Name: 荧光标记的果蝇心结构 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-13T23:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 12 s
Description: 学习荧光标记果蝇心脏结构的方法，用于发育生物学研究。本方案展示Drosophila melanogaster幼虫和成虫心脏管标记技术，通过共聚焦显微镜实现高分辨率成像，帮助研究人员深入分析心脏形态结构。

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作者感谢 S.I. Bernstein（圣地亚哥州立大学）对本文稿撰写工作提出的宝贵意见和建议。本研究得到了美国国立卫生研究院（NIH）向 S.I. Bernstein（圣地亚哥州立大学）和 R. Bodmer（BIMR）提供的资助，以及美国心脏协会西部地区分会向 G. Vogler 和 A. Cammarato 提供的博士后奖学金支持。

开始之前
<ol>
 <li>配制以下溶液：
 <ol class="lalpha">
 <li>松弛缓冲液（含 10 mM EGTA 的人工 Drosophila 血淋巴（ADH）（参见“在 Drosophila 中观察跳动的心脏”）</li>
 <li>固定液（含 4% 甲醛的 1× PBS）</li>
 <li>PBSTx（含 0.1% Triton-X-100 的 PBS）</li>
 <li>用 PBSTx 适当稀释的一抗及种属特异的荧光标记二抗</li>
 </ol></li>
 <li>解剖 Drosophila 以暴露心脏管（成虫和/或幼虫），操作步骤如下：
 <ol class="lalpha">
 <li>参照“在 Drosophila 中观察跳动的心脏”中的半完整 Drosophila 心脏制备方案，或</li>
 <li>Drosophila 幼虫神经肌肉接头解剖方案1，并作如下修改：幼虫解剖过程中使用充氧的 ADH，并将后端固定针略微偏离腹侧中线。沿腹侧中线剪开幼虫。固定前不要移除任何组织。</li>
 </ol>
 </li>
</ol>
荧光染色
<ol>
 <li>检查所有心脏在充氧的ADH中是否节律性跳动。迅速用松弛缓冲液替换ADH。逐一检查每个心管，确保收缩已被抑制。</li>
 <li>用固定剂替换松弛缓冲液以固定心脏。室温下轻轻振荡孵育20分钟。（对于幼虫样本，任何步骤均无需振荡，且振荡可能对心脏组织完整性造成不利影响）。</li>
 <li>用PBSTx在室温下持续振荡清洗样本三次，每次十分钟。</li>
 <li>对于成虫，小心修剪腹部角质层的腹侧边缘，使其保留部分更趋椭圆形而非圆形。此外，通过在腹部与胸部之间进行一次切割，仔细且干净地分离这两个体段，并确保对心脏前部区域的损伤最小。对于幼虫心脏，使用精细镊子小心去除脂肪体。脂肪体的去除必须极为谨慎，因为幼虫心脏特别脆弱，缺乏其他肌肉或结缔组织的支持。请勿移除气管分支，以免损伤心脏。</li>
 <li>通过边缘转移已修剪的腹部角质层背侧部分，避免接触位于中央的心管，将其放入96孔板中，每孔含有50–100 μl用PBSTx稀释的一抗溶液。每孔放置不超过12个样本。室温下持续振荡孵育2小时，也可在4°C下过夜孵育。</li>
 <li>移除一抗溶液。用100 μl PBSTx在室温下持续振荡清洗心脏三次，每次十分钟。</li>
 <li>在最后一次清洗缓冲液移除后，加入100 μl用PBSTx稀释的二抗溶液，并添加Alexa594-鬼笔环肽（1:1000）。室温下持续振荡孵育一小时。样品需避光保存，防止荧光基团漂白。</li>
 <li>二抗孵育结束后，用100 μl PBSTx在室温下持续振荡清洗心脏三次，每次十分钟。整个清洗过程中均需将样品避光保存。</li>
 <li>为去除Triton-X-100，最后用100 μl PBS清洗心脏一次，持续10分钟。样品可在4°C黑暗环境中保存数天后再进行封片。</li>
</ol>
成年心脏的制备
<ol>
 <li>用 10 μl 封片剂（Vectashield）将两片 18 × 18 mm 的盖玻片粘附在显微镜载玻片上，两片盖玻片之间应相距约 10–15 mm。在两片盖玻片之间再放置一小滴封片剂。</li>
 <li>在第三片盖玻片中央加入 20 μl Vectashield 封片剂。</li>
 <li>用镊子夹住每颗心脏样本的角质层边缘，小心地从 PBS 洗涤液中取出，并轻轻将心脏面朝下放置在第三片盖玻片上的封片剂液滴中。每滴封片剂上放置的心脏数量不超过五个。</li>
 <li>在显微镜下检查，确保所有心脏均朝下放置。</li>
