Intravital Photoschaltung und Verfolgung von Dendra2-markierten Tumorzellen durch die Mammary Imaging-Fenster ist eine Technik, die uns zur Abbildung der metastatischen Verhalten von Tumorzellen in ausgewählten Tumormikromilieu über einer Zeitskala von Tagen erlaubt.
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Methodenartikel
Dendra2 Photoschalten durch die Mammary Imaging Fenster
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
In den letzten zehn Jahren Intravitalmikroskopie von Brusttumoren bei Mäusen und Ratten in Single-Cell-Auflösung
Protokoll
1. Generation von fluoreszierenden Tumoren durch Injektion von Tumorzellen in die Brustfettpolster:
- Baue eine Zelllinie, die Dendra2 Protein (als zytoplasmatischen Marker) zu 40 bis 80% Konfluenz.
- Spülen Sie Geschirr mindestens 3-mal mit PBS w / o Ca 2 + oder Mg 2 +.
- 3 ml Trypsin pro 10 cm Schale und bei 37 ° C, bis die meisten der Zellen und dann lösen traf das Gericht gegen eine ebene Fläche, um sie zu schütteln.
- Spülen Sie alle Zellen von der Schüssel, und mit einem Schaber (Gummi Polizist) auf Matrix sowie zu sammeln. Fügen Sie die 5 ml PBS. Nehmen Sie ein Aliquot während der Zentrifugation zu zählen.....
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Danksagungen
(; CA100324 um JC, JES und JW; U54GM064346 zu JvR CA77522 zu JES, U54CA126511 um JC und BG) Diese Arbeit wurde vom US Department of Defense (BC075554 zu BG und BC061403 zu DK), US-amerikanischen National Institutes of Health unterstützt. Wir danken D. Entenberg um Hilfe bei der Mikroskopie, M. Rottenkolber um Hilfe bei der Herstellung der Imaging-Box und J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) für die F4/80 Antikörper.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| PBS ohne Ca, Mg | GIBCO, by Life Technologies | 14190-144 | |
| Trypsin | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, by Life Technologies | 14025 | |
| DMEM-Medien (MDA-MB-231-Zellen) | GIBCO, by Life Technologies | 11965 | |
| Isofluran (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| SCID-Maus | National Cancer Institute | N/V | |
| Kulturschalen | BD Biosciences | 353003 | Spezialanfertigung |
| Runde Deckgläser, 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Referenzen
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
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Nachdrucke und Genehmigungen
