提出一种低成本脑电图记录系统,并结合毫米级线圈,用于在活体小鼠大脑中进行经颅磁刺激。in vivo。通过使用传统螺钉电极和自制的柔性多电极阵列基底,可在小鼠大脑中实现对经颅磁刺激响应的多部位记录。
方法文章
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提出一种低成本脑电图记录系统,并结合毫米级线圈,用于在活体小鼠大脑中进行经颅磁刺激。in vivo。通过使用传统螺钉电极和自制的柔性多电极阵列基底,可在小鼠大脑中实现对经颅磁刺激响应的多部位记录。
一种低成本脑电图(EEG)记录系统用于驱动小鼠脑部经颅磁刺激(TMS) 体内 利用毫米级线圈。结合传统螺钉电极与自制的柔性多电极阵列基底,可实现对小鼠脑部的多点记录。此外,本文还介绍了如何使用实验室常见的低成本设备制备毫米级线圈。同时提供了柔性多电极阵列基底的制备流程以及螺钉电极的外科植入技术,这些步骤对于获取低噪声脑电图信号至关重要。尽管该方法适用于记录任何小型动物的脑部活动,但本报告重点介绍在麻醉小鼠颅骨上的电极实施。此外,该方法也可轻松扩展应用于通过有线连接记录清醒小型动物的实验。 通过 一个通用适配器,并在记录期间通过TMS设备固定于头部。本文描述了当前版本的EEG-TMS系统,该系统最多可包含32个EEG通道(文中以包含16个通道的设备为例,展示通道数较少的情况)和一个TMS通道设备。此外,简要报告了将EEG-TMS系统应用于麻醉小鼠所获得的典型结果。
经颅磁刺激(TMS)因其非侵入性或低侵入性,已成为人类脑科学研究、临床应用以及动物模型研究中一种前景广阔的工具。在TMS应用的早期阶段,对人类和动物单脉冲及成对脉冲TMS的皮层效应测量主要局限于运动皮层;可测量的输出信号也仅限于运动诱发电位以及涉及运动皮层的诱发肌电位1,2。为了扩展可通过TMS调控进行测量的脑区,脑电图(EEG)记录被整合到单脉冲和成对脉冲TMS中,成为一种直接检测全脑各区域兴奋性、连接性以及时空动态特性的有效方法3,4,5。因此,TMS与EEG记录的同步应用(TMS-EEG)已被用于探测人类和动物大脑多个表层皮层区域,以研究皮层内神经环路(参见Tremblay等人的研究6)。此外,TMS-EEG系统还可用于分析其他皮层时空特征,包括信号向其他皮层区域的传播以及振荡活动的产生7,8。
然而,由于经颅磁刺激(TMS)具有非侵入性,限制了我们对其在应用过程中脑功能活动机制的理解,因此其在脑内的作用机制仍处于推测阶段。因此,从啮齿类动物到人类的侵入性转化研究对于阐明TMS对神经环路及其活动影响的机制至关重要。特别是对于动物中的TMS-EEG联合实验,目前尚未针对小型动物开发出成熟的同步刺激与测量系统,研究人员往往需要根据特定的实验需求通过反复试验自行构建此类系统。此外,小鼠模型在其他模型中具有重要优势 体内 动物物种模型,因为已有大量转基因和品系分离的小鼠品系作为生物资源可供使用。因此,建立一种适用于小鼠的经颅磁刺激-脑电图联合检测系统的方法,将为众多神经科学研究人员所期待。
本研究提出了一种可应用于小鼠脑部同步刺激与记录的经颅磁刺激-脑电图联合方法。小鼠是神经科学研究中最主要的转基因动物模型,该方法可在典型的神经科学实验室中便捷地构建。首先,介绍了一种低成本的脑电图记录系统,该系统采用常规螺钉电极和柔性基底,可在每次实验中可重复地固定电极阵列的位置。其次,利用毫米尺寸的线圈构建了磁刺激系统,该线圈可在普通实验室中方便地自行定制。第三,该经颅磁刺激-脑电图联合系统可记录大脑对声音和磁刺激所诱发的神经活动。本研究所述方法有助于揭示特定神经功能障碍在小型动物中的发生机制,并可将动物模型中的研究结果转化为对相应人类疾病的深入理解。
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本研究中所有动物实验均遵循美国国立卫生研究院《实验动物护理与使用指南》进行,并获得北海道大学机构动物护理与使用委员会的批准。本研究使用了5只C57BL/6J小鼠,包括2只雄性和3只雌性,年龄为8至10周。本实验为终点实验。实验动物购自商业来源(见材料表)。
1. 柔性二维阵列的设计与构建

图1:用于脑电图(EEG)记录的柔性二维(2D)阵列的组件及包含该阵列的制备器件。(A)嵌入小鼠颅骨中的微型螺钉电极。(B)用于测量脑活动的电极焊盘(绿色圆圈)和参考通道(右下角方块)。图中显示了从原点(0, 0)处参考点(十字标记)起各电极焊盘的相对坐标;括号中为以毫米为单位的尺寸。电极焊盘的中心坐标关于穿过十字标记的垂直轴对称。(C)记录电极(左侧)和参考电极(右侧)的电极焊盘及钻孔示意图。(D)用于柔性2D阵列的表面贴装连接器(2 × 10针,左侧)以及基底上设计焊盘的图案和尺寸(右侧)。(E)各部件尺寸以毫米为单位的设计蓝图。(F)根据E中的蓝图制备出的基底实物图。(G)柔性2D阵列(头部和连接器部分)的层状结构。图中展示了螺钉电极焊盘(上)和读出焊盘(下)的顶视图与侧视图。头部和连接器部分分别由三层结构(上)和六层结构(下)组成。此外,颈部部分由五层结构构成;顶部和背面均安装有保护性聚酰亚胺层,而颈部部分未安装增强型聚酰亚胺板。请点击此处查看该图的放大版本。
