फ्लाई क्लाइम्बिंग परख: ड्रोसोफिला मेलनोगेस्टर में जनरल लोकोमोशन का परीक्षण करने के लिए एक विधि

Overview

यह वीडियो फ्लाई लोकोमोशन की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सरल विधि का वर्णन करता है और चढ़ाई परख को दिखाता है।  फ्लाई क्लाइम्बिंग परख मोटर फ़ंक्शन का एक सामान्य परीक्षण है जो नकारात्मक भू-कर प्रतिक्रिया पर निर्भर करता है।

Protocol

यह प्रोटोकॉल गेवेडन एट अल (2019) में उपन्यास न्यूरोप्रोटेक्टिव जीन की पहचान करने के लिए वीवो फॉरवर्ड जेनेटिक स्क्रीन मेंगेवेडन एट अल(2019) का एक अंशहै। 

1. परख चढ़ाई (अली एट अलसे अनुकूलित ., जे विस Exp. ((2011))

1. चढ़ाई परख मान्य करें। इस अध्ययन में, अली एट अल द्वारा पहले वर्णित पद्धति के आधार पर चढ़ाई परख का परीक्षण करें, Elav^C155>UAS-Tau^R406W (कम चढ़ाई पास दरों का प्रदर्शन) और Elav^C155>UAS-GFP (नियंत्रण) और Elav^C155>UAS-mCherry (नियंत्रण) मक्खियों का उपयोग कर ।
2. मक्खियों को एक परीक्षण कक्ष में फ्लिप करें, एक समय में एक पंक्ति (सीओ₂ संज्ञाहरण का उपयोग न करें) और उन्हें 5 मिनट तक ठीक होने की अनुमति दें। यदि अलग-अलग दिनों पर परीक्षण किया जाता है, तो दिन के एक ही समय पर परख करें। इस अध्ययन में, लोकोमोशन पर सर्कैडियन प्रभावों को नियंत्रित करने के लिए दोपहर में सभी चढ़ाई परख किए गए थे।
   नोट परीक्षण करते समय मक्खियों को सीधे सूरज की रोशनी में उजागर करने से बचें; यह उनके चढ़ने की क्षमता के साथ हस्तक्षेप करेगा।
3. जबरन एक ठोस सतह पर रखा एक माउस पैड पर कक्ष (चिह्नित पक्ष नीचे) नल 3 बार तो सभी मक्खियों नीचे परख शुरू करते हैं । 10 एस की अवधि में फ्लाई लोकोमोशन का निरीक्षण करें।
4. इस समय के भीतर 5 सेमी लाइन तक पहुंचने या पास करने वाली मक्खियों की संख्या रिकॉर्ड करें, साथ ही मक्खियों की कुल संख्या का परीक्षण किया गया। प्रोटोकॉल दोहराएं, प्रत्येक परीक्षण के बीच 1 मिनट की प्रतीक्षा करें, न्यूनतम 3 परीक्षण प्रति पंक्ति प्रतिकृति के लिए।
   नोट वर्तमान अध्ययन में, प्रत्येक शीशी प्रारंभिक स्क्रीनिंग (पुरुष मक्खियों) के लिए 2 और 19 मक्खियों के बीच और पार की गई महिला लाइनों के उत्परिवर्ती कमी विश्लेषण के लिए 6 और 21 मक्खियों के बीच निहित है।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package