Die Entzifferung Axonal Pathways von genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der Küken Neuralrohr Verwendung In ovo Elektroporation

Summary

Dieses Video zeigt, wie axonale Wege der genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der embryonalen chick Rückenmark Nutzung visualisieren In ovo Elektroporation von Reporter-Gene unter der Kontrolle von spezifischen Enhancer-Elemente.

Abstract

Beschäftigung von Enhancer-Elemente zur Expression von Reporter-Gene in Nervenzellen Laufwerk ist ein weit verbreitetes Paradigma für die Verfolgung von axonalen Projektion. Für Tracking axonale Projektion der spinalen Interneuronen bei Wirbeltieren, Ertrag Keimbahn gezielte Reportergene bilateral symmetrische Kennzeichnung. Daher ist es schwer, zwischen dem ipsi-und contra-seitlich abstehende Axonen zu unterscheiden. Einseitige Elektroporation in das Küken Neuralrohr stellt ein nützliches Mittel, um die Expression eines Reportergens zu einer Seite des zentralen Nervensystems zu beschränken und axonale Projektion auf beiden Seiten folgen

Protocol

I. Die Elektroporation

Egg Handling

1. Legen Sie die Eier in einem befeuchteten Inkubator eingestellt auf 37-38 ° C, vorzugsweise einem Inkubator mit einem Schaukelstuhl Tabletts.
2. Embryo nach etwa 66 Stunden der Inkubation elektroporiert, wenn sie Hamburger und Hamilton (HH) Stufe 18-20 erreicht haben. In diesem Stadium der Kopf liegt im rechten Winkel zum Rumpf (Bedingung genannt zervikalen Biegung) und eine große Reihe von extra-embryonalen Blutgefäße, wie anterior, posterior, rechts und links Dottervenen gesehen werden sollte. Dies ist eine optimale Bühne für Enhancer-abhängigen Expression ^1,3,4. Es ist wichti....

Discussion

Elektroporation von Plasmid-DNA in das Hühnerembryo entwickelt sich als eine leistungsstarke Technik für in vivo ektopische Expression. Die Kombination von spezifischen Enhancer und chick Elektroporation bietet eine schnelle und effiziente Werkzeug für die Entschlüsselung axonalen Wege eines genetisch definierten Gruppe von Neuronen ^1,3,5. Mit Hilfe des Cre / loxP und die Gal4/UAS Verstärkung Systeme ergänzen die Höhe und Dauer der Ausdruck. Das entstehende Bild ist von einem komplexen Divergenz der axonalen .......