 <li>小心地将带有心脏的盖玻片翻转，迅速放置在载玻片上那对盖玻片之上，使含有心脏组织的液滴与两片盖玻片之间的 Vectashield 液滴融合，形成“桥接”结构。此时心脏将悬浮于盖玻片与显微镜载玻片之间。</li>
 <li>在显微镜下检查，确认心脏现在朝上。</li>
 <li>用指甲油将盖玻片边缘固定密封。</li>
 <li>样本现已准备好，可通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行成像。</li>
</ol>
幼虫心脏的制备
<ol>
 <li>在显微镜载玻片上滴加一滴（约 20 μl）Vectashield。</li>
 <li>小心地将最多两个幼虫样本转移至 Vectashield 中，并使用钨针将其背侧朝下摆放。</li>
 <li>逐个将样本从封片介质中拖出，并将其平行排列。</li>
 <li>在样本两端相对的位置放置盖玻片。用镊子将第三片盖玻片置于其上，先将一侧搭在后端的盖玻片上，然后缓缓放下至前端的盖玻片，形成一座“桥”。毛细作用会使 Vectashield 从后端向前端流动，有助于幼虫心脏的正确对齐。</li>
 <li>用指甲油在盖玻片边缘将其固定，并小心地在盖玻片之间加入 20–30 μl Vectashield，填满空隙。</li>
 <li>用指甲油密封，于 4°C 保存，或长期保存时置于 -20°C。</li>
</ol>
代表性结果
若操作正确，背血管的所有组分及其相关组织应保持完整，并可清晰观察。背景荧光应尽可能弱。在成虫中，腹侧纵行肌层染色效果良好，可产生较强的信号（图1和图2）。然而，其下方的环形心肌细胞产生的信号强度通常不及覆盖其上的腹侧肌层。成虫心脏前部“圆锥室”的心肌细胞含有大量收缩物质，因此该区域相较于心脏管的其余部分显得最为发达。幼虫心脏的心肌纤维排列呈螺旋状，与成虫收缩性心肌细胞的排列相似（图3）。
<img src="/files/ftp_upload/1423/1423fig1atmb.jpg" alt="图1a" border="0" /> <img src="/files/ftp_upload/1423/1423fig1btmb.jpg" border="0" alt="图1b" /> 图1： 上图。一幅荧光显微图像，显示表达肌球蛋白-GFP的成年黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的完整心脏管结构。图像使用配备Apotome滑动模块的蔡司Imager Z1荧光显微镜拍摄。肌球蛋白-GFP显示为绿色，肌动蛋白用AlexaFluor® 594鬼笔环肽染色（红色），α-辅肌动蛋白则用抗α-辅肌动蛋白抗体标记（蓝色）。请注意，该制备方法可获得结构保存良好的心脏样本。CC = 锥形心室；AM = 悬肌；V = 内部瓣膜；VLL = 腹侧纵肌层。下图。从锥形心室（CC）至心脏第三腹节、位于腹侧纵肌层下方的一段成年心脏管区域，显示收缩型心肌细胞中肌原纤维的螺旋状排列结构。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1423/1423fig1a.jpg">点击此处</a>查看图1a的放大版本，<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1423/1423fig1b.jpg">点击此处</a>查看图1b的放大版本
<img border="0" src="/files/ftp_upload/1423/1423fig2tmb.jpg" alt="图2" /> 图2： 使用AlexaFluor® 594鬼笔环肽（红色）和抗Pericardin（IV型胶原）抗体（绿色）染色的成年果蝇心脏前部代表性共聚焦图像序列。Pericardin沿腹侧表面与心脏相关，可能起源于腹侧肌层中纵向排列的肌原纤维。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1423/1423fig2.jpg">点击此处</a>查看图2的放大版本。
<img border="0" src="/files/ftp_upload/1423/1423fig3tmb.jpg" alt="图3" /> 图3：三龄 Drosophila 幼虫心脏主部A7节段的荧光显微图像。该图像使用配备Apotome滑动模块的蔡司Imager Z1荧光显微镜拍摄。肌动蛋白用AlexaFluor® 594鬼笔环肽（绿色）标记，α-辅肌动蛋白用抗α-辅肌动蛋白抗体（红色）染色。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1423/1423fig3.jpg">点击此处</a>查看图3的放大版本。

