الكرة الأرضية المماثل، مع بعض التفاوت بين المختبرات الستة. بروتوكولنا يحاكي الجلطة البشرية وتحلل الجلطة، ويقلل من استخدام الحيوانات، ويوحد الجراحة، ويحقق قابلية تكرار موثوقة متعددة المراكز بشكل جيد.

كنتيجة مهمة لأبحاثنا، أنشأنا نموذج TE-MCAo قابل للتوسع قابل للتكرار يمكن استخدامه عبر عدة مختبرات مع نتائج متسقة ومراقبة جودة منظمة. يمكن استخدام هذا النموذج باستمرار في دراسات السكتة الدماغية المفردة ومتعددة المختبرات، مما يحسن الفحص العلاجي ويسرع ترجمة العلاجات الوقائية الدماغية المرشحة.