Name: 胸腺淋巴瘤的T细胞系的推导 ATM - / - P53 - / -鼠标 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 17 min 59 s
Description: 学习建立小鼠胸腺淋巴瘤T细胞系的方法，使用ATM和P53基因敲除小鼠模型。该方案成功建立了多种细胞系，为研究T细胞恶性肿瘤和肿瘤抑制基因功能提供了重要工具。

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作者谨此感谢哥伦比亚大学微生物学与免疫学系的 Boris Reizis 博士提供的有益讨论。我们还感谢康奈尔大学兽医学院微生物学与免疫学系的 Margaret Bynoe 博士、Rodman Getchell 博士和 Deequa Mahamed 在流式细胞术方面的技术支持，以及 Lu Huang 在视频编辑方面的协助。作者还感谢 Duhamel 实验室和 Weiss 实验室的成员对本文手稿和视频制作的审阅与建议，以及 Weiss 实验室的 Stephanie Yazinski 在繁殖和基因分型 p53-/- 小鼠方面的工作。动物实验均严格遵循康奈尔大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）制定的指南与规定。本研究部分得到了美国农业部、合作州立研究、教育与推广服务局动物健康与疾病研究计划（资助号：G.E.D. 和 R.S.W.）以及美国国立卫生研究院（NIH）基金 R03 HD058220 和 R01CA108773（资助号：R.S.W.）的支持。本视频由 Duhamel 与 Weiss 实验室人员利用实验室内部设施制作完成。

