方法文章

用线 Myography 测定小鼠肠系膜动脉的等轴收缩力

DOI：

10.3791/58064

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2018年8月20日

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1Model Animal Research Center and MOE Key Laboratory of Model Animal and Disease Study, Nanjing University, 2School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine

本文内容

摘要

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采用线 myograph 技术对血管平滑肌功能和筛查新药进行了研究。我们报告一个详细的协议, 以测量的等距收缩性的小鼠肠系膜动脉和筛选新的松弛剂血管平滑肌。

摘要

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线 myograph 技术是用来评估血管平滑肌收缩性的反应, 对退极化, GPCR 激动剂/抑制剂和药物.它广泛应用于血管平滑肌的生理功能、高血压等血管疾病的发病机制, 以及平滑肌松驰药物的发展。老鼠是一种广泛使用的模型动物, 有大量的疾病模型和基因改良菌株。本方法对小鼠肠系膜动脉的等距收缩进行了详细的测定。1.4 毫米的小鼠肠系膜血管阻力动脉被隔离, 并安装在一个 myograph 室通过通过两个钢丝通过其流明。在平衡和规范化步骤之后, 在收缩试验前两次用高钾+溶液增强容器段。作为该方法在药物开发中应用的一个例子, 我们测量了一种新的天然物质 neoliensinine 的松弛效应, 从中草药中分离出来的, 莲子的胚胎 (莲莲莲藕). 小鼠肠系膜上动脉。在 myograph 室安装的容器段受到高 K+溶液的刺激。当力张力达到稳定的持续阶段时, neoliensinine 的累积剂量增加到腔室。我们发现 neoliensinine 对平滑肌收缩有剂量依赖性的松弛作用, 因此表明它对高血压有潜在的活性。此外, 由于在高钾溶液的安装和维持收缩力的作用下, 血管段至少能存活4小时 , 我们建议 myograph 系统可用于药物筛选的耗时过程。

引言

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这里使用的小容器 myograph 系统是用来测量直径从100到400µm 的小电阻容器的等距收缩. 隔离的小容器 (大约2毫米长) 被两个 40-µm 直径导线插入并且然后按顺序安装在千分尺端和换能器侧颚上。这 myograph 技术在1972年第一次被建议了, 然后主要由 Mulvany 和他的同事开发了2,3,4,5,6。它现在是一个成熟的技术与稳定的设备, 容易的性能和标准规范化程序7,8,9。我们利用这种方法对小鼠肠系膜动脉的测量进行了一些修改。

血管平滑肌线几乎所有血管的墙壁。它们的基本功能是通过收缩来产生力量来响应各种刺激。血管平滑肌的正常收缩力对血压调节和营养补充10至关重要。血压异常调节导致多种疾病, 包括高血压、心力衰竭和缺血.一些研究表....

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方案

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动物操作由南京大学动物研究中心的动物保育和使用委员会 (IACUC) 批准。

1. 解决方案准备

  1. 用137.0 毫米氯化钠, 2.7 毫米氯化钾, 1.8 毫米 CaCl2, 1 毫米氯化镁2∙6H2O, 5.6 毫米 d-葡萄糖, 10 毫米 HEPES, pH 7.3-7.4, 制备 HEPES Tyrode 溶液 (h-T)。
  2. 用140.6 毫米氯化钠, 2.7 毫米氯化钾, 1 毫米氯化镁2∙6H2O, 5.6 毫米 d-葡萄糖, 10 毫米 HEPES, pH 7.3-7.4, 制备 HEPES-Tyrode 溶液, 不含钙 (Ca2 +自由 H T)。
  3. 用15.7 毫米氯化钠, 124.0 毫米氯化钾, 1.8 毫米 CaCl2, 1 毫米氯化镁2∙6H2O, 5.6 毫米 d-葡萄糖, 10 毫米 HEPES, pH 7.3-7.4, 制备 HEPES-Tyrode 溶液, 使用124毫米氯化钾 (高 K+)。

2. 实验准备

  1. 使用37摄氏度水浴预热 H T 和高钾+溶液。

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结果

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我们用多线 myograph 系统测量了小鼠肠系膜动脉的等距收缩力, 并对莲子胚 neoliensinine 纯化的松驰效应进行了评估 (莲莲藕)。14. 小鼠肠系膜抗性动脉被隔离, 清除结缔组织, 并切割成1.4 毫米段。动脉段是由两根钢丝插入在 Ca2 +免费的 H T 溶液中的培养皿, 然后该段安装在两个颌骨的 myograph 室 (图 2A)。安装后, 两根电线被调整为平行, 关闭, 但不接触对方 (图 2B)。在力测量前, 用高 K+溶液对容器段进行规范化和增强两次, 以稳定容器。在规范化的过程中, 该船只被拉伸数次, 直到达到 IC 100 的价值,每个拉伸周期包括强劲的收缩, 快速松弛和部队维护在六十年代 (图 3)。高钾溶液诱导的血管平滑肌收缩通常.......

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讨论

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高血压是一个广泛的公共卫生挑战, 由于其严重并发症, 包括心血管和肾脏疾病16。了解高血压发病机制, 探索更多抗高血压药物已成为该领域的一项紧迫任务。血压是由循环的外周阻力产生和维持的。根据泊肃叶定律, 相对较小的动脉产生很大比例的循环阻力, 并作为主导的血压3,10的生产者。因此, 测量小阻力动脉而不是大动脉更适合于血压的研究。线 myograph 技术是研究小阻力动脉生理功能和血管疾病发病机制的最佳方法之一。

小血管线 myograph 系统已在其他报告中得到很好的记录, 用于测量大鼠肠系膜动脉8和小鼠动脉 (如主动脉9) 的收缩。利用遗传操作、多种疾病模型和药物筛选模型, 鼠标已成为许多领域广泛使用的模型动物。因此, 在这里, 我们提供了一个改进的协议, 该方法测量小鼠肠系膜动脉收缩。在本报告中, 我们成功地测量了小鼠.......

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披露

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作者没有什么可透露的。

致谢

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我们感谢魏琪博士 (苏州大学, 苏州市, 中国) 和闫宁桥 (陕西师范大学, 西安, 中国) 的技术援助。这项工作得到了中国国家自然科学基金 (赠款31272311、81373295和 81473420) 的支持, 并由江苏省高等教育机构优先学术项目开发资助的项目 (批准号:ysxk-2016)。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
多线肌动图系统DMT610-M
不锈钢丝DMT400447
Geuder 解剖剪刀DMT400431
Dumont 镊子DMT300413
PowerLab/8SPADInstrumentsML785
软件ADInstrumentsLabChart 5
NaClSigmaAldrichS5886
KClSigmaAldrichP5405
CaCl2SigmaAldrichC4901
MgCl2·6H2OSigmaAldrichM2393
D-葡萄糖SigmaAldrichG6152
HEPESSangon BiotechA100511-0250
NaOHSigmaAldrichS8045
DMSOSigmaAldrichD2650

参考文献

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  1. Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
  2. Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature<....

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重印与许可

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标签

Wire MyographyVascular Smooth MuscleMouse Mesenteric ArteryIsometric ContractilityHigh Potassium SolutionNeoliensinine Relaxant EffectDrug ScreeningTissue NormalizationForce TransductionChamber Equilibration

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