フライクライミングアッセイ:ショウジョウバエメラノガスターの一般的な運動をテストする方法

Overview

このビデオでは、飛行移動を定量化する簡単な方法を説明し、実行されるクライミングアッセイを示します。 フライクライミングアッセイは、負のジオタキシス応答に依存する運動機能の一般的なテストです。

Protocol

このプロトコルは、ショウジョウバエメラノガスター、J.Vis.Exp.(2019)における新しい神経保護遺伝子を同定するためのGevedonら.、In Vivoフォワード遺伝的スクリーンからの抜粋である。 

1. クライミングアッセイ(アリら、J.ヴィスExpから適応。(2011))

1. クライミングアッセイを検証します。本研究では、Elav^C155>UAS-Tau^R406W(低いクライミング合格率を示す)とElav^C155>UAS-GFP(コントロール)およびElav C155>UAS-mCherry(コントロール)ハエを使用して、Aliらが以前に説明した方法論に基づいてクライミングアッセイをテストします。
2. ハエを試験室に一度に1行ずつ反転させ_(CO2麻酔を使用しない)、5分間回復させます。異なる日にテストを行う場合は、その日の同じ時間にアッセイを行います。本研究では、すべての登山アッセイを午後に行い、移動に対する概日的影響を制御した。
   注テスト時にハエを直射日光に当てないようにしてください。これは彼らの登る能力を妨げるでしょう。
3. 固体表面に置かれたマウスパッドにチャンバー(横下にマーク)を強制的にタップし、すべてのハエが下部のアッセイを開始します。10 sの期間にわたって飛ぶ移動を観察します。
4. この時間内に5cm線に到達または通過するハエの数と、テストされたハエの総数を記録します。各試行の間に 1 分待機するプロトコルを繰り返し、1 行あたり最低 3 回の試行を繰り返します。
   注本研究では、最初のスクリーニングのために2〜19ハエ(オスハエ)および6〜21の間に含まれる各バイアルは、交差した雌の線の突然変異欠乏分析のためにハエである。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
VWR® Drosophila Vial; Narrow	VWR	75813-160
VWR® General-Purpose Laboratory Labeling Tape	VWR	89097-912
Standard mouse pad
Stereoscope	Motic		Model SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	89510-750
R software package