Name: 在小鼠体内的汽车平衡和协调的评估使用的平衡木 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: 学习使用平衡木行走实验评估小鼠的运动协调与平衡能力。该方法通过测量穿越时间和爪部滑移次数，能够检测神经损伤、基因操作或药物治疗引起的细微运动缺陷，为行为神经科学研究提供敏感可靠的评估工具。

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Amber Southwell 建立了实验装置并对作者们进行了使用培训。本研究由 NINDS 提供给 Paul Patterson 的资助项目提供经费支持。

1. 本方案基于 Southwell et. al. (2009) 和 Carter et. al. (2001) 的方法。
<ol>
 <li>平衡木装置由长度为1米、表面平坦的木条构成，木条宽度为12 mm或6 mm，通过两根立柱固定在距离实验台面50 cm的高度。在木条末端放置一个黑色盒子作为终点。可在大多数五金店购买胶合板或其他类型的木材用于制作木条、立柱和盒子。在黑色盒子中放入来自小鼠饲养笼的筑巢材料，以吸引小鼠前往终点。在起点上方使用一盏带有60瓦灯泡的台灯照射，作为厌恶刺激。通过两个运动探测器（由Visopia公司自制）测量小鼠通过中间80 cm区段所需的时间：其中一个探测器位于0 cm处，用于启动计时器，另一个位于80 cm处，用于停止计时。在木条下方约7.5 cm高度处拉伸一个尼龙吊床（可从当地布料店获取），以缓冲小鼠跌落时的冲击。将一台摄像机架设在三脚架上，用于记录实验过程。本演示中使用的装置为现场搭建。</li>
 <li>建议每组实验条件至少使用10只小鼠。在可能的情况下，小鼠以群养方式饲养，维持12小时光照（上午7点至下午7点）与12小时黑暗的昼夜循环，并在行为实验开始前至少在行为实验室内适应其饲养笼环境2周。训练或测试前约10分钟，可将小鼠转移至放置平衡木装置的房间。</li>
 <li>在训练日，每只小鼠先在12 mm宽的木条上行走3次，随后在6 mm宽的木条上行走3次。对于无法顺利通过较窄木条的小鼠或体型较大的小鼠，可使用更宽的木条（例如28 mm）。将小鼠放置于木条一端，通过运动探测器测量其从起点到达另一端逃生箱（距离80 cm）所需的时间。当小鼠的鼻部进入中间80 cm区段时，计时器启动；当动物到达80 cm终点时，计时停止。小鼠在两种木条上的训练之间需返回其饲养笼休息10分钟。在此间隔期间，可对另外3–4只小鼠进行训练，以提高时间利用效率。C57BL/6小鼠通常能够几乎不停顿地通过木条。然而，若小鼠出现停滞、嗅探或四处张望而不继续前进的情况，实验人员应戴手套用手指轻推、戳或从后方推动小鼠，促使其继续前行。一旦小鼠进入安全箱，允许其在其中休息约15秒，再开始下一次试验。每次训练结束后，小鼠应立即返回其饲养笼并送回饲养室。需注意的是，若小鼠训练过度，对任务和装置过于熟悉，可能会出现更多停滞行为。另一方面，若经过两天训练后小鼠仍无法顺利完成全程行走，可继续延长训练天数。若对小鼠施加了处理措施，应在处理前获取其行为表现的基线数据。</li>
 <li>在测试日，记录每只小鼠通过各木条所需的时间。选取两次未在木条上停滞的成功试验取平均值。视频录像可用于更细致地分析滑倒及其他可观察到的运动缺陷。评估平衡木行走能力的另一种方法是采用神经功能评分系统1,2，其中无法通过木条记为“1”分，能够正常行走、双足始终位于木条表面且滑足少于两次记为“7”分。滑足定义为足部脱离木条上表面。在此评分体系中，“3”分表示小鼠拖行肢体通过木条。若某动物在连续两次试验中均得1分，则不再进行重测。有关其他评分对应的行为表现描述，可参见Feeney et al. (1982) 和 Carter et al. (2001) 的研究。</li>
 <li>每次更换木条前，需清除木条和盒子上的小鼠排泄物，并先用浸有70%乙醇的毛巾擦拭，再用水擦拭清洁装置。</li>
</ol>
2. 典型结果：
<img src="/files/ftp_upload/2376/2376fig1.jpg" alt="穿越横杆平均时间图；雄性/雌性C57Bl6；12毫米/6毫米横杆比较；行为学研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 1"> 
图1. 雄性和雌性C57Bl6小鼠在6毫米和12毫米横杆上的典型穿越时间。一组9至11周龄的C57BL/6-NCRL野生型小鼠在经过2天训练后，分别测试其在两种横杆上的表现。雄性小鼠（n=14）穿越12毫米横杆的平均时间为4.6 ± 0.4秒，雌性小鼠（n=11）为3.3 ± 0.3秒。在6毫米横杆上的穿越时间，雄性小鼠（n=13）为6.8 ± 0.7秒，雌性小鼠（n=10）为5.9 ± 0.5秒（误差以标准误S.E.M.表示）。

