Summary
मूल polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन आरएनए प्रोटीन बातचीत का विश्लेषण करने के लिए एक मौलिक उपकरण है। पारंपरिक रूप से अधिकांश प्रयोगों ने ऊर्ध्वाधर जैल का उपयोग किया है। हालांकि, क्षैतिज जैल कई फायदे प्रदान करते हैं, जैसे वैद्युतकणसंचलन के दौरान परिसरों की निगरानी करने का अवसर। हम क्षैतिज देशी जेल वैद्युतकणसंचलन को बनाने और उसका उपयोग करने के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।
Abstract
मूल polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन आण्विक जीव विज्ञान का एक मूल उपकरण है जिसका उपयोग आरएनए-प्रोटीन बातचीत के जैवरासायनिक विश्लेषण के लिए बड़े पैमाने पर किया गया है। ये बातचीत पारंपरिक रूप से polyacrylamide जैल के साथ विश्लेषण किया गया है जो दो गिलास प्लेटों और नमूनों के बीच उत्पन्न होते हैं जो कि ऊर्ध्वाधर विद्युतीय हैं। हालांकि, ट्रे में डाली polyacrylamide जैल और इलेक्ट्रोफोरेड क्षैतिज रूप से कई फायदे प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, फ्लोरोसेंट आरएनए सबस्ट्रेट्स और विशिष्ट प्रोटीन के बीच परिसरों का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किए जाने वाले क्षैतिज जैल वैद्युतकणसंचलन की प्रगति के रूप में कई बार इमेज किए जा सकते हैं। यह प्रयोग के दौरान कई बिंदुओं पर आरएनए-प्रोटीन परिसरों की निगरानी करने का अनूठा अवसर प्रदान करता है। इसके अलावा, क्षैतिज जेल वैद्युतकणसंचलन समानांतर में कई नमूनों का विश्लेषण करना संभव बनाता है। यह बहुत ही समय के पाठ्यक्रम प्रयोगों की सुविधा प्रदान कर सकता है साथ ही विभिन्न घटकों और शर्तों की तुलना करने के लिए कई प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण कर सकता है। यहाँ हम जनसंपर्कआरएनए-प्रोटीन बातचीत का विश्लेषण करने के लिए क्षैतिज देशी जेल वैद्युतकणसंचिकरण पैदा करने और उनका उपयोग करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल पर स्थित है।
Introduction
इलेक्ट्रोफोरेरिक गतिशीलता पाली एशेज (ईएमएसए) ने विशिष्ट प्रोटीन-न्यूक्लिक एसिड इंटरैक्शन 1 , 2 , 3 का विश्लेषण करने के लिए एक अमूल्य जैव रासायनिक उपकरण साबित किया है। इन assays प्रोटीन के बाध्यकारी संबंध के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान कर सकते हैं आरएनए या डीएनए 3 , न्यूक्लिक एसिड प्रोटीन परिसरों 1 के घटक stoichiometry 1 और सब्सट्रेट प्रतियोगिता प्रयोगों 1 के माध्यम से शाही सेना बाध्यकारी प्रोटीन के बाध्यकारी विशिष्टता के बारे में महत्वपूर्ण नई अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं।
