Intranasale Verabreichung von Medikamenten an Mäuse über Pipette und umgekehrte Kanülierung für die Verabreichung von Medikamenten von der Nase zum Gehirn

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle:

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Tiere, die zur intranasalen Verabreichung unter Inhalationsanästhesie verwendet werden

, halten die Versuchsmäuse in Edelstahlkäfigen unter einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus (Licht von 8:00 bis 20:00 Uhr) mit einer kontrollierten Temperatur von 23 ± 1 °C, einer Luftfeuchtigkeit von 50 % ± 10 % und einem ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser.
Vor dem Versuch werden die Mäuse durch Inhalation von 2 % Isofluran anästhesiert, nach Initiierung in einer Konzentration von 4 %. Bestätigen Sie den erforderlichen Grad der Betäubung, indem Sie prüfen, ob die Oberflächenaufrichtung verschwunden ist.

2. Zubereitung der Verabreichungslösung

Bereiten Sie eine Verabreichungslösung aus [¹⁴C]-Inulin (50 μM, 0,5 μCi/ml pro Maus) vor, indem Sie sie in phosphatgepufferter Kochsalzlösung verdünnen und bis zur Verwendung bei 4 °C lagern.

3. Intranasale Verabreichung für Mäuse

Mikropipettenmethode mit einer vorübergehend zu öffnenden Inhalationsmaske (Abbildung 1)
1. Fixieren Sie Mäuse in Rückenlage auf einer Pinnwand, indem Sie ihre Gliedmaßen unter Inhalationsanästhesie mit 2% Isofluran abkleben (Abbildung 1A).
2. Verabreichen Sie jeder Maus in Abständen von 30 s ein Gesamtvolumen von 25 μl Verabreichungslösung über 1- bis 2-μl-Dosen, die abwechselnd in das linke und rechte Nasenloch verabreicht werden, während die Mäuse unter Inhalationsnarkose fixiert werden (Abbildung 1B und C).
3. Hinweis: Das Narkosegas wird beim Öffnen der Maske mit aktiven Mitteln (Abzug, Biosicherheitswerkbank mit hartem Dukt, Vakuum usw.) und beim Schließen mit passiven Mitteln (Abfallanästhesiegaskanister) abgesaugt.
Umgekehrte Kanülierungsmethode von der Atemwegsseite durch die Speiseröhre (Abbildung 2)
1. Befestigen Sie Mäuse in Rückenlage auf einer Pinnwand, indem Sie ihre Gliedmaßen unter Inhalationsnarkose mit 2% Isofluran abkleben.
2. Die Haare im Nacken werden rasiert und durch Betadin- oder Chlorhexidin-Anwendung vorbereitet, gefolgt von einer Alkoholspülung.
3. Legen Sie die Luftröhre und die Speiseröhre frei, indem Sie die Haut unterhalb des Rachens mit einer Zange erweitern, nachdem Sie einen kleinen Schnitt (1,5 cm) mit einer Schere gemacht haben.
4. Machen Sie mit einer Schere einen Schnitt (1 mm) in der Luftröhre.
5. Führen Sie eine Kanüle (Innendurchmesser: 0,58 mm, Außendurchmesser: 0,965 mm) auf einer Länge von 1,2 cm ein und befestigen Sie das gegenüberliegende Ende der Kanüle an der Innenseite der Inhalationsmaske.
6. Machen Sie mit einer Schere einen Schnitt (1 mm) in der Speiseröhre, führen Sie eine Kanüle (Innendurchmesser: 0,28 mm, Außendurchmesser: 0,61 mm) in einer Länge von 1,4 cm in Richtung des hinteren Teils der Nasenhöhle ein und ligieren Sie sie (Abbildung 2A und B). Anmerkung: Die Verfahren 3.2.2 bis 3.2.4 wurden unter einem stereoskopischen Mikroskop bei ×10-facher Vergrößerung durchgeführt.
7. Befestigen Sie eine Nadel (27G × 1/2) an einer 1-ml-Spritze, die mit einer Verabreichungslösung gefüllt ist, und schließen Sie sie an eine programmierbare Mikrospritzenpumpe an.
8. Die obige Nadel wird mit der Kanüle verbunden, die bei 3.2.5 in die Speiseröhre eingeführt wurde (Abbildung 2C).
9. Ein Gesamtvolumen von 25 μl [¹⁴C]-Inulinlösung mit einer konstanten Rate (5 μL/min) verabreichen (Abbildung 2C und 2D).

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Ergebnisse

Abbildung 1: Intranasale Verabreichung mit einer Mikropipette in Verbindung mit einer vorübergehend zu öffnenden Inhalationsmaske. Fotos, die eine fixierte Maus (A) mit geschlossener Maske vor der Verabreichung, (B) eine Nahaufnahme und (C) G...