<ol><li>Feeney, D. M., Gonzalez, A., Law, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphetamine%2C+haloperidol%2C+and+experience+interact+to+affect+rate+of+recovery+after+motor+cortex+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Amphetamine, haloperidol, and experience interact to affect rate of recovery after motor cortex injury.</a> Science. 217, 855-857 (1982).</li>
<li>Carter, R. J., Morton, J., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+coordination+and+balance+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Motor coordination and balance in rodents.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 8, (2001).</li>
<li>Wallace, J. E., Krauter, E. E., Campbell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+and+reflexive+behavior+in+the+aging+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Motor and reflexive behavior in the aging rat.</a> J Gerontol. 35, 364-370 (1980).</li>
<li>Brooks, S. P., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tests+to+assess+motor+phenotype+in+mice%3A+a+user%27s+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tests to assess motor phenotype in mice: a user's guide.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 519-529 (2009).</li>
<li>Fox, G. B., Fan, L., Levasseur, R. A., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+sensory%2Fmotor+and+cognitive+deficits+with+neuronal+apoptosis+following+controlled+cortical+impact+brain+injury+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Sustained sensory/motor and cognitive deficits with neuronal apoptosis following controlled cortical impact brain injury in the mouse.</a> J Neurotrauma. 15, 599-614 (1998).</li>
<li>Buccafusco, J. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBuccafusco%2C+JJ+%22Methods+of+behavioral+analysis+in+neuroscience%22">Methods of behavioral analysis in neuroscience</a>. , 2nd edn, CRC Press. (2009).</li>
<li>Southwell, A. L., Ko, J., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrabody+gene+therapy+ameliorates+motor%2C+cognitive%2C+and+neuropathological+symptoms+in+multiple+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intrabody gene therapy ameliorates motor, cognitive, and neuropathological symptoms in multiple mouse models of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 29, 13589-13602 (2009).</li>
<li>Carter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+progressive+motor+deficits+in+mice+transgenic+for+the+human+Huntington%27s+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of progressive motor deficits in mice transgenic for the human Huntington's disease mutation.</a> J Neurosci. 19, 3248-3257 (1999).</li>
<li>Gulinello, M., Chen, F., Dobrenis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+deficits+in+motor+coordination+and+cognitive+dysfunction+in+a+mouse+model+of+the+neurodegenerative+lysosomal+storage+disorder%2C+Sandhoff+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Early deficits in motor coordination and cognitive dysfunction in a mouse model of the neurodegenerative lysosomal storage disorder, Sandhoff disease.</a> Behav Brain Res. 193, 315-319 (2008).</li>
<li>Stanley, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+beam+walking+assay+offers+improved+sensitivity+over+the+mouse+rotarod+in+determining+motor+coordination+deficits+induced+by+benzodiazepines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Psychopharmacol%22%5BJournal%5D)">The mouse beam walking assay offers improved sensitivity over the mouse rotarod in determining motor coordination deficits induced by benzodiazepines.</a> J Psychopharmacol. 19, 221-227 (2005).</li>
</ol>

动物实验是根据加州理工学院机构动物护理和使用委员会（IACUC）制定的指南和规定进行的。

平衡木实验是评估精细协调能力和平衡功能的有效指标，已有先前研究验证其可靠性。该实验可用于检测因年龄、中枢神经系统损伤以及年轻和老年啮齿类动物的遗传与药物干预所导致的运动功能缺陷2,3,4。具有皮层撞击损伤的小鼠常在平衡木上出现对侧肢体滑落现象5,6。平衡木实验还被用于随时间推移区分野生型（WT）小鼠与亨廷顿病（HD）小鼠模型的运动技能差异，并评估经治疗后HD小鼠运动功能的改善情况7,8。另一种通过平衡木检测到运动功能缺陷的遗传性小鼠模型是Sandhoff病小鼠模型，该疾病属于溶酶体贮积症9。在检测苯二氮䓬类药物诱发的运动协调障碍时，平衡木实验比转棒实验更为敏感。Stanley（2005）研究表明，地西泮或劳拉西泮仅需占据30%的GABA(A)受体即可在平衡木实验中观察到运动功能缺陷，而转棒实验则需要受体占据率超过70%10。使用更窄宽度的平衡木可进一步检测出更为细微的行为差异。
在本研究中，我们对一组9至11周龄的C57BL/6-NCRL野生型小鼠在12 mm和6 mm的横...

