MALDI 样品制备：超薄层法

摘要

本视频演示了为通过基质辅助激光解吸电离质谱法（MALDI-MS）分析肽和蛋白质而制备超薄基质/分析物层的方法。

摘要

本视频展示了用于通过基质辅助激光解吸电离质谱法（MALDI-MS）分析肽和蛋白质的超薄基质/分析物层的制备方法 ^1,2超薄层法涉及在样品板上制备一层基质晶体（α-氰基-4-羟基肉桂酸）的基底，该基底可作为后续基质/分析物混合物结晶的成核基础。与其它样品点样方法相比，超薄层法具有以下优势（例如 干燥液滴法的优点包括：(i) 对盐类和去污剂等杂质具有更高的耐受性，(ii) 分辨率更优，以及 (iii) 空间分布更均匀。该方法特别适用于蛋白质的精确质谱测定。该实验方案最初为膜蛋白分析而开发并优化，已成功用于分析含有 2 至 12 个跨膜结构域的离子通道、代谢物转运蛋白和受体。 ²自首次发表以来，该方法也被证明同样适用于可溶性蛋白质的分析。事实上，我们已将其应用于大量具有广泛特性的蛋白质，包括分子质量高达380 kDa的蛋白质。 ³目前，该方法是我们进行所有蛋白质分子量分析的首选方法。所述操作流程 consistently 产生高质量的质谱图，且具有高灵敏度、高稳健性，易于实施。

方案

在制备薄层时，佩戴无粉手套非常重要。

样品板的清洗

1. 使用不锈钢或金制的MALDI样品靶板。
2. 用甲醇（MeOH）清洗，并用无尘纸轻轻擦拭。切勿用力摩擦或刷洗表面，以免划伤靶板表面。
3. 用 H₂O 清洗，并用无尘纸轻轻擦拭。
4. 用甲醇（MeOH）清洗，并用无尘纸轻轻擦拭。
5. 如有需要，重复甲醇/水（H₂O）/甲醇清洗步骤，每次均须以甲醇结束。
6. 确保靶板表面无残留的“鬼影斑点”或残迹。若存在鬼影斑点，应在戴手套的手轻轻摩擦表面的同时，用去离子水冲洗靶板（切勿使用无尘纸擦拭），然后重复甲醇/水（H₂O）/甲醇清洗步骤。
7. 清洗后应立即使用该靶板。

薄层基质溶液的制备

1. 将1份饱和4-HCCA（2份乙腈，1份水，终浓度0.1% TFA）与3份异丙醇混合。
   
   注意： 薄层基质溶液非常稳定，且 可在避光条件下于室温保存一年，也可在4 °C下储存。

制备薄层基质

1. 在板的左侧中心位置加入 20–50 µL 薄层基质溶液，并用移液器吸头侧面涂抹，单向扫动展开。
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