Dieses Protokoll zeigt, wie man retrograd Label retinalen Ganglienzellen, und wie man später machen ein Sehnerv Quetschverletzung um retinalen Ganglienzellen Überleben und Apoptose zu analysieren. Es ist eine experimentelle Krankheit Modell für verschiedene Arten von Optikusneuropathie, einschließlich Glaukom.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Ein Optic Nerve Crush Injury Mausmodell zur retinalen Ganglienzellen Survival Study
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Eine Verletzung des Sehnervs kann die axonale Degeneration führen, gefolgt von einer allmählichen Tod von retinalen Ganglienzellen (RGC), die zu einer irreversiblen Verlust der Sehkraft führt. Beispiele für solche Krankheiten in menschlichen gehören traumatische Optikusneuropathie und Sehnerv-Degeneration bei Glaukom. Es ist durch die typischen Veränderungen im Sehnervenkopf, progressive Degeneration des Sehnervs und der Verlust von retinalen Ganglienzellen, wenn unkontrolliert, was zu Sehverlust und Erblindung aus.
Der Sehnerv crush (ONC) Verletzungen Mausmodell ist eine wichtige experimentelle Krankheit Modell für traumatische Optikusneuropathie, Glaukom, etc. In diesem Modell das Gedränge Verletzung des Sehnervs führt zur allmählichen retinalen Ganglienzellen Apoptose. Diese Krankheit Modell kann verwendet werden, um die allgemeinen Prozesse und Mechanismen der neuronalen Tod und Überleben, die wesentlich für die Entwicklung von therapeutischen Maßnahmen ist zu studieren. Darüber hinaus können pharmakologische und molekularbiologische Ansätze in diesem Modell verwendet werden, um zu identifizieren und zu testen potenzielle therapeutische Reagenzien für verschiedene Arten von Optikusneuropathie zu behandeln.
Hier bieten wir Ihnen eine Schritt für Schritt Demonstration von (I) Baseline retrograde Markierung von retinalen Ganglienzellen (RGC) am Tag 1, (II) Sehnerv Quetschverletzung am Tag 4, (III) Ernte der Netzhaut und zu analysieren RGC Überleben am Tag 11, und (IV) repräsentatives Ergebnis.
Protokoll
Alle Geräte und Reagenzien sind steril. Alle Tierversuche wurden von der Animal Care genehmigt und Verwenden Committee (ACUC) an der NEI / NIH (Tier Studienprotokoll NEI-570), und wurden nach den NIH-Richtlinien und Vorschriften durchgeführt.
1. Baseline Retrograde Markierung von retinalen Ganglienzellen (RGC) Am Tag 1
Der Zweck dieses Verfahrens ist es, die retinalen Ganglienzellen retrograd Etikett durch die Injektion eines neuronalen Markierungsfarbstoff in den Colliculus superior der Mäuse drei Tage vor dem Sehnerv Quetschverletzung. Der Farbstoff wird retrograd entnommen werden von den retinalen Ganglienzel....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Der Sehnerv Quetschverletzung Mausmodell ist nützlich, um den Prozess der RGC Tod und Überleben zu untersuchen. Dieses Modell ist auch oft verwendet, um die Auswirkungen der verschiedenen Reagenzien und Gene auf RGC Apoptose und Überleben zu untersuchen. Ein Vorteil dieses Modells ist, dass es ein hohes Maß an Reproduzierbarkeit bei minimalen Variationen hat.
Allerdings ist besondere Sorgfalt in mehreren Schritten in diesem Modell erforderlich. Erstens, wenn was den Sehnerv Quetschverletzung.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Unsere Forschung wird durch die Interne Research Program des NIH, National Eye Institute unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Stereotaktischer Apparat | ASI Instruments | SAS-4100 | |
| Präparationsmikroskop | World Precision Instruments, Inc. | PZMIV-BS | |
| Messerskalpellgriff | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Messerskalpellblätter Nr. 15 | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| Mikrobohrer | Fine Science Tools | 18000-17 | |
| Nahtnadel | Fine Science Tools | 12050-03 | |
| Federschere | Fine Science Tools | 16144-13 | |
| Dumont Nr. 5 Pinzette | Fine Science Tools | 11252-50 | |
| Hamilton-Spritze | Hamilton Co | 88400 | |
| Gazetupfer | Office Depot | 674889 | |
| Fluorochrom | Sigma-Aldrich | 39286 | |
| Alkohol | Sigma-Aldrich | 459844 | 70% |
| H2O2 | Sigma-Aldrich | H3410 | 3% |
Referenzen
- Yoles, E. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Investigative ophthalmology & visual science. 33, 3586-3591 (1992).
- Fisher, J. Vaccination for neuroprotecti....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
