Hier beschrieben ist ein Verfahren, bei dem Lipopolysaccharid in der laktierenden Milchdrüse der Maus über den Nippel, um Mastitis zu simulieren, ein Zustand, üblicherweise durch bakterielle Infektion verursacht wird injiziert. Lipopolysaccharide Injektion führt zu einer erhöhten nuclear factor kappa B (NF-kappaB) Signaltechnik, visualisiert durch Biolumineszenz Bildgebung eines NF-kappaB Luciferase-Reporter-Maus.
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Methodenartikel
Intraduktale Injektion von LPS als Maus-Modell der Mastitis: Signaling Visualisierte über einen NF-kappaB Reporter Transgene
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Tiermodelle von Krankheiten sind, um konsequent zu studieren Stadien der Krankheitsprogression und die damit verbundenen Mechanismen, und schließlich, als prä-klinischen Modellen Interventionen zu testen notwendig. Bei diesen Verfahren beschreiben wir eine Technik, bei der Lipopolysaccharid (LPS) in der laktierenden Milchdrüse der Maus über den Nippel, effektiv Mastitis Modellierung oder Entzündung, der Drüse eingespritzt wird. Diese simulierte Infektion führt zu einer erhöhten nuclear factor kappa B (NF-kappaB) Signalisierung, wie visualisiert durch Biolumineszenz Bildgebung eines NF-kappaB Luciferase-Reporter Maus 1.
Unser oberstes Ziel bei der Entwicklung dieser Methoden war, um die Entzündung mit Mastitis in der laktierenden Drüse, die oft auch Rötungen, Schwellungen und Immunzellen Infiltration 2,3 assoziiert zu studieren. Daher konnten wir sehr bewusst, dass Einschnitt oder jede Art von verwundeten der Haut, den Nippel oder die Drüse, um die LPS konnte einzuführennicht in unserem Verfahren verwendet werden, da der Ansatz eher verwirren würden die Ausleseschaltung von Entzündungen. Wir wollten eine straight-forward-Methode, die nicht verlangen, speziell angefertigten handgezeichneten Pipetten oder den Einsatz von Mikromanipulatoren diese spezielle Werkzeuge in Position zu halten. Somit haben wir festgestellt, einen handelsüblichen Insulin-Spritze zu verwenden und die Mittel in den Kanal mammary eines intakten Nippel injizieren. Diese Methode war erfolgreich und erlaubte uns, die Entzündung mit LPS-Injektion verbundenen ohne zusätzliche Effekte durch den Prozess der Injektion überlagert studieren. Zusätzlich hat dieses Verfahren auch eine NF-kappaB-Luciferase Reporter transgene Maus und biolumineszierende Bildgebungstechnologie verwendet werden, um visuell anzuzeigen und quantitativ erhöht NF-KB Signalisierung innerhalb des LPS-injizierten Verschraubung 4.
Diese Methoden sind von Interesse für Wissenschaftler aus vielen Disziplinen, die wollen Modell Krankheit innerhalb der laktierenden Brustdrüse, wie letztlich die Technikhier beschriebenen könnten zur Injektion einer Reihe von Stoffen genutzt werden, und ist nicht nur auf LPS begrenzt.
Protokoll
Alle Tierversuche wurden von der Vanderbilt University Institutional Animal Care und Use Committee genehmigt.
Ein. Herstellung transgener Mäuse
- Weibliche Mäuse, positiv für die NGL (N F-KB-G FP-L uciferase) Reporter-Transgen (zuvor beschriebene 1) sind für dieses Verfahren verwendet. Wenn Weibchen mindestens 6 Wochen alt sind, paaren sie mit einem FVB Wildtyp männlich. Harem Zucht verwendet werden (bis zu 4 Weibchen in einem Käfig mit 1 Mann) werden. (Achtung: FVB Stamm-Mäuse wurden für die vorliegende Studie verwendet Dunkler Stamm-Mäuse wie C57Bl6 können ebenfalls verwendet werden, aber diese Mäuse....
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Diskussion
Hier eine transgene NF-KB-Reporter Maus und ein optimiertes Modell zu Injektionstechnik Mastitis nutzen, Entzündung des Brustgewebes am häufigsten durch bakterielle Infektion verursacht. Der wichtigste Schritt in diesem Verfahren ist die intraduktalen Injektion selbst.
In der Praxis ist es in der Regel zeigen, ob der intraduktalen Injektion erfolgreich war. Die Injektion der Substanzen (LPS oder PBS) sollen sich Fluid und es sollte wenig bis keinen Widerstand als die Spritze geleert wird. Di.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom NIH CA113734 verliehen F Yull und dem Department of Veterans Affairs (TS Blackwell) finanziert.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare |
| Lipopolysaccharid aus Escherichia coli (LPS) | Sigma | L 2880 | Serotyp 055: B5 |
| PBS | Mediatech, Inc. | 46-013-CM | |
| 31 Gauge Insulinspritze | Becton Dickinson | 328438 | Kurze Nadel |
| Zange | World Precision Instruments | 15908 | |
| Binokular | Leica | M3Z | |
| Terrell Isofluran, USP | MINRAD Inc. für Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| IVIS 200 Imaging-System | Caliper (ehemals Xenogen) | N / A | |
| Spritze zur Injektion Luciferin | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5 / 8 |
| D-Luciferin Firefly, Natriumsalz Monohydrat (Luciferin-Substrat) | Biosynth Chemie und Biologie | L-8240 | Verdünnt auf 10 mg / ml |
Referenzen
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E.
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Nachdrucke und Genehmigungen