इन assays के लिए पारंपरिक प्रयोगात्मक सेटअप एक radiolabeled आरएनए सब्सट्रेट के साथ शुद्ध प्रोटीन मिश्रण होते हैं। परिणामस्वरूप परिसरों का विश्लेषण तब किया जाता है जब गैर-निषेधात्मक (देशी) polyacrylamide जैल दो गिलास प्लेटों के बीच डाला जाता है, जिसके बाद नमूना वैद्युतकणसंचलन द्वारा ऊर्ध्वाधर तंत्र 3। हालांकि इस दृष्टिकोण को बायोकैमिकल तंत्र में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया गया है, जो कि न्यूक्लिक एसिड को प्रोटीन की बाध्यता से उत्पन्न होता है, इसमें कई सीमाएं भी होती हैं। उदाहरण के लिए, यह मूल रणनीति अपेक्षाकृत कम थ्रूपुट है और समानांतर में कई बाध्यकारी प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने की आवश्यकता वाले अनुप्रयोगों के लिए इसे आसानी से अनुकूल नहीं है। इसके अलावा, पारंपरिक ऊर्ध्वाधर तंत्र के साथ, यह वैद्युतकणसंचलन 3 , 4 के दौरान कई बार कॉम्पलेक्स की संभावित निगरानी करने के लिए चुनौतीपूर्ण है।
यहां हम ईएमएसए परख के अनुकूलन को प्रस्तुत करते हैं जो एक फ्लैटबेड उपकरण, क्षैतिज वैद्युतकणसंचलन और फ्लोरोसेंट लेबल वाले आरएनए सबस्ट्रेट्स 4 , 5 , 6 , 7 में डाली देशी पॉलीकेराइलाइड जैल का उपयोग करते हैं। मूल अवस्था में इन अपेक्षाकृत सरल संशोधनों का समावेशटीजी कुछ शक्तिशाली फायदे प्रदान करता है विशेष रूप से, क्षैतिज flatbed प्रारूप आसानी से एक साथ दर्जनों नमूने का विश्लेषण करने के लिए खुद को उधार देता है 4 एक साथ। इसके अलावा, कुछ आरएनए-प्रोटीन परिसरों के लिए, जैसे कि बिकाउडाल-सी प्रोटीन और उसके आरएनए सब्सट्रेट वैद्युतकणसंचलन के बीच क्षैतिज जेल में अलग-अलग आरएनए-प्रोटीन परिसरों को हल करने की क्षमता बढ़ जाती है और ये अनबाउंड आरएनए सब्सट्रेट से भेदभाव करती है।
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Protocol
1. क्षैतिज मूल निवासी Polyacrylamide जेल 4 की तैयारी
- आवश्यक सामग्री तैयार करना
- क्षैतिज जेल उपकरण के लिए, एक 27 सेमी x 21 सेमी ट्रे के साथ एक जेल बॉक्स (37 सेमी x 24 सेमी) का उपयोग करें और दो 24-अच्छी तरह से कॉम्ब्स के लिए क्षमता। यह सेटअप कुल मिलाकर 48 नमूने प्रदान करता है जिन्हें एक साथ विश्लेषण किया जा सकता है।
- निम्नलिखित अभिकर्मकों को तैयार करें: 40% ऐक्रेलमाइड-बीआईएस 1 9: 1, 5x टीबीई (ट्रिस-बोरेट-ईडीटीए पीएच 8.0), टेमड और 10% एपीएस (अमोनियम पर्सुल्फेट)।
- 10% मूल एसीयलामाइड जेल का उत्पादन
- 500 मिलीलीटर फ्लास्क में, 80 एमएल का 5x टीबीई, 100 एमएल का 40% एरीलामाइड और 400 एमएल की अंतिम मात्रा में पानी जोड़ें।
- 4 एमएल की 10% एपीएस और TEMED के 400 μL जोड़ें। अच्छी तरह मिलाएं।
- मिश्रण को क्षैतिज कास्टिंग ट्रे में डालें और 30 मिनट के लिए जेल को पोलीमराइज करें। जेल लगभग 2 सेमी मोटा होगा
नोट: जील्स गति के लिए एक धूआं हुड में डाली जा सकती हैंअप पोलीमराइजेशन पोलीमराइजेशन के बाद, तरल की एक पतली परत जेल के ऊपर रहेगी। - तरल बंद डालो और बफर चलाने के साथ कुल्ला। कंघी को सावधानी से निकालें और सिरिंज का उपयोग कर चलने वाले बफर के साथ कुएं कुल्ला।
- चल बफर की तैयारी
- जेल बॉक्स के लिए 2 एल 1x टीबीई चलने वाला बफर तैयार करें। 400 मिलीलीटर 5XTBE को 1600 एमएल के साथ पतला करें और मिश्रण करें। शांत करने के लिए ठंडे कमरे में 1x टीबीई बफर रखें।
- जेल चलाने से पहले
- जेल बॉक्स में 2 एल का ठंडा चलने वाला बफर जोड़ें और जेल डालें।
