MALDI样品制备:超薄层的方法

Summary

这个视频演示的超薄层肽和蛋白质基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI - MS的）分析的矩阵/待测的准备。

Abstract

本视频演示了矩阵/分析物的分析肽和蛋白质基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI - MS的^）1，2层超薄的准备。超薄层的方法，涉及生产样板，作为一个矩阵/分析物的混合物随后结晶播种地面基材层的基质晶体（α-氰基-4 - 羟基苯甲酸）。比其他样本沉积的方法（如干燥液滴）的超薄层的方法的优点是，它提供了（我）更大的宽容，杂质，如盐和洗涤剂，（二）更好的分辨率，（三）更高的空间统一。精确质量测定的蛋白质，这种方法尤其有用。该协议最初是开发和优化膜蛋白的分析，并成功地用于分析离子通道，代谢产物的运输，和受体，含有2和12个跨膜^结构域2之间。由于原来的出版物，它也显示出可溶性蛋白的分析同样有用。事实上，我们已经使用了大量的蛋白质的属性的范围很广，包括那些具有高的分子量为380 ^kDa的3。这是目前我们所有的蛋白质分子质量分析方法的选择。所描述的过程，坚持生产高品质的光谱，和它是敏感的，功能强大，且易于实现。

Protocol

这是非常重要的，穿在编制了一层薄薄的无粉手套。

清洁样板

1. 使用不锈钢或黄金的MALDI样品板。
2. 用甲醇清洗和Kimwipe轻轻擦拭。不要揉搓或刷洗Kimwipe的表面，防止刮伤表面。
3. 洗净与H _{2 O}和Kimwipe轻轻擦拭。
4. 用甲醇清洗和Kimwipe轻轻擦拭。
5. 如果需要，重复甲醇/ H _{2 O} /甲醇清洗周期，总是与甲醇结束。
6. 确保有没有鬼点或盘上的剩余残渣。如果有鬼魂点，与去离子水冲洗，而摩擦表面用戴手套的手（不要擦Kimwipes）板。重复甲醇/ H _{2 O} /甲醇清洗周期。
7. 使用后立即清洗板。

一层薄薄的底物溶液的制备

1. 混合1饱和4 HCCA（乙腈2部分，1份水，0.1％TFA的最终）和3部分异丙醇。
   
   注:薄层基板的解决方案是非常稳定，可在室温下保存在黑暗的一年。这也可能是保存在4 ° C。

制作薄层基板

1. 于薄层板左侧的中心，并与一个枪头一侧蔓延的底物溶液20 -50μL。扫一个方向。
2. 随着解决方案的干燥，有机溶剂的蒸发速度非常快，离开板面背后分钟的水液滴。在....

Materials