Hier beschreiben wir eine grundlegende Protokoll für die Fluoreszenzmarkierung der verschiedenen Elemente des Herzens Rohre von Larven und erwachsenen Drosophila melanogaster. Diese Proben sind für die Bildgebung mittels Fluoreszenz-oder konfokalen Mikroskopie geeignet. Diese Technik ermöglicht detaillierte Strukturanalyse der Funktionen des Herzens von einem leistungsstarken Modell-Organismus.
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Methodenartikel
Fluoreszenzmarkierung Drosophila Herz Structures
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Protokoll
Bevor Sie beginnen
- Bereiten Sie die folgenden Lösungen:
- Entspannung Puffer (künstliche Drosophila Hämolymphe (ADH) (siehe "Visualisierung des schlagenden Herzens in Drosophila"), die 10 mM EGTA enthält)
- Fixativ (4% Formaldehyd in 1x PBS)
- PBSTx (PBS mit 0,1% Triton-X-100)
- Entsprechend verdünnten Primär-und Spezies-spezifische fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper in PBSTx
- Dissect Drosophila, die Herz-Röhren (von erwachsenen Fliegen und / oder Larven) folgende aussetzen
- die semi-intakten Drosophila Herzen Vo....
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Diskussion
Hier präsentieren wir ein Protokoll, die zur Herstellung und Färbung der Drosophila melanogaster dorsalen Gefäß und der dazugehörigen Gewebe für die Bildgebung mittels Fluoreszenz-oder konfokalen Mikroskopie. Wir bieten eine übersichtliche Darstellung der Schritte verfeinert und am häufigsten in unserem Labor für eine effektive Färbung, die gut aufgelösten erlaubt in situ Darstellung von Larven und erwachsenen Drosophila Herzen Rohre eingesetzt. Andere haben ähnliche Methoden in abgekürzter Fo.......
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Danksagungen
Die Autoren danken SI Bernstein (San Diego State University) für die kritische Durchsicht und Anregungen in Bezug auf die Erstellung des Manuskripts. Diese Arbeit wurde vom NIH gewährt SI Bernstein, SDSU, und R. Bodmer, BIMR unterstützt, und durch ein Postdoc-Stipendium von der Western States Partner der American Heart Association zu G. Vogler und A. Cammarato.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Ethylenglykol-bis(2-aminoethyläther)-N,N,N’,N’-tetraessigsäure (EGTA) | Reagenz | Sigma-Aldrich | E4378 | |
| Formaldehyd, 10 %, methanolfrei, ultrarein | Reagenz | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagenz | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 Phalloidin | Reagenz | Invitrogen | A12381 | |
| Vectashield® Eindeckmedium für Fluoreszenz mit DAPI | Reagenz | Vector Laboratories | H-1200 | |
| Wolframnadeln | Reagenz | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Nadelhalter | Reagenz | Fine Science Tools | 26018-17 |
Referenzen
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
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Nachdrucke und Genehmigungen
