Herstellung von amperometrische Elektroden

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt, wie Kohlefaser Elektroden zu erzeugen. Die Elektroden werden anschließend verwendet, um Katecholaminausschüttung von Vesikeln mit Kohlefaser Amperometrie erkennen.

Zusammenfassung

Carbon-Elektroden sind entscheidend für den Nachweis von Katecholamin Entlassung aus dem Vesikel in einzelnen Zellen für Amperometrie Messungen. Hier beschreiben wir die Techniken erforderlich, um geräuscharm (<0,5 pA) Elektroden zu erzeugen. Die Techniken wurden aus veröffentlichten Beschreibungen wurden von früheren Forschern (1,2) modifiziert. Die Elektroden sind durch Herstellung von Kohlenstoff-Fasern und Einfädeln sie einzeln in jede Kapillare mit Hilfe eines Vakuums mit einem Filter, um die Faser absaugen gemacht. Anschließend wird die Kapillare mit Faser durch eine Elektrode Abziehers, wodurch zwei Hälften, die jeweils mit einer feinen Spitze. Die Elektroden werden in heißem, flüssigem Epoxidharz mit Härter gemischt, um ein Epoxid-Glas-Siegel erstellen getaucht. Schließlich sind die Elektroden in einen Ofen gelegt, um das Epoxidharz zu heilen. Sorgfältige Behandlung der Elektroden ist entscheidend, um sicherzustellen, dass sie gemacht werden konsequent und ohne Beschädigung. Dieses Protokoll zeigt, wie in der Herstellung und schneiden amperometrischen Elektroden für die Aufzeichnung von einzelnen Zellen.

Protokoll

Teil 1: Carbon Fiber Preparation

1. Cut ein Bündel von Kohlenstoff-Fasern (wir verwenden 7μm Durchmesser) auf eine Länge ~ 1,25 X die Länge der Kapillare Pipette wird.
2. Entfernen Sie die Dimensionierung durch Kochen ~ 100 ml Aceton in einen Behälter und Zugabe der Fasern zu den heißen, siedendem Aceton für 30 Minuten oder länger.
3. Entfernen Fasern aus dem warmen Aceton, und in ein sauberes Becherglas mit 50-100 ml frischem Aceton.
4. Trockene Fasern, indem das Bündel auf einer offenen 150 mm Petrischale und lufttrocken Nacht.

Teil 2: Feuerpolieren Glaskapillaren

1. Fire-polnisch jeder Kapilla....

Diskussion

Dieses Protokoll beschreibt, wie zu generieren und zu schneiden amperometrischen Elektroden. Während amperometrische Aufnahmen, ist eine Kohlefaser-Elektrode gegen die Oberfläche eines sekretorischen Zelle platziert. Exozytotische Aktivität wird als amperometrische Spikes, die die elektrochemische Strom, der durch den Transfer von Elektronen nach der Oxidation der Katecholamine verursacht zeigt beobachtet. Mit etwas Übung machen und Schneiden amperometrischen Elektroden kann Geräuschpegel erheblich über viele der im Han.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Epoxy-Härter 1,3-Phenylendiamin-Flakes	Reagenz	Sigma-Aldrich	P23954-100G04 716AJ	Aliquote werden in einem Exsikkator aufbewahrt und sollten nicht dem Licht ausgesetzt werden.
Kohlenstofffasern	Material	Goodfellow	C005725
Mikro-Hämatokrit-Kapillarrohre	Material	Fisher Scientific	NC9836768
Epoxyharz	Reagenz	Miller-Stephenson	Epon Resin 828
Präparationsmikroskop	Instrument
Elektrodenzieher	Instrument	Narishige International	PP-830	1. Zug = 24,8 Grad C; 2. Zug = 62,7 Grad C
Ofen	Instrument			auf 100 Grad F eingestellt
Heizplatte	Instrument			auf 55 Grad C eingestellt