Mechanische Kräfte spielen eine Schlüsselrolle in der Entwicklung und Lunge Lungenversagen. Hier beschreiben wir eine Methode, um Nager fetalen Lunge Typ II Epithelzellen und Fibroblasten zu isolieren und sie auf mechanische Stimulation mit ein Exposé In-vitro- System.
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Methodenartikel
Ein experimentelles System, um Mechanotransduktion in fetalen Lunge Zellen zu untersuchen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Mechanische Kräfte in der Gebärmutter mit sich wiederholenden Bewegungen wie Atmung-und Spannungsgefühl durch Flüssigkeit erzeugt werden, sind entscheidend für die normale Entwicklung der Lunge. Ein wesentlicher Bestandteil der Entwicklung der Lunge ist die Differenzierung der alveolaren Typ II Epithelzellen, die Hauptquelle der pulmonalen Surfactant. Diese Zellen auch in Flüssigkeitshomöostase Teilnahme an der Alveolarlumen, Immunabwehr und zu reparieren. Darüber hinaus können distalen Lungenparenchym Zellen direkt auf übertriebene Dehnung werden während der mechanischen Beatmung ausgesetzt nach der Geburt. Allerdings sind die genauen molekularen und zellulären Mechanismen, durch die Lungenzellen spüren, mechanische Reize, um die Entwicklung der Lunge zu beeinflussen und zu fördern Lungenschädigung nicht vollständig verstanden. Hier bieten wir eine einfache und hoher Reinheit Methode, um Typ-II-Zellen und Fibroblasten von Nagern fetalen Lunge zu isolieren. Dann beschreiben wir ein in vitro System, das Flexcell Dehnungseinheit, auf mechanische Reize, um fötale Zellen liefern, die Simulation mechanischer Kräfte infetalen Lunge Entwicklungs-oder Lungenversagen. Dieses experimentelle System bietet ein ausgezeichnetes Werkzeug, um molekulare und zelluläre Mechanismen der fetalen Lunge ausgesetzten Zellen strecken zu untersuchen. Mit diesem Ansatz hat sich unser Labor mehrere Rezeptoren und Signalproteine, die in der Mechanotransduktion Teilnahme an fetalen Lunge Entwicklung und Lungenschädigung identifiziert.
Protokoll
1. Beschichtung von Platten mit ECM-Proteine
- Unter sterilen Bedingungen mischen 120 ug von Laminin mit 12 ml kaltem sterile 1X PBS pro Platte.
- Nehmen Bioflex unbehandelten Platten und fügen 2ml der Lösung in jede Vertiefung (Endkonzentration von Laminin ist 2 pg / cm 2). Alternativ könnten andere ECM-Proteine verwendet werden, wie Kollagen-1 [10 ug / cm 2], Fibronektin [5 ug / cm 2], Vitronectin [0,5 ug / cm 2] oder Elastin [10 ug / cm 2]. Das Beschichtungsverfahren ist ähnlich zu dem, was sie für Laminin-Beschichtung beschrieben. Sicherstellen, dass die Kavitäten werden vollständig von der....
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Diskussion
In diesem Manuskript, beschreiben wir eine Methode zur fetalen Typ-II-Epithelzellen und Fibroblasten zu isolieren und sie auf mechanische Stimulation mit dem Apparat Flexcell Stamm freizulegen. Wir haben diese Technik verwendet, um Differenzierung von Epithelzellen zu bewerten und 1,2-Rezeptor und Signalwege durch Dehnung 3-9 aktiviert zu studieren. Darüber hinaus kann dieses Verfahren auch verwendet werden, um Zell-Reaktionen durch mechanische Verletzung 10,11 induziert werden wird. Das.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Unterstützt von NIH HD052670.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma-Aldrich | D5648 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Kollagenase 1 | Sigma-Aldrich | C0130 | |
| Kollagenase 1A | Sigma-Aldrich | C9891 | |
| Hühnerserum | Sigma-Aldrich | C5405 | |
| Siebböden | Sigma-Aldrich | CD1-1KT | |
| Spritzenfilter | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
| 100-Mikron-Nylon-Mesh | Small Parts, Inc. | CMN-100-D | |
| 30-Mikron-Mesh | Small Parts, Inc. | CMN-30-D | |
| 15-Mikron-Mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
| Laminin | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Kollagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F1141 | |
| Vitronectin | Sigma-Aldrich | V-0132 | |
| Elastin | Sigma-Aldrich | E-6402 | |
| Bioflex-Platte | Flexcell International | BF-3001U | Unbeschichtet |
| Flexcell-Dehnungsgerät | Flexcell International | FX-5000 |
Referenzen
- Sanchez-Esteban, J., Tsai, S. W., Sang, J., Qin, J., Torday, J. S., Rubin, L. P. Effects of mechanical forces on lung-specific gene expression. Am. J. Med. Sci. 316, 200-204 (1998).
- Sanchez-Esteban, J., Cicchiello, L. A., Wang, Y., Tsai, S. W., Williams, L. K., Torday, J. S., Rubin, L. P.
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Nachdrucke und Genehmigungen
