仓鼠背部皮肤的皮肤利什曼病：一种用于抗利什曼原虫药物筛选的有效模型

摘要

通过在背部皮肤进行皮内注射Leishmania前鞭毛体，优化用于皮肤利什曼病的实验性仓鼠模型。该方法在接种、后续观察、病灶特征描述、治疗实施以及临床样本采集过程中均具有优势。动物的运动能力、觅食与饮水行为、嬉戏及社交活动均保持正常。

摘要

传统上，实验中将仓鼠接种于鼻部或足垫。然而，在这些接种部位并不总是形成溃疡，且病损大小的测量操作困难，动物也常因病损而出现进食、呼吸和活动困难。为了优化皮肤利什曼病的仓鼠模型，选用年轻成年雄性和雌性金黄仓鼠（Mesocricetus auratus) 通过皮内注射方式注入背部皮肤，剂量为 1 至 1.5 x 10⁷ 前鞭毛体 利什曼原虫 物种及后续病灶的进展在感染后长达16周内进行评估。选择金黄地鼠是因为其被认为是评价抗药物效果的合适生物模型 利什曼原虫 由于它们易受不同物种的感染，仓鼠的皮肤感染会形成慢性但可控的病灶，其临床进程表现出与人类相似的症状。因此，通过测量硬结和溃疡面积来确定感染范围是可行的。该方法在接种、随访及典型病灶（溃疡）的表征过程中展现出良好的适应性和操作便利性，同时也适用于多种途径的治疗干预以及不同治疗后临床样本的采集。采用此方法可有效保障动物在运动、觅食与饮水、玩耍及社交活动等方面的生存质量。

方案

1. 豚鼠感染

1. 动物

近交系雌性和雄性金黄地鼠（Mesocricetus auratus），6-8 周龄，体重 140-160 g。动物饲养于温度可控的实验动物设施中，饲喂标准啮齿类干燥饲料，并自由饮水 随意摄取所有涉及动物的实验程序均经机构实验动物使用伦理委员会批准。在进行皮肤嗜性病原体实验感染前 利什曼原虫 寄生虫感染的动物根据标准操作程序进行性别鉴定、标记和称重。性别鉴定时，通过观察雌性动物的乳腺线以及较短的肛门-生殖器距离，或雄性动物的睾丸以及较长的肛门至包皮之间的距离来判断性别。随后，动物通过耳部穿孔或使用浸有苦味酸的棉签涂抹皮肤区域进行标记。耳部穿孔时，先用70%酒精清洁耳部，再使用啮齿类动物专用耳打孔器穿孔，注意避开含有血管的区域。腹腔注射氯胺酮（50 mg/kg）与赛拉嗪（20 mg/kg）按9:1比例配制的混合物，剂量为260-300μl 建议使用25号针头。最后，将动物放入已置于精密天平上的笼盒中称重。

2. 寄生虫

皮肤嗜性利什曼原虫前鞭毛体 利什曼原虫 物种，例如 L. amazonensis，接种于双相 Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) 培养基中培养，于 26°C. 采用感染5天的间歇期....

讨论

皮肤利什曼病在热带和新热带地区呈地方性流行。由于其临床表现谱广泛，从皮肤小结节到严重的黏膜组织破坏不等，因此常被称为一组疾病。目前大多数可用药物价格昂贵，需要长期治疗方案，且疗效正逐渐下降，因此亟需发现新的药物。

小鼠模型被广泛应用，但存在一些缺点。例如，基于皮肤利什曼原虫前鞭毛体皮内注射后所形成的病变 利什曼原虫 物种，小鼠可分为三组：高度易感型，表现为持续性感染，特征为溃疡性病灶不断扩展，如 BALB/c 和 DBA/2、DBA/3 小鼠；相对抗性型，病灶可能在 8 周内自行消退，如 CBA/H、C3H/He 和 A/J 小鼠；以及高度抗性型，在注射部位不出现典型的皮肤利什曼病病灶，如 NZB 和 C57Bl/6 小鼠 ⁴与小鼠皮肤利什曼病模型相比，该疾病在不同常见近交系小鼠品系中的病程表现出显著差异，而 利什曼原虫 物种，金黄地鼠， Mesocricetus auratus 被认为是评估抗药物效果的合适生物模型 利什曼原虫 物种，因为它们易受不同物种感染 利什曼原虫.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯胺酮	试剂	Holliday –Scott S.A
赛拉嗪	试剂	Synthesis
PBS	试剂	GIBCO, by Life Technologies	14190-136
数显卡尺	设备	Fisher Scientific	15-077-958
吉姆萨染液	试剂	Sigma-Aldrich	GS1L-1L
福尔马林	试剂	Nova lab	11273
石蜡	试剂	Pechiney Plastic Packaging	PM-996
苏木精	试剂	Nova lab	10870103
伊红		Nova lab	10870203
Kodak Ektachem 干化学分析仪	设备	Kodak Ektachem	DT-60
葡甲胺锑	试剂	Aventis
显微镜	设备	Nikon Instruments	YS2-T