<table><tbody><tr><td>横梁：1米长的光滑木条，横截面为小、中、大三种方形（即宽度分别为6、12和28 mm）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>支撑架，用于架高横梁的起始段（横截面约&amp;#8764;1.5 cm，高50 cm）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>目标箱（每边20 cm），安装在支撑架上（横截面3 cm，高50 cm）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>吊床——距桌面约&amp;#8764;7.5 cm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>60瓦（W）台灯</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>摄像机、三脚架和空白录像带</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>乙醇、纸巾、清洁用品</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

使用平衡木评估小鼠的运动平衡与协调能力

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

脑损伤、基因操作和药物处理可能导致小鼠运动技能的改变。精细运动协调能力和平衡能力可通过横梁行走实验进行评估。该实验的目标是让小鼠保持直立姿势，并沿一根架高的狭窄横梁行走至安全平台。该测试持续3个连续日：前2天为训练期，第3天为测试期。小鼠在横梁上的表现通过其穿越横梁所需的时间以及过程中前肢打滑的次数来量化。本文报告了我们实验室所采用的实验方案，并展示了C57BL/6小鼠群体的代表性结果。该任务特别适用于检测其他运动功能测试（如转棒实验）难以发现的细微运动技能和平衡障碍。

可通过平衡木实验评估精细运动协调能力的缺陷。小鼠在平衡木上的表现通过其通过平衡木的速度以及在平衡木上打滑的次数来量化。

脑损伤、基因操作和药物处理可能导致小鼠运动技能的改变。精细运动协调和……

本实验的总体目标是评估小鼠的运动协调性和平衡能力。第一步是组装一根平衡梁，并设置运动检测器的位置，以记录小鼠通过平衡梁所需的时间，从而开始训练。将小鼠放置在平衡梁的起点处，使其自行穿越至安全平台。有时需要引导动物沿梁向终点移动。经过10分钟的试验间间隔后，动物在更窄的横梁上进行训练，以提高检测的敏感性。该实验程序的最后一步是让训练后的动物在不同宽度的横梁上进行测试。最终可获得反映运动协调性和平衡能力缺陷的结果。您好，我是 Tim Luong，加州理工学院生物系的医学博士（MD）与哲学博士（PhD）项目在读候选人。我是 Holly Carlisle，加州理工学院生物系的博士后研究员。今天我们将向您展示如何利用平衡木实验来评估小鼠的平衡能力与运动协调性。相较于转棒实验等其他方法，该技术的主要优势在于，平衡木实验对运动协调性中即使轻微的功能缺陷也更为敏感。该方法有助于回答行为学领域的关键问题，例如在某些神经疾病模型中，我们的运动协调性和平衡能力是否受到影响，以及特定治疗是否能够缓解运动功能缺陷。本实验的目的是测量小鼠在无停顿、无卡顿且无需实验人员诱导的情况下通过横梁所需的时间。为了在测试当天获得一次干净利落的跑动，我们在测试前进行为期两天的训练。该方法的可视化演示非常有帮助，因为对于不太熟悉行为学测试的人员来说，小鼠在横梁上的抓握和辅助方式可能较难掌握。接下来，让我们开始介绍。本方案基于 Southwell 等人以及 Carter 等人的研究方法。将一根一米长的横梁架设在两根50厘米高的立柱之间来组装装置。横梁具有6毫米或12毫米宽的平坦表面。对于体型较大的小鼠或无法通过较窄横梁的小鼠，可使用更宽的横梁。在横杆末端放置一个黑色盒子，并在盒内放入筑巢材料以吸引小鼠向终点移动；同时用一盏灯照射起点作为厌恶刺激。在0厘米和80厘米处设置运动探测器，用于记录小鼠穿越横杆的潜伏期。在横杆下方约7.5厘米高于桌面的位置拉伸一个尼龙吊床，以缓冲小鼠可能的坠落。本实验所用小鼠饲养于12小时光照-12小时黑暗循环环境中，并在测试前已适应环境两周。在开始实验前约10分钟将动物引入测试房间，为获得最佳结果，每种测试条件应使用至少10只小鼠组成队列。开始训练时，将一只小鼠放置在宽12毫米的横梁起始位置。当小鼠的鼻尖进入中央80厘米区域时启动计时器，当动物到达80厘米终点时停止计时。小鼠在通过横梁时应尽量不停顿或停滞。如果动物停止向前移动，可从后方轻轻触碰以鼓励其继续前进。当动物成功通过横梁后，将其从安全箱中移出，并放回饲养笼中休息10分钟，然后开始下一次训练。在引入下一只小鼠之前，需用70%乙醇清洁并擦拭平衡梁和箱子。每只小鼠先在12毫米宽的梁上训练三次，随后在6毫米宽的梁上进行训练。额外再进行三次训练可能会增加停滞现象的发生，因为动物对任务和装置变得更加熟悉。另一方面，如果小鼠在经过两

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在小鼠体内的汽车平衡和协调的评估使用的平衡木

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