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Methodenartikel

Synthetische Spinnenseide Produktion im Labormaßstab

27.6K Ansichten

DOI:

10.3791/4191

18. Juli 2012

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Trotz der hervorragenden mechanischen und biochemischen Eigenschaften von Spinnenseide, kann dieses Material nicht in großen Mengen mit konventionellen Mitteln gewonnen werden. Hier beschreiben wir eine wirksame Strategie, um künstliche Spinnenseide, die ein wichtiger Prozess für die Ermittler Studium Spinnenseide Herstellung und ihre Verwendung als Next-Generation-Biomaterialien ist zu spinnen.

Zusammenfassung

Wie die Gesellschaft fortschreitet und die Ressourcen werden knapper, wird es immer wichtiger, neue Technologien zu kultivieren, dass Ingenieur Biomaterialien nächsten Generation mit hoher Performance Eigenschaften. Die Entwicklung dieser neuen strukturellen Materialien muss schnell, kostengünstig und beinhalten Verarbeitungsverfahren und Produkte, die umweltfreundlich und nachhaltig sind. Spinnen spinnen eine Vielzahl von verschiedenen Fasertypen mit unterschiedlichen mechanischen Eigenschaften und bietet eine reiche Quelle der nächsten Generation technischen Werkstoffen für Bionik, dass Rivalen die besten künstlichen und natürlichen Materialien. Da die Aufnahme von großen Mengen der natürlichen Spinnenseide ist unpraktisch, hat Kunstseide Produktion die Möglichkeit, Wissenschaftler mit Zugang zu einem unbegrenzten Vorrat an Themen zu bieten. Deshalb, wenn das Spinnverfahren können gestrafft und perfektioniert haben künstliche Spinne Fasern die mögliche Verwendung für ein breites Spektrum von Anwendungen, die von Body Armor, chirurgisches Nahtmaterials, Kabel und Seile, Reifen, Saiten für Musikinstrumente, und Verbundwerkstoffe für Luft-und Raumfahrttechnik. Um die Kunstseide Produktion voranzubringen und zu Fasern, die geringe Varianz zeigen in ihren materiellen Eigenschaften von Spin zu drehen nachgeben, entwickelten wir eine Nassverspinnen Protokoll, das die Expression von rekombinanten Spinnenseide Proteine ​​in Bakterien, Reinigung und Konzentration der Proteine ​​integriert , gefolgt von Faserextrusion und mechanische Nachbearbeitung Spin Behandlung. Dies ist das erste visuelle Darstellung, die eine Schritt-für-Schritt-Prozess zeigt sich zu drehen und zu analysieren, Kunstseide Fasern im Labormaßstab. Es liefert auch Informationen, um die Einführung der Variabilität zwischen den Fasern aus dem gleichen Spinnlösung versponnen zu minimieren. Zusammen werden diese Methoden treiben den Prozess der Kunstseide Produktion, was zu höherer Qualität Fasern, die natürliche Spinnenseide zu übertreffen.

Einleitung

Spinnenseide verfügt über hervorragende mechanische Eigenschaften, die heraus führt mehrere künstlichen Materialien, einschließlich hochfestem Stahl, Kevlar und Nylon. 1 Spinnen spinnen mindestens 6-7 unterschiedliche Fasertypen, die unterschiedliche mechanische Eigenschaften zeigen, die jeweils mit unterschiedlichen Mengen an Zugfestigkeit und Erweiterbarkeit ausgelegt um spezifische biologische Aufgaben zu erfüllen. 2 Forschung Wissenschaftler werden schnell verfolgt die Verwendung von Spinnenseide als Biomaterial nächsten Generation aufgrund ihrer hervorragenden mechanischen Eigenschaften, ihrer Biokompatibilität und ihre nicht-toxisch und gr....

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Protokoll

figure-protocol-1
Grafische Übersicht: Biomimicry des Spinnprozesses

Biomimicry der natürlichen Spinnenseide Produktion Weg:. Eine Route zu Kunstseide herzustellen Dieses Bild zeigt den großen Ampullendrüse aus dem goldenen Radnetzspinne, Nephila clavipes, und die Komponenten für Naturseide Produktion (weiße Schrift) genutzt. Die Heckbereich großen Mengen synthetisiert aus Seidenproteinen, die zur Ampulle, ein Speicherbereich für die Spinnlösung transportiert werden. Diese konzentrierte dope extrudiert wird dur....

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Diskussion

Synthetische Fasern, die aus dieser Methode versponnen werden mechanisch auf der gleichen Größenordnung im Vergleich zu den natürlichen Fasern. Durch die Verringerung der Menge an menschlichem Versagen durch Mechanisierung der Spooling-und Post-Spin Auslosung Prozesse, sind die experimentelle Variation zwischen den Proben kontrollierter und stark reduziert.

Unsere Methodik bietet die Möglichkeit, die mechanischen Eigenschaften der Fasern, die aus anderen rekombinanten Proteinen aus den cDNAs.......

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Offenlegungen

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der NSF RUI Grants MCB-0950372 und DMR-1105310 mit dem Titel "Molekulare Charakterisierung von Black Widow Spider Silks und mechanische Verhalten von Spider Silks Kleber", bzw. unterstützt.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Reagenz / Ausrüstung Firma Katalog-Nummer Kommentare
pBAD / TOPO Expression Kit ThioFusion Invitrogen K370-01
FastBreak Cell Lysis Reagent, 10x Promega V857C
Ni-NTA-Agarose Qiagen 30210 Inklusive Anleitung für Puffer
ProteoSilver Silver Stain Kit Sigma-Aldrich PROTSIL1-1KT
FreeZone Lyophilisierer Labconco 7960041 FreeZone 12plus
Hexafluorisopropanol (HFIP) Sigma-Aldrich 52512
Spritze Hamilton 7657-01 250 ul
Nadel Hamilton 7780-01 26s Gauge, Blunt Ende auswechselbarer Nadel
Spritzenpumpe Harvard Apparatus 702208 11Plus
Digitaler Messschieber Carrera CP5906 0-150 mm-Bereich
Edelstahlpinzette World Precision Instruments 501764 Mini Dumont # M5S
Motor Natur Mill 7090529 12VDC, 2 min-Geschwindigkeit
Linear Actuator Warner Electric 01-D024-0050-A06-LP-IP65 24VDC, 6-Zoll-Bereich
Seziermikroskop Leica Microsystems Leica MZ16
Digitales MikroskopOPE-Kamera Leica Microsystems DFC320 Software: Leica Application Suite v2.8.1
Vannas Schere World Precision Instruments 500260
Microtensometer Aurora Scientific 310C 5N Dual-Mode-System

Referenzen

  1. Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. The mechanical design of spider silks: from fibroin sequence to mechanical function. J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).
  2. Foelix, R. Biology of spiders. , Oxford University Press. New York. (1996).
  3. Vollrath, F., Knight, D. P.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

Rekombinante ProteinexpressionProteinreinigungNassspinnprotokollFaserextrusionNachziehvorgangmechanische Pr fungSDS PAGE AnalyseWestern Blot AnalyseRasterelektronenmikroskopie