<ol><li>Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+larval+NMJ+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Drosophila larval NMJ dissection.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mech Dev. 1, 51-59 (2001).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 2, 271-280 (2005).</li>
<li>Zeitouni, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+pathways+involved+in+adult+heart+formation+revealed+by+gene+expression+profiling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila.</a> PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).</li>
<li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%2C+including+an+accurately+timed+account+of+the+principal+morphological+change%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change.</a> J. Morphol. 2, 351-399 (1936).</li>
<li>Miller, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+A+%22The+internal+anatomy+and+histology+of+the+imago+of+Drosophila+melanogaster%22">The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster</a>. , Wiley. New York. (1950).</li>
<li>Rizki, T. M. The circulatory system and associated cells and tissues. , Academic Press. New York. (1978).</li>
<li>Cammarato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+transducer+mutations+differentially+affect+motor+function%2C+myofibril+structure%2C+and+the+performance+of+skeletal+and+cardiac+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles.</a> Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).</li>
<li>Taghli-Lamallem, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+deficiency+in+Drosophila+reduces+lifespan+and+causes+a+dilated+cardiomyopathy+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype.</a> Aging Cell. 2, 237-249 (2008).</li>
<li>Kelso, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+database+documenting+a+GFP+protein-trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).</li>
<li>Dietzl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 7150, 151-156 (2007).</li>
<li>Mery, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+muscle+LIM+protein%2C+Mlp84B%2C+is+essential+for+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).</li>
</ol>

本文介绍了一种用于制备和染色的实验方案 黑腹果蝇 背血管及相关组织的荧光或共聚焦显微镜成像。我们简要介绍了经本实验室优化并常用的有效染色步骤，以实现清晰分辨的染色结果 原位 幼虫和成体成像 黑腹果蝇 心管。其他人也以简略形式描述过类似方法2, 3, 4.
实施染色程序时，还需考虑一些重要的附加细节。例如，与其他生物材料类似，Drosophila 心肌纤维在固定后原本较为柔韧的组织会变得相当脆。尤其值得注意的是附着在心脏管上的多对支持性悬韧纤维，其结构极为脆弱5, 6, 7。因此，尽量减少不必要的操作可降低对固定组织的物理应力和直接损伤，从而提高观察到保存良好且完全完整结构的可能性。此外，仅在成虫样本外骨骼的最边缘区域进行操作，可最大限度地减少对组织的干扰。
还必须注意，本方案的步骤仅可视为成功进行幼虫和成虫黑腹果蝇（Drosophila）心脏免疫染色的初步起点。本方法已简化为本实验室常用试剂...

<table><tbody><tr><td>乙二醇双(2-氨基乙基醚)-N,N,N&amp;rsquo;，N&amp;rsquo;四乙酸（EGTA）</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>甲醛，10%，无甲醇，超纯</td><td>试剂</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>50-00-0</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>试剂</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor&amp;#174; 594鬼笔环肽</td><td>试剂</td><td>Invitrogen</td><td>A12381</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield&amp;#174; 含DAPI的荧光封片剂</td><td>试剂</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>钨针</td><td>试剂</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>针持</td><td>试剂</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr></tbody></table>

荧光标记 黑腹果蝇 心脏结构

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

TheDrosophila melanogaster背血管，即心脏，是一种管状结构，由单层收缩性心肌细胞、沿心壁两侧排列的围心细胞、支持性的翼状肌以及在成虫中还有一层腹侧纵行肌细胞组成。收缩纤维中含有肌肉细胞骨架的保守组分，包括紧密排列的肌原纤维束以及细胞骨架/膜下蛋白复合物，这些组分与细胞外基质中的同源成分相互作用。本文中，我们描述了一种对解剖所得幼虫及半完整成虫心脏中的特定心肌组分进行固定和荧光标记的实验方案。Drosophila. 具体而言，我们展示了在幼虫心脏中标记肌节中的F-肌动蛋白和α-辅肌动蛋白的方法。此外，我们在表达肌球蛋白-GFP的成年果蝇中对F-肌动蛋白和α-辅肌动蛋白进行标记，并在野生型成年果蝇心脏中对α-辅肌动蛋白以及IV型细胞外基质胶原蛋白——层粘连蛋白（pericardin）进行标记。本实验特别关注一种用于半完整成年心脏的封片策略，该策略可最大限度减少操作步骤，优化维持心脏管及其相关组织完整性的机会。这些样品适用于荧光显微镜和共聚焦显微镜成像。总体而言，该方法使得研究者能够对这一遗传操作性强的模式生物系统中心脏的结构特征进行细致而深入的分析。