2. 接头构建与通道映射

图 2:在柔性基底上构建二维(2D)电极阵列的适配器及记录通道映射。(A)在连接器部分,参考通道和接地通道通过导线连接到底部电极焊盘。如果参考通道和接地通道已在设计阶段预先确定,则应在设计阶段将这些通道连接至相应的底部电极焊盘。在这种情况下,无需再对通道和电极焊盘进行导线焊接。(B)绝缘位移连接器(左上)被压接至扁平电缆的一端(左下),以连接测量放大器连接器(右上)。所有对应于待使用通道的线路均焊接至绿色连接器(右下)。本例中,由于每个连接至头端放大器的绿色连接器用于八通道测量,因此至少需要两个连接器才能记录16通道的脑活动信号。焊接点用环氧树脂和屏蔽胶带覆盖,以防止与其他信号线接触。(C)连接器和制备好的电缆被放置在柔性二维阵列基底的表面。一根细的不锈钢杆被固定在柔性基底的背面。(D)显示了小鼠脑表面记录通道的空间位置以及测量系统中各点的通道映射图。本例中共有16个带螺钉电极的记录通道(红色圆圈),尽管可能的记录位点总数为32个。其余16个非记录通道也在脑表面以绿色圆圈表示。在映射图中,“G”和“R”分别表示为接地电极和参考电极设计的通道。请点击此处查看该图的放大版本。
3. 动物手术
4. 电极植入
5. 小型线圈的设计与构建

图3:用于磁刺激的小型线圈。(A)3D打印的圆盘(左侧)。两个相同的圆盘粘附在坡莫合金-45轴上;一个位于轴的末端,另一个距离末端10 mm(右侧)。(B)线圈绕制装置。将带有两个圆盘的60 mm轴固定在冲击起子上。霍尔效应传感器放置在附着于轴的小磁铁附近。铜线缠绕在两个圆盘之间。(C)制作完成的线圈。该线圈高度为10 mm,直径为6 mm,由1000匝铜线绕成。图的右侧显示了由3D打印的线圈支架操控的线圈。(D)LCR表记录的线圈交流特性:(上图)正弦输入频率与电阻的关系;(下图)输入频率与电感的关系。典型线圈在1 kHz交流输入下的电阻和电感分别为21.6 Ω和7.9 mH。(E)示波器记录的作为线圈输入的双相矩形波形。(F)构建的线圈与霍尔效应传感器之间距离与磁通密度的关系。使用五个不同的霍尔效应传感器分别测量磁通密度,每个传感器测量一次。图中绘制了五次测量的平均值,误差棒表示平均值的标准误差。请点击此处查看该图的放大版本。
6. 信号记录系统与操作步骤
7. 数据分析
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以下是使用柔性基底结合螺钉电极在麻醉的 C57BL/6J 小鼠中记录的脑电图(EEG)示例数据。
作为一个典型示例,图4A展示了对声音刺激(8 kHz 短声,80 dB 声压级 [SPL])在60次相同刺激条件下记录到的平均脑电图(EEG)波形。图4A中部还给出了记录通道映射的示意图。通道5、7、10和12的响应来自双侧颞叶听觉皮层附近的区域。在位于听觉相关区域(下丘和听觉皮层)的通道个体EEG波形中,排除刺激伪迹后的初始反应在声音刺激开始后立即表现为负向偏转(例如通道3和10);其峰值振幅分别为45.6 ± 4.0 µV和25.6 ± 1.5 µV。随后,这些反应在一定程度上呈现正向偏转并超过基线水平(图4B、C),同时伴随衰减性振荡。相比之下,其他通道的反应几乎不受刺激起始时间的影响,尽管部分通道波形显示出类似的响应模式。
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本研究介绍了一种针对小动物(包括小鼠)设计的多部位脑电图(EEG)记录系统,并结合了磁刺激系统。该构建系统成本低廉,可在生理学实验室中轻松搭建,并可扩展其现有的测量装置。若实验室具备标准电生理实验的相关经验,则从小鼠记录系统获取数据所需的手术操作极为简便。
使用该方法的一个优势在于,能够在单个动物的头部和头皮上实现电极放置的良好可重复性。用于将螺钉电极定位至脑部目标区域的柔性基底可通过标准微加工技术轻松复制,相同的基底也便于确定每只动物头皮上的记录位点。此外,电极阵列的形状可方便地进行修改,以优化各种实验需求;可根据特定实验目的最优地设计定制化的电极排布。如果遵循本方案中所述的方法,螺钉电极、连接器、电缆及手术操作均可轻松修改并扩展为具有更多记录位点的测量系统。该记录系统的第二个优势在于,当实验室已配备多通道放大器时,其成本较低。当前的记录系统可从32个输入通道以及最多四条独立电缆获取神经信号。因此,扩展后的32通道记录系统仅需增加电缆、螺钉电极和修改后的柔性基底,整个扩展系统的成本将非常低。
然而,该方法的一个缺点是在植入过...