- एक ठंडी कमरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए 120 वी पर जेल को प्री-रन करें। इस समय के दौरान, बाध्यकारी प्रतिक्रिया तैयार करें।
2. बाइंडिंग रिएक्शन 8
- 2.1। निम्नलिखित प्रतिक्रिया घटक तैयार करें।
20 मिमी डीटीटी
10 मिमी बीएसए
10 मिमी खमीर टीआरएनए
5 एक्स बाध्यकारी बफर (50 मिमी एचईपीईएस पीएच 8.0, 5 एमएम ईडीटीए, 250 एमएम केएलएल, 0.2% टीवीन -20)
100 nm fluorescein लेबल आरएनए वाणिज्यिक रूप से खरीदा
केंद्रित बिकाउडाल-सी प्रोटीन
डीईपीसी-एच 2 ओ में 50% ग्लिसरॉल
डीईपीसी -एच एच 2 ओ में इलाज - एक RNase मुक्त microcentrifuge ट्यूब में बाध्यकारी प्रतिक्रिया घटकों को इकट्ठा।
- ट्यूब के लिए, 5 एमएल 10 एमएम बीएसए, 5 एमएल 20 एमएम डीटीटी, 5 एमएल 10 मिमी खमीर टीआरएनए, 10 एमएल 5x बाइंडिंग बफर जोड़ें।
- 50 μL में 250 एनएम के अंतिम एकाग्रता में प्रोटीन जोड़ें। 45 μL की अंतिम मात्रा में पानी जोड़ें।
- फ्लोरोसेंटली लेबल वाले आरएनए सब्सट्रेट के 5 μL जोड़ें 32-न्यूक्लियोटाइड सब्सट्रेट लेबल वाले वाणिज्यिक रूप से खरीदे गए 3 'फ्लुरेससेन का प्रयोग करें।
- मिक्स और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए अंधेरे में सेते हैं।
3. मूल क्षैतिज पोलीसिलामाइड जेल पर नमूने का विश्लेषण
- प्रत्येक प्रतिक्रिया के लिए, 50% ग्लिसरॉल के 15 μL जोड़ें और धीरे मिश्रण करें।
- carefuLly जेल को प्रत्येक प्रतिक्रिया के 30 μL जोड़ें। जेल की मोटाई और कुओं के आकार के आधार पर एक अच्छी तरह से भरी हुई नमूने की मात्रा भिन्न होती है। हमने लगभग 15 μL के रूप में वॉल्यूम भारित किया है और 45 μL को 24 अच्छी तरह से कंबल के साथ बनाए गए जैल के एक एकल कुंड में लोड किया है और 2 सेमी की मोटाई में डाला है।
- शक्ति पर जेल तंत्र स्विच करने के लिए बिजली की आपूर्ति को जोड़ने और वोल्टेज समायोजित करने के बाद। 4 डिग्री सेल्सियस पर 120 वी में जेल भागो।
नोट: क्षैतिज जेल तंत्र के लिए, यह लगभग 5 वी / सेमी होने वाला होता है ऊर्ध्वाधर जेल तंत्र के लिए, यह 16 वी / सेमी है- फ्लोरोसेंटली लेबल वाले आरएनए के हानिकारक या विरंजन को रोकने के लिए, अंधेरे में वैद्युतकणसंचलन का संचालन करें।
- आरएनए-प्रोटीन परिसर की विशेषताओं के विश्लेषण के आधार पर बार-बार इलैक्ट्रोफोरेसिस का मूल्यांकन किया जा रहा है।
नोट: क्षैतिज ईएमएसए विश्लेषण का एक बड़ा लाभ यह है कि वैद्युतकणसंचलन रोका जा सकता है, जेल आईजीज किया जाता है और फिर जीईएल को तंत्र में वापस रखा जा सकता है और अधिक समय के लिए वैद्युतकणसंचलन जारी रखा जा सकता है।
4. जेल इमेजिंग
- पता लगाने और इमेजिंग फ्लोरोसेंट सबस्ट्रेट्स के लिए डिज़ाइन किए गए किसी भी उपकरण के साथ विश्लेषण करना।
- इमेजर पर जेल रखें
- इमेजर सेटिंग समायोजित करें फ्लोरोसिसिन-लेबल वाले आरएनए लिगैंड्स के लिए, निम्नलिखित सेटिंग्स का उपयोग करें: एफएएम (तरंगदैर्ध्य 473 एनएम), 750 फोटोमल्टीप्लेयर वोल्टेज (पीएमटी), 100 माइक्रोन पिक्सेल आकार।
- छवि को कैद करने के लिए जेल स्कैन करें