本文介绍了一种对幼虫和成虫黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）心脏管不同组分进行荧光标记的基本实验方案。这些样本适用于荧光显微镜或共聚焦显微镜成像。该技术可对这一强大模式生物的心脏结构特征进行详细的形态学分析。

黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的背血管，即心脏，是一种管状结构，由单层收缩性心肌细胞、心周细胞……

大家好，我是来自伯纳姆医学研究所发育与衰老项目中拉尔夫·博尔实验室的Nikita Ari。我也是来自底层实验室的Gil ler。今天我们将向您展示对幼虫和成年期前心脏结构进行荧光标记的操作步骤。我们在实验室中采用此方法制备心脏管，用于通过共聚焦或荧光显微镜对成年果蝇心脏结构进行形态学和结构分析，以实现心脏结构的荧光标记。首先，在半完整的成年果蝇胸腹部之间做一单一切口，以分离体节；然后修剪成年体壁腹侧突出的边缘。接下来，使用一抗和二抗对成虫或解剖后的幼虫样本进行转移和标记。标记完成后，用镊子夹住成虫样本的表皮边缘，将洗涤后的成虫样本腹面朝下置于盖玻片上的一滴Vector Shield封片剂液滴中；然后将盖玻片翻转，使其覆盖在载玻片上另一滴封片介质上，该液滴两侧各有一片盖玻片作为支撑，形成桥式结构；对于幼虫心脏样本，则使其心脏在封片后呈直立悬浮状态。将标本转移至载玻片上，使腹面朝下，在载玻片两侧各放置一片盖玻片。最后，将第三片盖玻片置于靠近幼虫后端的盖玻片上，形成一个桥状结构。此时心脏已准备好进行成像。开始本实验步骤之前，需准备以下试剂：含有 A DH 的 A DH 放松缓冲液（具体配制方法见本系列另一视频实验方案），含 10 毫摩尔 EGTA 的固定剂（由 4% 多聚甲醛溶于 1×PBS-PBS、TX 中组成），以及适当稀释的一抗和荧光标记的二抗。在 PBS-TX 中解剖成年及幼虫期黑腹果蝇（Drosophila），暴露心脏管，具体操作参照视频实验方案“观察果蝇跳动的心脏”和“果蝇幼虫 NMJ 解剖方案”中的半完整果蝇心脏制备方法，但需进行如下修改：在幼虫解剖过程中使用充氧的 A DH 缓冲液，并将尾部固定针略微偏离幼虫腹侧中线位置。沿腹侧中线剪开。在后续固定步骤之前，不要移除任何组织。首先在显微镜下检查，确保所有心脏在充氧的 A DH 中均呈现节律性收缩与舒张，然后开始标记程序。随后迅速用松弛缓冲液替换 A DH，并重新检查每根心脏管，以确认收缩已被抑制。通过用固定剂替换松弛缓冲液来固定心脏。在室温下轻轻振荡孵育20分钟。注意，对于幼虫样本，任何步骤均无需振荡，振荡甚至可能损害心肌组织的完整性。20分钟后，去除固定液，用P-B-S-T-X溶液在室温下持续振荡洗涤标本，每次10分钟，共洗涤三次。对于成虫，在室温下持续振荡的条件下，小心而干净地在腹部与胸部之间做一次切割。将两个体段分开，以确保对心脏前部区域的损伤最小。注意不要切到心脏圆锥腔所在的腹部前段。在显微镜下检查标本，确保切口整齐。接下来，仔细修剪腹部体壁切口处任何下垂的腹侧边缘，使剩余部分更呈椭圆形而非圆形。对于幼虫心脏，使用精细镊子小心去除脂肪体。操作时需格外谨慎。由于幼虫心脏特别脆弱，且缺乏其他肌肉或结缔组织的支撑，因此不要去除气管分支，以免损伤心脏。接下来，加入用 PVS TX 稀释的一抗，每孔加入 50 微升，置于 96 孔板中。对于成年果蝇，用镊子夹住修剪后的背侧表皮边缘，避免触碰位于中央的心管结构，并将其转移至孔板中。每孔放置的样本不超过 12 只，在室温下持续振荡孵育 2 小时。