Wir bieten eine praktische Anleitung für die Bereitstellung von Tracer In vivo Und die spinozerebellären Weg als Modellsystem, um wesentliche Schritte für eine erfolgreiche Analyse neuronaler Schaltkreise in Mäusen zu demonstrieren. Wir beschreiben im Detail unsere vielseitigen Tracing-Protokoll, das Weizenkeimagglutinin (WGA) konjugiert Alexa Fluorophore Exploits.
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Methodenartikel
Revealing Neural Circuits Topographie in Multi-Color
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Neuronale Schaltkreise sind in funktionale topografische Karten organisiert. Um komplexe Schaltung Architektur visualisieren wir entwickelten einen Ansatz, um zuverlässig Etikett der globalen Strukturierung von mehreren topographischen Projektionen. Das Kleinhirn ist ein ideales Modell, um die geordnete Anordnung der neuronalen Schaltkreise zu untersuchen. Zum Beispiel hat die räumliche Organisation der spinozerebellären Moosfasern sich als unverzichtbare System für das Studium Moosfaser Strukturierung werden. Wir konnten kürzlich zeigen, dass Weizenkeimagglutinin (WGA) konjugiert Alexa 555 und 488 können für die Rückverfolgung spinozerebellären Moosfaser Projektionen in der Entwicklung und erwachsenen Mäusen verwendet werden (Reeber et al. 2011). Wir fanden drei großen Eigenschaften, die die WGA-Alexa Tracer wünschenswert Tools machen für die Kennzeichnung neuronalen Projektionen. Erstens sind Alexa Fluorophore intensive und ihre Helligkeit lässt wholemount Bildgebung direkt nach Tracing. Zweitens Label WGA-Alexa Tracer die gesamte Flugbahn des sich entwickelnden und adulten neuralen projections. Drittens WGA-Alexa Tracer sind schnell in beide retrograde und anterograde Richtungen transportiert. Hier beschreiben wir detailliert, wie die Tracer und andere erforderliche Tools, wie die Operation für spinozerebellären Tracing durchführen und wie man am besten zum Bild zurück Projektionen in drei Dimensionen vorzubereiten. Zusammenfassend stellen wir eine Schritt-für-Schritt-Tracing-Protokoll, das von Nutzen sein wird für die Entschlüsselung der Organisation und Vernetzung der funktionellen Karten nicht nur im Kleinhirn, sondern auch in der Hirnrinde, Hirnstamm und Rückenmark.
Protokoll
1. Delivering Tracer in vivo mit sterilen OP (§ § 1,1 bis 1,16)
Während des gesamten Verfahrens beraten wir, dass Standard-sterilen OP-Techniken eingesetzt werden. Dazu gehört die Verwendung steriler Handschuhe, Kittel und Mundschutz. Die Werkzeuge sollten entweder vor Gebrauch autoklaviert werden oder gründlich mit Wasser und anschließend Ethanol gereinigt. Während der Operation und vor allem zwischen Tieren, sauber Gewebestücke aus den Werkzeugen und trocken zu sterilisieren Instrumente mit einem heißen bead Sterilisator (Steri 250 Cat. # 18000-45, Fine Science Tools). Darüber hinaus ist es wichtig, dass Sie Ihren Arbeitsplatz so....
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Diskussion
Wir haben die operative und technische Details für eine erfolgreiche axonalen und dendritischen Tracing unter Verwendung eines neuartigen Fluoreszenz-basierten Ansatz für die schnelle Kennzeichnung neuronalen Projektionen in der Entwicklung und erwachsenen Mäusen erforderlich beschrieben. Mit WGA-Alexa zeigen wir, wie Tracer und Marker für die Analyse von strukturierten Topografie elektrischer Schaltungen mit hoher Auflösung und in drei Dimensionen verwendet werden kann.
Viele Indikatoren si.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom neuen Ermittler Anschubfinanzierung von Albert Einstein College of Medicine der Yeshiva University RVS unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Equipment / Reagenzien | Model / Katalog-Nummer | Firma | |
| Bead-Sterilisator | Modell Steri 250 Cat. # 18000-45 | Feine Science Tools | |
| Cauterizer | Cat. # 18000-00 | Feine Science Tools | |
| Borosilikatglas Kapillaren | Cat. # 300056 | Harvard Apparatus | |
| Zweistufige Glasmikropipette Puller | Modell 001-PC-10 | Narishige | |
| Mikrometer Spritze | Cat. # GS-1100 | Gilmont Instruments | |
| Small Animal stereotaktische Instrument | Modell 940-A | Kopf Instrumentation | |
| Electrode Manipulator | Modell 960 | Kopf Instrumentation | |
| Vetcare Kammer | Cat. #340508 | Harvard Apparatus | |
| Heizkissen | Cat. # 341241 | Harvard Apparatus | |
| Leica DFC360 FX Kamera | DFC360 FX | Leica | |
| Leica DFC490 Kamera | DFC490 | Leica | |
| Leica DM5500 Mikroskop | DM5500 | Leica | |
| Leica DFC3000 FX-Kamera | DFC3000 FX | Leica | |
| Leica MZ16 FA-Mikroskop | MZ16 FA | Leica | |
| CY3 Filter | Model # 11600231 | Leica | |
| FITC Filter | Model # 11513880 | Leica | |
| A4 DAPI / UV-Filter | Model # 11504162 | Leica | |
| Weizenkeimagglutinin, Alexa Fluor 488-Konjugat | Cat. # W11261 | Invitrogen | |
| Weizen germ Agglutinin, Alexa 555-Konjugat | Cat. # W32464 | Invitrogen |
Referenzen
- Apps, R., Hawkes, R. Cerebellar cortical organization: a one-map hypothesis. Nat. Rev. Neurosci. 10, 670-681 (2009).
- Grishkat, H. L., Eisenman, L. M. Development of the spinocerebellar projection in the prenatal mouse. J. Comp. Neurol. 363, 93-108 (1995).....
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Nachdrucke und Genehmigungen