1. 肿瘤解剖
<ol>
	<li>进行肿瘤解剖时，将一张洁净的纸巾或一次性手术单铺在解剖垫上，并喷洒70%乙醇。</li>
	<li>本方案中，小鼠通常采用CO2处死。将已处死的小鼠置于解剖垫上，并用乙醇喷洒动物体两侧。使用四个或更多的固定针穿过小鼠四肢将其固定在解剖垫上，并彻底喷洒70%乙醇。</li>
	<li>使用无菌剪刀从耻骨沿中线剪开皮肤至头部基底，注意避免损伤下方肌肉组织及穿透体腔。</li>
	<li>使用一副新的无菌剪刀和镊子打开腹腔，操作时需小心避免损伤内脏器官。</li>
	<li>通过解剖并移开肋骨以暴露胸腔，显露肿瘤，注意避免损伤血管。</li>
	<li>将肿瘤与其他组织分离后，取约总肿瘤体积40–50%的组织块（大小约为1.5 × 0.8 × 0.8 cm）转移至置于冰上的冷PBS中。</li>
	<li>剩余的肿瘤组织可用于其他检测，此时也可完成完整的尸体剖检。</li>
</ol>
2. 淋巴瘤细胞的培养
<ol>
	<li>用70%乙醇喷洒含有已解离肿瘤的试管，并转移至生物安全柜中。</li>
	<li>向无菌的150 mm2 培养皿中加入10 mL培养基。</li>
	<li>用移液器轻柔吸取肿瘤组织块，将其转移至培养皿中。</li>
	<li>将两根无菌18号针头弯曲，使斜面朝外。</li>
	<li>使用弯曲的针头解离肿瘤组织。</li>
	<li>轻轻旋转培养皿，轻敲并倾斜放置，使细胞悬液集中于一侧，同时避免大块肿瘤组织。</li>
	<li>吸取细胞悬液并转移至50 mL锥形管中，避免吸入大块肿瘤组织。</li>
	<li>用10 mL培养基洗涤培养皿，并将洗液转移至同一根锥形管中，避免吸入大块肿瘤组织。</li>
	<li>轻柔混匀含有淋巴细胞和基质细胞的细胞悬液，取5 mL转移至T-25组织培养瓶，10 mL转移至T-75组织培养瓶。轻轻旋转混匀培养瓶。</li>
	<li>用剩余的细胞悬液进行2、4、10、100和1000倍稀释，最终体积为2.5 mL（使用多种类型的培养容器以不同密度培养细胞，可最大化建立T细胞系的可能性）。</li>
	<li>将每种稀释液各2.0 mL接种至6孔板的独立孔中。轻轻旋转混匀培养板。</li>
	<li>将细胞置于空气加湿的CO2环境中，孵育48小时。</li>
</ol>
3. 喂养淋巴瘤细胞
<ol>
	<li>孵育 48 小时后，沿培养瓶壁分别向 T-25 培养瓶加入 5 mL 培养基，向 T-75 培养瓶加入 10 mL 培养基，操作过程中尽量减少对细胞的扰动。</li>
	<li>沿培养板壁向 6 孔板的每个孔中加入 2 mL 培养基，操作过程中尽量减少对细胞的扰动。</li>
	<li>将细胞继续孵育 72 小时。</li>
</ol>
4. 淋巴瘤细胞传代
<ol>
<li>初次传代
<ol>
<li>在孵育第五天结束时，以1:1比例进行细胞传代，同时保留原始的培养瓶和平板（在初次传代期间维持细胞密度约为3×10⁶/mL，有助于成功建立连续细胞系）。
<ol class="lalpha">
<li>对于T-25培养瓶，将5 mL细胞悬液转移至含有5 mL培养基的新培养瓶中。向原始培养瓶中加入5 mL培养基。</li>
<li>对于T-75培养瓶，将10 mL细胞悬液转移至含有10 mL培养基的新培养瓶中。向原始培养瓶中加入10 mL培养基。</li>
<li>对于6孔板，将每孔2 mL细胞悬液转移至新板的对应孔中（新板各孔预先加入2 mL培养基）。向原始板的每孔中加入2 mL培养基。</li>
</ol>
</li>
<li>将所有培养瓶和平板继续孵育72小时。根据我们的经验，大多数细胞系可由此第一代培养物中成功建立（贴壁基质细胞层上出现松散贴附的悬浮细胞团簇，是细胞系成功建立的早期标志）。</li>
<li>对于悬浮细胞团簇较少或无团簇的培养物，通过小心更换约50%的培养基，每72小时进行一次换液。为避免移除原始培养物中的细胞，需将培养容器静置且不扰动至少5分钟，使细胞在重力作用下沉降至底部，再轻柔吸除上清培养基。</li>
</ol>
</li>
<li>维持已建立的细胞系
<ol>
<li>将已建立的细胞系传代至新的培养瓶和培养板中。对于T-25和T-75培养瓶，将5 mL原始或第一代细胞悬液加入含5 mL培养基的新瓶中。对于6孔板，将3 mL原始或第一代细胞悬液加入T-25培养瓶中含7 mL培养基的环境中。通过补充与移除体积相等的新鲜培养基，对原始或第一代培养物进行换液并继续维持。</li>
<li>将已建立的细胞系传代至新的T-25培养瓶中。该细胞系倍增时间为18–24小时。常规维持细胞密度为1–3×10⁶/mL，每3天传代一次。将前一代培养物所需体积加入新培养基中，总体积补至10 mL。对原始培养物进行换液并继续维持。</li>
<li>经过数次传代后，非贴壁细胞将可在无贴壁基质细胞支持下自我维持，且每次传代时仅有少量贴壁细胞被带入。此后，培养物可在未经组织培养处理的T-25培养瓶中维持培养。</li>
</ol>
</li>
</ol>
5. 淋巴瘤细胞系的冻存与复苏
<ol>
	<li>细胞系使用新配制的含20% FBS和10% DMSO的RPMI 1640培养基进行冷冻保存。</li>
	<li>取T-25培养瓶中培养48小时的细胞（约1.5×106 个细胞/mL），在室温下以1500 rpm离心5分钟。弃去上清液后，将细胞重悬于2 mL预冷的冻存液中。每个培养瓶中的细胞悬液各取两份1.0 mL加入冻存管，立即置于-80°C快速冷冻，并于次日转移至液氮中保存。</li>
	<li>从液氮中取出细胞后迅速解冻，将内容物重悬于10 mL新鲜培养基中。或者，将刚解冻的细胞用预温的培养基洗涤一次以去除DMSO，再重悬于10 mL新鲜培养基中。细胞至少培养72小时后方可进行后续传代。</li>
</ol>
6. 代表性结果
采用本方案建立的 Atm-/- T 细胞系，命名为 DWJ-Atm-1，通过抗 CD3-FITC、抗 CD4-APC 和抗 CD8-PE 染色及流式细胞术分析进行表征（图1）。超过 90% 的 T 细胞为 CD3、CD4 和 CD8 三重阳性。
<img src="/files/ftp_upload/2598/2598fig1.jpg" alt="流式细胞术散点图与表格；CD标志物分析；CD8-PE 对 CD4-APC；细胞表面表达。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 使用本实验方案建立的T细胞系的表征。
通过使用抗 CD3-FITC、抗 CD4-APC、抗 CD8-PE 抗体染色并结合流式细胞术分析，对已建立的 Atm-/- 细胞系 DWJ-Atm-1 的细胞表面标志物进行了表征。简言之，取 1×106 个新鲜细胞，用预冷的 PBS 洗涤一次（1500 rpm，5 分钟），随后在 4°C 条件下用 200 μL 抗体混合液（每种抗体按 1:200 比例溶于含 1% BSA 的 PBS 中）孵育 10 分钟。细胞可在新鲜状态下立即检测，也可固定后用于后续分析。固定细胞的制备方法为：加入中性缓冲甲醛溶液，使其终浓度为 4%（体积比），4°C 孵育 30 分钟，离心收集细胞（1500 rpm，5 分钟），再重悬于 200 μL 含 1% BSA 的 PBS 中。使用 BD FACS Calibur 分析仪及 CellQuest 软件（BD Biosciences，San Jose，CA）对共计 1×104 个细胞进行分析。

