Methodenartikel
Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie man eine Samenprobe Prozess zu einer qualitativ hochwertigen Fluoreszenz zu erreichen In situ Hybridisierung auf menschliche Spermien. Die Vorbereitungen erhalten können Aneuploidietestung im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose verwendet werden.
Aneuploidien sind die häufigsten Chromosomenstörungen beim Menschen. Die meisten dieser Veränderungen ergeben sich aus meiotischen Fehler bei der gametogenic Prozess bei den Eltern. In der menschlichen Männchen, können diese Fehler auf die Produktion von Spermien mit numerischen Chromosomenanomalien, die eine erhöhte Gefahr der Übertragung dieser Anomalien auf die Nachkommen vertreten führen.
Aus diesem Grund hat die Technik der Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) auf Spermakerne zu einem Protokoll weithin im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose integriert. Diese Praxis liefert eine Schätzung der Frequenzen von numerischen Chromosomenanomalien in den Keimzellen der Patienten, die zur genetischen Reproduktion Rat zu suchen.
Bis heute sind die Chromosomen am häufigsten in Spermien FISH Analyse mit einbezogen Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21.
Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie zu verarbeiten und zu befestigen ein menschliches Sperma Probe, wie man decondense und denaturieren die Spermien Chromatin, wie es weitergehen soll, um Spermien FISH Präparate zu erhalten, und wie die Ergebnisse am Mikroskop sichtbar zu machen. Besondere Hinweise über die wichtigsten Schritte gegeben werden, um optimale Ergebnisse zu erzielen.
I. Aufbereitung der Probe und Zellfixierung
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Dieses Protokoll beschreibt, wie die menschliche Samenproben für den Erhalt von Spermien FISH Präparate Prozess. Mit diesem Protokoll ist es möglich, chromosomale Anomalien bei männlichen Keimzellen zu analysieren. Spermatozoen Aneuploidietestung hat Anwendungen entweder im Rahmen der Grundlagenforschung und in der reproduktiven Beratung der unfruchtbaren Männer. Obwohl in der klinischen Diagnostik der am häufigsten untersuchten Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21, andere kommerzielle Sonden für eine breite Palette von Chro.......
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Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Diese Arbeit wurde von der Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) unterstützt. Die Autoren danken J. Blanco und F. Vidal für ihre Überwachung und Ermutigung, und J. Lucas für seine technische Unterstützung.
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| 1,4-Dithiothreitol (DTT) | Material | Roche-Gruppe | 10197777001 | |
| 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol | Material | Roche-Gruppe | 10708976001 | |
| Essigsäure | Material | Merck && Co., Inc. | 100.063 | |
AneuVysion® Multicolor-DNA-Sonden-Kit
| Material | Vysis Inc. | 32-161075
| |
| Zentrifuge 5804R | Werkzeug | Eppendorf | ||
| Zentrifugenröhrchen | Material | Nalge Nunc international | 347856 | |
| Coplin-Becher (Glas) | Material | Barloworld Scientific | Hellendahl (ZCT278) | |
| Coplin-Becher (Plastik) | Material | Deltalab | 191087 | |
| Deckgläser (15x15) | Material | Knittel Glaser | 4600115 | |
| Deckgläser (18x18) | Material | Knittel Glaser | 4600118 | |
| Diamantstift | Material | Hammacher | 335117010 | |
| Ethanol | Material | Merck && Co., Inc. | 100.983 | |
| Formamid | Material | Roche-Gruppe | 11814320001 | |
| Gefrierschrank | Werkzeug | Zanussi | ||
| Handschuhe | Material | Sanyo | 101/3300 | |
| HYBrite™ | Werkzeug | Vysis Inc. | ||
| Immersionsoel | Material | Olympus Corporation | 35505 | |
| Inkubator | Werkzeug | Heraeus Instruments | ||
| Methanol | Material | Merck && Co., Inc. | 106.009 | |
| Mikropipette | Material | Labsystems | Finnpipette (4500000) | |
| Mikropipettenspitze zum Austauschen | Material | Daslab | 16-2001 | |
| Nagellack | Material | Quo-Kosmetik | ||
| Olympus BX60 Epifluoreszenzmikroskop | Werkzeug | Olympus Corporation | Ausgestattet mit einem Dreifachbandfilter für DAPI/Texas Red/FITC und Einzelbandfiltern für Aqua, FITC und Texas Red. | |
| Pasteur-Pipette | Material | Rubilabor | 211.0230 | |
| Phasenkontrastmikroskop | Werkzeug | Nikon Instruments | ||
| Plastikpipette (3 ml) | Material | Deltalab | 200007 | |
| Kaliumchlorid (KCl) | Material | Fluka | 60128 | |
| Kautschukkleber | Material | Best-Test | ||
| Präparate | Material | Knittel Glaser | 4520022 | |
| Schieber-Aufbewahrungsboxen | Material | Deltalab | 19276.1 | |
| Steriler Behälter | Material | Deltalab | 409726 | |
| Spritze | Material | PentaFerte | 002022300 | |
| Thermometer | Material | Comark Instruments, Inc | KM12 | |
| Dreifach destilliertes Wasser | Material | |||
| Triton X-100 | Material | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| Pinzette | Material | B. Braun Medical | Aesculap (BD224R) | |
| Vertikale laminare Strömung Fluoreszenzhaube | Werkzeug | Burdinola | OR-ST 1500 | |
| Vortex-Mixer | Werkzeug | Fisher Scientific | FB15012 | |
| Wasserbad | Werkzeug | Raypa® |
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