Gezielte Analyse von viralen Proteins Nanopartikel HER2 + Tumoren Lieferung

Zusammenfassung

Dieser Artikel beschreibt die Verfahren für die optische Bildgebung Analyse der Tumor-Targeting-Nanopartikel, HerDox. Insbesondere wird eine detaillierte Verwendung der Multimode-Bildaufnahmevorrichtung zum Erfassen Tumor-Targeting und Bewertung Tumorpenetration beschrieben.

Zusammenfassung

Der HER2 + Tumor-Targeting-Nanopartikel, HerDox weist Tumor-und Tumor-Akkumulation bevorzugte Wachstum Ablation in einem Tiermodell der HER2 + Krebs. HerDox durch nichtkovalente Selbstorganisation eines Tumors Zielzelle Penetrationsprotein mit dem Chemotherapeutikum Doxorubicin ausgebildet ist, über eine kleine Nukleinsäure Linker. Eine Kombination von elektrophilen, Einlagerung und Oligomerisierung Interaktionen erleichtern self-assembly in runde 10-20 nm großen Partikeln. HerDox aufweist Stabilität im Blut sowie einer längeren Lagerung bei verschiedenen Temperaturen. Systemische Abgabe HerDox in tumortragenden Mäusen zur Tumor-Zelltod ohne feststellbare nachteilige Auswirkungen auf Nicht-Tumor-Gewebe, einschließlich des Herzens und der Leber (der unterziehen gekennzeichnet Schäden durch ungezielte Doxorubicin). HER2 Höhe erleichtert Targeting von Zellen, die den humanen epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor, damit Tumoren Anzeige erhöhten HER2 Ebenen größere Ansammlung von HerDox weisen im Vergleich zu Zellen, Expressionsingen unteren Ebenen, sowohl in vitro als auch in vivo. Fluoreszenzintensität Bildgebung mit in situ konfokalen und Spektralanalyse kombiniert hat uns erlaubt, in vivo Tumor-Targeting und Tumorzelle Eindringen von HerDox nach systemischer Lieferung überprüfen. Hier haben wir ausführlich unsere Methoden zur Beurteilung der Tumor-Targeting über Multimode-Bildgebung nach systemischer Lieferung.

Einleitung

Tumor-Targeting der Chemotherapie hat das Potenzial, Krebszellen zu niedrigeren Dosis im Vergleich zu beseitigen ungezielte Drogen, weil mehrere gelieferte Therapie am Bestimmungsort anstatt zu verteilen, um Nicht-Tumorgewebe ansammeln können. Da dieser Situation verdünnen sich die Wirksamkeit des Arzneimittels und somit höhere Dosen wirksam zu sein, hat Tumor-Targeting sowohl therapeutische als auch sicherheitstechnische Vorteile gegenüber herkömmlichen nicht-zielgerichtete Behandlung.

Targeting Chemotherapie durch Verkapselung in selbstorganisierte Nanopartikel ermöglicht das Medikament zu bleiben chemisch im Gegensatz zu Medikamenten, ....

Protokoll

1. Systemische Lieferung In vivo

1. Mischen genug mit steriler Kochsalzlösung HerDox bis 0,2 ml einer 0,004 mg / kg Dosis HerDox pro Injektion eine 6-8 Wochen alten nu / nu-Maus, die subkutan bilateral Flanke Xenograft gleichzusetzen.
2. Vorsichtig ziehen die HerDox Mischung in eine 3/10 cc Insulinspritze mit einer 29G Nadel ausgestattet Blasenbildung vermeiden.
3. 0,5-1 L / min, Isoflurankonzentration: 3-4% (oder weniger) Anästhesie wird durch kurze Exposition Isofluran in einer Induktion Kammer mit einem Gas Spülsystem (Oxygen Flussraten ausgestattet induziert.
4. Injizieren Sie die gesamte Mischung in die Schwanzvene einer nar....

Ergebnisse

Abbildung 1 zeigt die in vivo optische Scanner-Prototyp, der für die Zwecke der Bildaufnahme unter mehreren Modalitäten, einschließlich Fluoreszenz-Intensität, spektrale, Lebensdauer, 2-Photonen-, intra-vital konfokalen und Biolumineszenz-Bildgebung gebaut wurde. Darüber hinaus liefert die gekühlte hochempfindliche Kamera und Hochleistungslaser Linien in diesem System eingebaut höheren Kontrast Fluoreszenzbilder Vergleich zu kommerziellen optischen Abbildungssystemen ^11, insbesondere.......

Diskussion

Dox Fluoreszenz in vivo nachweisbar sein mit der Multimode-Imager, wenn Tumoren subkutane sind. Allerdings ist die therapeutisch wirksame Dosis von HerDox (0,004 mg / kg) unterhalb der Nachweisgrenze nach einer Einzeldosis. Im Gegensatz dazu, nach 7 tägliche Injektionen (1x/day für 7 Tage), ist der Tumor Akkumulation und Retention der Partikel ausreicht, um die Visualisierung von Dox Fluoreszenz ermöglichen.

Es ist wichtig bei der Arbeit mit Dox oder einem anderen Fluorophor für

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Konfokales Fluoreszenz-Laser-Scanning-Mikroskop	Leica	SPE
In Vivo Optical Imager	Spectral Molecular Imaging	Multimode In Vivo Optischer Imager
Doxorubicin-HCl	Sigma-Aldrich	D4035
Nackte (NU/NU) Maus, weiblich, 6-8 Wochen	Charles River	Stammcode 088
MDA-MB-435 humane HER2+-Tumorzellen	NCI-Frederick Cancer DCTD Tumor-/Zelllinien-Repository	0507292
3/10 cc Insulinspritze U-100 mit 29G x 1/2" Ultra-FineIV permanent befestigter Nadel	BD	309301
Delta T-Kammer	Bioptechs	04200417B