<ol><li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atm-deficient+mice%3A+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li>
<li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li>
<li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Atm-%2F-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemother+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li>
<li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li>
<li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li>
<li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL%2FLMO1+double+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li>
<li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li>
<li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

在本实验方案中，我们提供了从两种不同基因型小鼠建立小鼠T细胞系的详细步骤：Atm-/- [FVB/N-Atmtm1Led/J] 和 p53-/- [129/S6-Trp53tm1Tyj/J]。通过使用本方案，我们在实验室中已成功建立了6个（共7次尝试）Atm-/- 和3个（共5次尝试）p53-/- 小鼠T细胞系。代表性数据表明，细胞系DWJ-Atm-1（一种Atm-/-细胞系）中的细胞群体中，超过90%的细胞表达CD3、CD4和CD8表面标志物，证实了利用本方案可成功建立克隆性T细胞系。
已有关于小鼠T细胞系建立的报道 3,6,7；然而，此前尚未有文献详细描述建立这些细胞系的具体方案。尽管本实验室在建立小鼠T细胞系时仅使用了两种小鼠基因型，但我们认为这些实验流程适用于其他品系小鼠中出...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;ul&gt;&lt;李&gt;冰桶&lt;/li&gt;&lt;李&gt;70% 乙醇&lt;/li&gt;&lt;李&gt;由覆盖铝箔的泡沫块和图钉组成的解剖板&lt;/li&gt;&lt;li&gt;两套小型无菌剪刀和镊子&lt;/li&gt;&lt;李&gt;无菌 150 mm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; 培养皿（Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA；货号 #08-757-13）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;无菌18号针头&lt;/li&gt;&lt;李&gt;50 mL 一次性离心管（Corning Inc.，Corning NY；货号 # 430829）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;10% 缓冲福尔马林&lt;/li&gt;&lt;李&gt;组织培养瓶 &lt;ul&gt;&lt;李&gt;T-25（TPP，Trasadingen，瑞士；货号 # 90025）&lt;/li&gt;&lt;li&gt;T-75（TPP，Trasadingen，瑞士；货号 # 90075）&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;&lt;/li&gt;&lt;李&gt;6孔板（Corning Inc.，Corning NY；货号 # 3506）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;无菌磷酸盐缓冲液，pH 7.2（PBS）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;培养基 &lt;ul&gt;&lt;李&gt;RPMI 1640，含25 mM HEPES、200 mM L-谷氨酰胺（Lonza，Walkersville，MD；货号#12-115F），并补充以下成分：&lt;ul&gt;&lt;李&gt;56℃加热灭活10%&amp;#x00B0;C，30 分钟）胎牛血清（FBS；Hyclone，洛根，犹他州；货号# SH30088.03）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;1% 青霉素和链霉素（Mediatech，Manassas，VA；货号：30-002-CI）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;1% 非必需氨基酸（Mediatech；货号#25-025-CI）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;55 mM 2&amp;#946;巯基&amp;#8211;乙醇（Sigma，St Louis，MO；货号：M752）&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;&lt;/li&gt;&lt;li&gt;二甲基亚砜（DMSO；Calbiochem，美国拉霍亚；货号 # 317275）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;抗体（eBioScience，美国加利福尼亚州圣地亚哥）&lt;ul&gt;&lt;李&gt;抗CD3-FITC（货号：11-0031-85）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;抗CD4-APC（货号 #17-0041-83）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;抗CD8-PE（货号：12-081-85）&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;&lt;/li&gt;&lt;李&gt;牛血清白蛋白（BSA；Life Technologies，美国纽约州格兰岛；货号 #. 11018-017）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;Concanavalin A（Sigma 货号：C5275）&lt;/li&gt;&lt;李&gt;1.8 mL 冻存管（Nunc，Roskilde，丹麦；货号# 368632）&lt;/li&gt;&lt;/ul&gt;</td></tr></tbody></table>

