单方支气管内酸灌输自我限制急性肺损伤模型

选择性支气管内方法意义重大，因为它为研究人员提供了一个可重复的、非致命的模型，用于研究急性肺损伤，急性呼吸窘迫综合征的一个主要原因。选择性支气管内技术的优点是左肺的炎症反应定位，提供右肺作为一种未受伤的控制，并最大限度地减少动物的苦恼。演示这个程序将是亚历山大塔瓦雷斯，一个技术员和研究生在我们的实验室。

要准备0.1个普通盐酸，在琥珀色玻璃瓶中加入11毫升双蒸馏水，然后缓慢加入1毫升37%12正常酸。接下来，在50毫升锥形管中，缓慢地将4毫升的一个正常酸工作存量加入35毫升双蒸馏水中。然后使用电子 pH 探头测量 0.1 正常库存溶液的 pH 值，根据需要使用氢氧化钠或酸库存溶液将 pH 滴答到 1.1，最终体积为 40 毫升。

在开始手术之前，通过无菌0.22微升过滤器将酸溶液的一到两毫升过滤到无菌微离心管中，并确认麻醉小鼠对疼痛反射缺乏反应。使用电动剪子缓慢向下冲程轻轻地剃光小鼠腹部表面的手术区域，在咽喉的颈椎区域下。去除任何松动的头发，用三个连续的10%波维酮碘溶液和70%异丙醇拭子拭子擦拭裸露的皮肤。

当皮肤已准备后，将鼠标放在干净的手术板上，用无菌手术窗帘盖住动物。在气管和唾液腺上方的皮肤上做一个0.5厘米的纵向开口，并使用稍微弯曲的锯齿状钳子小心地缩回皮肤。轻轻地分离唾液腺，露出气管肌肉，并使用稍微弯曲的锯齿状钳子轻轻推开副切肌肉。

将气管周围的筋膜调开，直到气管的软骨环完全暴露，并使用完全弯曲的锯齿状钳子来消除气管和逆转管之间的结缔组织。滑动气管后面的完全弯曲锯齿钳，并提起气管。一旦钳子的尖端在气管后面，抓住一块10至15厘米的4-0编织丝缝合线与钳子的尖端，拉紧到气管后面的缝合线，使两侧有一个均匀的长度。

手术板可以转动，使手术区域更接近主导手的下一步。然后轻轻地将缝合线末端拉向鼠标前部，并按住末端。对于左主管支气管的可调，通过 3/4 英寸血管导管将 24 量表的针头露出来，并将针斜面插入第一和第二气管环之间的气管内侧区域。

当针尖可以在气管流明中可视化时，松开缝合线，将针尖上的针尖推进到气管中，朝鼠标的左后侧倾斜。遇到阻力时，取针。一旦导管就位，牢牢抓住喷射口，防止导管移动，并在端口内固定 P-200 微管尖端。

然后将过滤的 0.1 法线酸溶液的 50 微升注入导管，然后注入同等体积的空气。此步骤需要精确操作气管，同时气道阻塞，应快速、顺利地完成，以恢复适当的气流并最大限度地减少气道损坏。快速提取导管，以 60 度角倾斜手术板。

30 秒后，将手术板平放，然后从气管后面取出缝合线。然后用4-0蜡涂层编织的真丝缝合线用两到三针关闭皮肤切口。支气管内注射引起的急性肺损伤涉及整个左肺。

事实上，在静脉注射埃文斯蓝色染料和肺灌注后，只有在左肺内检测到这种染料。与假选择性灌输相比，染料外创到左肺的定量显著增加。与右肺相比，在酸性注入24小时后，左肺中积液中性粒细胞会累积，而右肺中很少观察到间质嗜中性粒细胞。

肺组织学揭示了器官和细胞水平的组织损伤和炎症，受伤后24小时有渗出炎症，其特征是左肺内明显的肺活体水肿和嗜中性粒细胞渗透。请注意，缺乏严重伤害或白细胞流入未受伤的控制右肺。受伤后72小时，水肿和细胞渗透量大幅减少，表示分词性排泄阶段。

根据流式细胞学评估，左肺中性粒细胞在初始损伤后24小时内增加，在48和72小时时显著减少。在推进之前，在气管中可视化导管非常重要。在插入过程中将管杆菌对角朝左主茎，然后用 50 微升空气进行酸注入。

可以进行支气道熔岩液分析、肺组织学、流式细胞表型、活鼠成像和肺功能测试，以评估炎症和分辨率。这种自我限制的急性肺损伤模型的发展，使研究人员对分辨率生物学领域做出了重大贡献。请记住，浓缩盐酸是危险的，应穿着适当的个人防护装备在化学罩中处理。