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作者无任何利益冲突需要披露。
本工作由村田科学振兴财团、Suzuken纪念财团以及生物医学工程测量技术进步中谷财团资助, 日本探索性研究资助(资助编号 21K19755)和科学研究资助(B)(资助编号 23H03416)授予 T.T.
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 3D 打印机 | Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., Ltd | FFD-101 | 用于 3D 打印环形圆盘的打印机 |
| 硫酸阿托品 0.5 mg | NIPRO ES PHARMA CO., LTD. | - | 硫酸阿托品 |
| 双极放大器 | NF Corp. | KIT61380 | 用于放大线圈输入波形 |
| 布托啡诺 | Meiji Seika Pharma Co., Ltd., Tokyo, Japan | - | 用于动物麻醉 |
| 柔性二维阵列的商用制造商 | p-ban.com Corp. | - | 网址:https://www.p-ban.com/ |
| 用于分析输出信号的计算机程序 | National Instruments | NI-DAQ 和 NI-DAQmx Python | 用于分析霍尔效应传感器的输出信号 |
| 连接器 | Harwin Inc. | G125-FV12005L0P | 用于连接测量系统 |
| 铜垫 | p-ban.com Corp. | copper | 每个基板上的铜垫 |
| 铜线 | Kyowa Harmonet Ltd. | P644432 | 线圈的绕组 |
| DAQ 板 | National Instruments Corp. | USB-6343 | 用于测量线圈的磁通密度 |
| 牙科水泥 | SHOFU INC. | Quick Resin | 自固化正畸树脂 |
| 皮层脑电图电极(ECoG 电极) | NeuroNexus Inc. | HC32 | 用于柔性二维阵列设计的参考 |
| 环氧树脂 | Konishi Co. Ltd. | #16123 | 用于线圈构建 |
| 氨基甲酸乙酯 | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp. | 050-05821 | 用于乌拉坦麻醉 |
| 扁平带状电缆 | Oki Electric Cable Co., Ltd. | FLEX-B2(20)-7/0.1 20028 5m | 用于连接表面贴装连接器与测量系统 |
| 柔性基底 | p-ban.com Corp. | 聚酰亚胺 | 柔性基底的基板 |
| 函数发生器 | NF Corp. | WF1947 | 用于生成线圈输入波形 |
| 霍尔效应传感器 | Honeywell International Inc. | SS94A2D | 用于测量线圈的磁通密度 |
| IDC 压接工具 | Pro'sKit Industries Co. | 6PK-214 | 用于压接 IDC 与扁平带状电缆的一端;扁平电缆连接器压接工具 |
| 瞬干胶 | Konishi Co. Ltd. | #04612 | 用于线圈构建 |
| 绝缘位移连接器(IDC ) | Uxcell Japan | B07GDDG3XG | 2 × 10 针,1.27 mm 间距 |
| LCR 测量仪 | NF Corp. | ZM2376 | 用于测量线圈的交流特性 |
| 操纵器 | NARISHIGE Group. | SM-15L | 用于操控线圈 |
| 美托咪啶 | Kobayashi Kako, Fukui, Japan | - | 用于动物麻醉 |
| 咪达唑仑 | Astellas Pharma, Tokyo, Japan | - | 用于动物麻醉 |
| 微型螺钉 | KOFUSEIBYO Co., Ltd. | S0.6*1.5 | 用于脑电图感知和参考电极 |
| 小鼠 | Japan SLC, Inc. | C57BL/6J (C57BL/6JJmsSlc) | 实验动物 |
| 坡莫合金-45 棒 | The Nilaco Corp. | 780544 | 线圈的磁芯 |
| 记录系统 | Plexon Inc. | OmniPlex | 用于脑电数据采集 |
| 不锈钢丝 | Wakisangyo Co., Ltd. | HW-136 | 用于被操纵器夹持 |
| 立体定位仪 | NARISHIGE Group. | SR-5M-HT | 用于固定小鼠头部 |
| 表面贴装连接器 | Useconn Electronics Ltd. | PH127-2x10MG | 用于安装在柔性二维阵列上的连接器 |
| 测试设备(LCR 测量仪) | NF Corp. | ZM2372 | 接触检查和阻抗测量 |
| 白色 PLA 丝材 | Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., Ltd | PLA-F13 | 用于 3D 打印环形圆盘的材料 |
| 2% 利多卡因凝胶 | Sandoz Pharma Co., Ltd. | - | 盐酸利多卡因 |
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