使用镊子夹住幼虫样本的边缘，将其转移至含有 P-B-S-T-X 的孔中。再次孵育时，切勿在孵育结束时摇动幼虫样本。移除一抗溶液。最后一次加入含Alexa 594 Phin的PBS tx中的二抗后，在室温下用100微升P-B-S-T-X洗涤心脏组织三次，每次10分钟。从现在开始，需将样品避光覆盖，防止荧光漂白，并在室温下孵育一小时。移除二抗溶液，再用100微升P-B-S-T-X在室温下洗涤心脏组织三次，每次10分钟。最后，通过将心脏在 100 µL PBS 中冲洗 10 分钟，以去除 TRITTON X 100。标本可在避光条件下于 4 °C 保存数天后再进行封片。首先，准备好载玻片以进行封片。在载玻片上均匀滴加三滴10 µL的封片剂。将两张18 mm × 18 mm的盖玻片置于外侧的液滴上，保持盖玻片之间相距约10至15 mm。此外，在第三片盖玻片中央加入20微升封片剂。接着，用镊子夹住解剖后的成年果蝇体壁的最边缘处，小心地将其从PVS清洗液中取出，轻轻将果蝇心脏面朝下放置于盖玻片上的封片剂液滴中，每滴封片剂上放置的果蝇心脏数量不超过五个。将心脏置于盖玻片上的液滴后，在显微镜下检查，确保所有心脏均朝下。现在小心地将带有心脏的盖玻片翻转，并迅速放置在载玻片上固定的一对盖玻片上，使翻转后盖玻片上的含心脏管的液滴与位于两个盖玻片之间空隙中的防矢量污染液滴融合。通过这种方式配对，三个盖玻片形成一座桥状结构。将心脏悬置于中间盖玻片与显微镜之间。将载玻片置于桥下，在显微镜下检查，确保成年果蝇心脏已朝上，并用指甲油固定盖玻片边缘。现在可以使用荧光显微镜或共聚焦显微镜对心脏进行成像。要安装幼虫心脏，先用精细镊子在显微镜载玻片上放置一滴约20 µL的BTA封片剂。用镊子夹住幼虫体壁边缘，小心地将其转移至液滴中。使用钨针将幼虫背侧朝下摆放。每张载玻片上可放置最多两条幼虫。随后，将每个样本从封片介质中拖出，并将幼虫平行排列对齐。用镊子在排列好的心脏两侧各放置一片盖玻片。然后取第三片盖玻片，先将其一侧置于前方的盖玻片上，再缓缓放下至后方的盖玻片上，形成一座桥状结构。毛细作用力将导致封片剂从后向前流动，有助于幼虫心脏的正确对齐。最后，用指甲油将所有盖玻片边缘固定，并小心地在盖玻片之间加入 20 至 30 微升的封片剂，再用指甲油密封，短期保存可置于 4 摄氏度，长期保存则置于 -20 摄氏度。若操作正确，背血管的所有组分及其相关组织应保持完整，并可清晰观察。成年个体的背景荧光应尽可能微弱。腹侧纵行肌层染色效果很好，可产生较强的信号。然而，其下方的环形心肌细胞产生的信号强度通常不及覆盖于其上的腹侧肌层所发出的信号。成体心脏前圆锥腔的心肌细胞含有大量的收缩物质，因此该区域相较于心脏管的其余部分显得最为强健。幼虫心脏的图像显示肌原纤维呈螺旋状排列。类似于成体收缩性心肌细胞，我们刚刚展示了您用于制备和染色卵形心脏以进行荧光和共聚焦显微镜观察的实验方案。进行此操作时，重要的是要记住尽量减少不必要的操作。这将有助于保持心脏结构的完整性和良好保存。本方案仅作为起点。与任何其他免疫组织化学实验一样，不同的抗体需要不同的条件，必须分别进行优化。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的染色实验顺利成功。

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科研

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Biology

生物学

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