从 atm-/- 和 p53-/- 小鼠中建立胸腺淋巴瘤t细胞系

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

已建立的细胞系是一种重要的研究工具，可减少科研中实验动物的使用。某些基因修饰小鼠品系，例如 Atm-/- 和 p53-/-，在生命早期会持续发生胸腺淋巴瘤1,2，因此可作为获取小鼠T细胞系的可靠来源。本文介绍了一种无需添加白细胞介素（如以往方案所述1,3）即可建立稳定的小鼠胸腺淋巴瘤T细胞系的详细实验方案。肿瘤取自3至6月龄的小鼠，在易感品系中一旦出现可见肿瘤的最早迹象（如弓背姿势、呼吸困难、理毛能力下降和消瘦）即进行采集1,4。我们已利用该方案成功建立了多个T细胞系，所用近交系小鼠包括Atm-/- [FVB/N-Atmtm1Led/J]2 和 p53-/- [129/S6-Trp53tm1Tyj/J]5。我们进一步证实，超过90%的已建立T细胞群体表达CD3、CD4和CD8。与稳定细胞系的特征一致，采用本方案生成的T细胞已连续传代超过一年。

在本视频中，我们演示了一种建立小鼠胸腺淋巴瘤细胞系的实验方案。通过遵循该方案，我们已成功从小鼠胸腺淋巴瘤模型 Atm-/- 和 p53-/- 小鼠中建立了多个T细胞系。

从 Atm-/- 和 p53-/- 小鼠中建立胸腺淋巴瘤T细胞系

已建立的细胞系是一种重要的研究工具，可减少科研中实验动物的使用。某些基因修饰小鼠品系……

在本视频中，我们演示了一种建立小鼠胸腺淋巴瘤的实验方案。细胞系。在肿瘤可见的最早阶段，采集三至六个月龄小鼠的肿瘤组织。根据对弓背姿势、呼吸困难、毛发凌乱和消瘦等症状的观察，我们已利用本方案成功建立了多个 ATM 缺失和 P53 缺失的胸腺淋巴瘤细胞系。在第一部分中，我们描述了如何从荷瘤小鼠中分离胸腺淋巴瘤。本方案所用小鼠通常采用二氧化碳处死。在解剖垫上放置一张干净的纸巾，并用70%乙醇喷洒。将已安乐死的小鼠置于解剖垫上。用乙醇喷洒动物的两侧。将小鼠固定在解剖板上，并用70%乙醇充分喷洒。使用无菌剪刀和镊子切开皮肤，注意不要刺入体腔。用另一套新的无菌器械打开腹腔。注意避免损伤任何器官。通过解剖并移开肋骨以打开胸腔，暴露肿瘤，同时避免损伤任何血管。该小鼠具有一个发育良好的肿瘤，占据了整个胸腔。将肿瘤与其他器官分离，并切除肿瘤体积约40%至50%的一块组织。将肿瘤组织块转移至冷的PBS中。取另一块肿瘤组织，用10%福尔马林固定。对于组织学检测，可以保存肿瘤的剩余部分。对于其他检测，此时还可检查并固定其他器官。在本节中，我们描述如何从收获的肿瘤中培养胸腺淋巴瘤细胞。用含70%乙醇的溶液润洗装有分离肿瘤的管子，并将其转移至组织培养罩内。向无菌培养皿中加入10毫升培养基。用移液管轻轻吸取，将肿瘤组织块转移至培养皿中，并将两根无菌18号针头弯折，斜面朝外放置。使用弯针解离肿瘤组织块。轻轻晃动培养皿并倾斜放置，使细胞悬液汇集到一侧，同时避免吸入较大的肿瘤组织块。吸取细胞悬液并转移至50毫升锥形管中。避免较大的肿瘤组织块。用10毫升培养基洗涤培养皿，并将液体转移至同一离心管中。避免较大的组织颗粒。轻轻混匀细胞悬液，将5毫升转移至T25组织培养瓶中。将10毫升转移至T75组织培养瓶中。用剩余的细胞悬液进行2、4、10、101 000倍梯度稀释，每种稀释度取2毫升分别接种于6孔板的各个孔中，轻轻摇晃混匀，将细胞置于37°C孵育48小时。在本部分中，我们演示如何对培养物进行换液，直至其达到传代条件。在培养 48 小时后，向 T25 培养瓶中加入 5 mL 培养基。沿壁缓慢加入 10 mL 培养基至 T75 培养瓶中，尽量减少对细胞的扰动。向每个孔中加入 2 毫升培养基。将六孔板沿壁放置，细胞培养 72 小时。在本部分中，我们将介绍已建立细胞系的传代与维持操作步骤。五天后，按1:1比例传代细胞，并为T 25培养瓶保留原始培养瓶。将五毫升细胞悬液转移至含有五毫升培养基的新培养瓶中。对于T 75培养瓶，向原始培养瓶中加入五毫升培养基。将10毫升细胞悬液转移至含有10毫升培养基的新培养瓶中。向原培养瓶中加入10毫升培养基。对于六孔板，将每孔中的2毫升细胞悬液转移至含有2毫升培养基的新板中对应的孔。向原培养板的每个孔中加入 2 mL 培养基。将细胞培养 72 小时。根据我们的经验，大多数细胞

