在芽殖酵母中的自我复制寿命测量

Summary

在这篇文章中，我们提出了一个用于测量酵母母细胞的复制寿命一般协议。

Abstract

老化是一种退化性的过程，特点是逐渐恶化的细胞成分和细胞器造成的死亡率。芽殖酵母

Protocol

第1部分:准备株的复制寿命分析和板

本节介绍的复制寿命试验和酵母细胞寿命分析的准备使用固体YEPD板的准备。

1. 使用适当的消毒技术，，准备将用于培养酵母细胞和复制寿命分析的YEPD培养基琼脂平板（1％酵母提取物，细菌用2％的蛋白胨，2％琼脂，2％葡萄糖）。你应该准备至少2板寿命实验分析，每4-5株。板应准备至少2天前寿命试验，寿命试验开始前，允许干。如果实验内不会4-5天浇板发起的，他们应该被放置在冷藏孵化器，并在封口膜包裹或塑料，以防止dessication。
2. 删除从冻结的股票，到YEPD培养基琼脂平板上的单菌落连胜酵母菌株。截至6株可以很容易地在同一YEPD板挑染划分为同样大小的饼形楔板。
3. 2天，在30 ° C培养的细胞。
4. 删除到一个新的YEPD板的细胞的孵化器和修补细胞从一个单一的殖民地。两个补丁程序，从两个不同的菌落应为每一株产生。在这个时候，要分析的菌株，应进行编码，以确保复制寿命试验是"盲点"，其中的dissectors不知道个别菌株的身份。
5. 孵育30的补丁，编码细胞° C，直到第二天晚上。
6. 删除每个编码株的细胞和新鲜YEPD板轻轻修补细胞，这将作为复制寿命​​分析所用的实验板。应修补细胞沿着垂直线左侧YEPD板（图1）。约3-5％的补丁盘是最优的，假设月20日从每一个补丁细胞复制寿命分析。这是没有必要也不可取，转移大量的细胞，新鲜的YEPD板，因为这将导致细胞生长在厚厚的孵育过夜，这可能会限制随后....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
琼脂	试剂	Fisher Scientific	DF0145-17-0 （214530）
Bacto-Peptone	Reagent	Fisher Scientific	DF0118-17-0 （211677）
酵母提取物	试剂	Scientific	DF0886-17-0 （288620）
葡萄糖