Fly klatring assay: En metode for å teste generell bevegelse i Drosophila melanogaster

Overview

Denne videoen beskriver en enkel metode for å kvantifisere flue-bevegelse og viser klatreanalysen som utføres.  Flyklatringsanalysen er en generell test av motorisk funksjon som er avhengig av en negativ geotaxisrespons.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen for å identifisere nye nevrobeskyttende gener i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Klatring Assay (Tilpasset fra Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valider klatreanalysen. I denne studien tester du klatreanalysen basert på tidligere beskrevet metodikk av Ali et al., ved hjelp av Elav^C155>UAS-Tau^R406W (med lavere klatrepass) og Elav^C155>UAS-GFP (kontroll) og Elav^C155>UAS-mCherry (kontroll) fluer.
2. Vend fluene inn i et testkammer, en linje om gangen (ikke bruk CO₂ anestesi) og la dem komme seg i 5 minutter. Hvis testing gjøres på forskjellige dager, utfør analysen på samme tid på dagen. I denne studien ble alle klatreanalyser utført om ettermiddagen for å kontrollere for sirkadiske effekter på bevegelse.
   MERKNAD Unngå å utsette fluene for direkte sollys når du tester; Dette vil forstyrre deres evne til å klatre.
3. Trykk med tvang kammeret (merket side ned) på en musematte plassert på en solid overflate 3 ganger, slik at alle fluer begynner analysen nederst. Vær oppmerksom på flue-bevegelse over en periode på 10 s.
4. Registrer antall fluer som når eller passerer 5 cm linjen innen denne tiden, samt totalt antall fluer testet. Gjenta protokollen, venter 1 min mellom hver prøveversjon, for minst 3 prøveversjon replikerer per linje.
   MERKNAD I den nåværende studien inneholdt hvert hetteglass mellom 2 og 19 fluer for den første screeningen (mannlige fluer) og mellom 6 og 21 fluer for mutantmangelanalysen av kryssede kvinnelige linjer.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package