derivation-of-thymic-lymphoma-t-cell-lines-from-atm-and-p53-mice

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

胸腺淋巴瘤的T细胞系的推导 ATM - / -</sup P53 - / -</sup鼠标

由诱导性多能干细胞（iPS细胞）生成T淋巴细胞，为T细胞免疫治疗提供了一种替代使用胚胎干细胞的新途径。该方法表明，通过利用以下任一方式 体外 或 体内...

诱导多能干细胞向T淋巴细胞的定向分化

本视频展示了一种利用三维胸腺培养系统，从诱导多能干细胞（iPSC）来源的不成熟T细胞生成具有功能性的抗原特异性T细胞的实验方案。将iPSC来源的不成熟T细胞与内源性淋巴细胞耗竭的小鼠胎儿胸腺叶共培养后，T细胞成功成熟，形成CD8αβ+ MHC...

用于生成诱导多能干细胞来源的胸腺移行细胞的三维胸腺培养系统

小鼠胚胎干细胞可通过 OP9-DL1 共培养系统在体外分化为 T 细胞。in vitro...

T细胞的制备 体外 从小鼠胚胎干细胞

研究髓质胸腺上皮细胞 体外 在很大程度上并不成功，因为现有的二维培养系统无法模拟 体内 该3D培养系统——一种改良的皮肤类器官培养模型——在模拟胸腺上皮细胞（mTEC）的增殖、分化以及异位基因表达的维持方面表现出更优效果。...

支持髓质胸腺上皮细胞增殖、分化及异位基因表达的三维类器官共培养模型

本报告详细描述了将不同年龄供体小鼠的胸腺移植到免疫缺陷型受体小鼠肾包膜下的操作方法。该技术旨在模拟T细胞发育及胸腺选择过程。 在体.

不同年龄小鼠胸腺移植物的分离与移植

本文描述了通过分析T细胞前体的生成动力学、表型及数量，来表征胸腺定植前体细胞的体内和体外方法。...

利用小鼠胚胎胸腺定植前体细胞的表征 体内 和 体外 检测方法

将bm12淋巴细胞移植到C57BL/6受体小鼠体内是系统性红斑狼疮的成熟动物模型。本文介绍如何利用该模型诱导疾病发生，并通过流式细胞术对滤泡辅助性T细胞、生发中心B细胞和浆细胞进行表征分析。...

C57BL/6小鼠中系统性红斑狼疮（SLE）的bm12可诱导模型

本文介绍了一种利用酶联免疫吸附试验（ELISA）在小鼠中表征T细胞依赖性和非T细胞依赖性免疫球蛋白（Ig）同种型应答的实验方案。该方法可单独使用，也可与流式细胞术联合应用，有助于研究人员鉴定小鼠在接受T细胞依赖性和非T细胞依赖性抗原免疫后，B细胞介导的Ig同种型应答的差异。...

利用酶联免疫吸附测定法表征小鼠胸腺依赖性和非胸腺依赖性免疫球蛋白同种型应答

本文介绍了一种利用三维（3D）胸腺培养系统生成肿瘤抗原特异性诱导多能干细胞来源的胸腺移行细胞（iTE）的新方法。iTE...

一种用于产生小鼠诱导性多能干细胞来源的肿瘤抗原特异性胸腺移行细胞的三维胸腺培养系统

本方案描述了从小鼠胸腺中分离双阴性胸腺细胞，随后进行逆转录病毒转导，并在表达Delta样配体4的骨髓基质细胞系共培养系统（OP9-DL4）上进行共培养，以进一步开展功能分析。...

在表达Delta样4的基质细胞上共培养和转导小鼠胸腺细胞以研究T细胞白血病中的癌基因

本研究展示了评估病毒特异性TFH细胞早期命运决定的方案，以及对这些细胞中基因表达进行操控的方法。...

获取急性 LCMV 感染小鼠中病毒特异性滤泡辅助性 CD4+ T 细胞早期分化的研究方法

学习建立小鼠胸腺淋巴瘤T细胞系的方法，使用ATM和P53基因敲除小鼠模型。该方案成功建立了多种细胞系，为研究T细胞恶性肿瘤和肿瘤抑制基因功能提供了重要工具。

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