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Representative Results
क्षैतिज देशी जेल वैद्युतकणसंचलन की शक्ति और बहुमुखी प्रतिभा का प्रदर्शन करने के लिए हमने एक बीसीसी 1 बाइंडिंग साइट युक्त एक फ्लोरोसेंटली लेबल वाले आरएनए को Xenopus Bicaudal-C (Bicc1) प्रोटीन के बंधन का विश्लेषण किया है। बीसीसी 1 प्रोटीन पशु विकास 9 , 10 , 11 , 12 के मातृ चरण के दौरान सेल भाग्य के फैसले को नियंत्रित करने के लिए एमआरएनए-विशिष्ट अनुवादक दमनकारों के रूप में कार्य करते हैं , साथ ही 13 , 14 के वयस्कों में विशिष्ट अंगों के कार्य भी करते हैं। Cripto -1 के 3'UTR mRNA 8, 12 से एक 32-न्यूक्लियोटाइड क्षेत्र: Xenopus में हमारा काम एक Bicc1 प्रोटीन 8 के लिए पहले बाध्यकारी साइट की पहचान की। इस बाध्यकारी साइट को तकनीकों के संयोजन से परिभाषित किया गया था: RNase की रक्षा करनाआयन और पादप्रकाशित assays, विवो बाध्यकारी प्रयोगों और इन विट्रो EMSA assays 8 में ।
शुइ Xenopus Bicc1 प्रोटीन फ्लोरोसेंटली लेबल 32 न्यूक्लियोटाइड आरएनए के साथ मिश्रित था; क्रिप्टो-1 एमआरएनए 8 से बीसीसी 1 बाइंडिंग साइट एक अलग प्रतिक्रिया में बीआईसीसी 1 प्रोटीन को साइक्लिन बी 1 एमआरएनए के 3'यूटीआर से प्राप्त फ्लोरोसेंटली लेबल वाले 32 न्यूक्लियोटाइड आरएनए के साथ मिश्रित किया गया था। Bicc1 cyclin बी 1 एमआरएनए 8 , 12 से बाँध नहीं करता है और यह आरएनए नकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है। प्रत्येक प्रतिक्रिया का आधा एक ऊर्ध्वाधर देशी polyacrylamide जेल ( चित्रा 1 ए ) पर विश्लेषण किया गया था जबकि अन्य भाग क्षैतिज देशी जेल ( चित्रा 1 बी ) का उपयोग कर समानांतर में विश्लेषण किया गया था। यह किसी भी विधि का उपयोग करके स्पष्ट रूप से स्पष्ट है कि Bicc1 आरएनए क्रिप्टो-1 आरएनए से जुड़ा हुआ है और एक विशिष्ट जटिल एNd यह cyclin बी 1 नकारात्मक नियंत्रण आरएनए बाँध नहीं करता है हालांकि, क्षैतिज जेल के साथ विश्लेषण किए जाने पर, Bicc1-Cripto-1 परिसरों काफी अधिक अलग होते हैं, दोनों अपने पता लगाने में मदद करते हैं और अनबाउंड आरएनए से प्रोटीन-आरएनए परिसरों के भेदभाव को अनुमति देते हैं। इमेजिंग के बाद, जेल वापस जेल तंत्र में रखा गया था और एक अतिरिक्त तीन और एक आधे घंटे के लिए electrophoresed। जेल को पुन: इमेजिंग करने के बाद परिसरों ने आगे स्थानांतरित कर दिया था और अभी भी उन्हें आसानी से पता चला, उनकी स्थिरता ( चित्रा -1 सी ) दर्शाती है। शुरुआती इमेजिंग के बाद वैद्युतकणसंचलन और विश्लेषण जारी रखने की यह क्षमता चुनौतीपूर्ण होगी, यदि असंभव नहीं है, तो ऊर्ध्वाधर जेल प्रारूप के साथ।
चित्रा 1: Bicc1 को Cripto1 आरएनए के बंधन का विश्लेषण करने के लिए ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज मूल जैल की तुलना। द्विसीसी 1 बाइंडिंग प्रयोग 32-न्यूक्लियोटाइड फ्लोरोसेंट साइक्लिन बी 1 आरएनए नकारात्मक नियंत्रण या फ्लोरोसेंट 32-न्यूक्लियोटाइड क्रिप्टो 1 आरएनए पॉजिटिव कंट्रोल के साथ किया गया। प्रत्येक प्रतिक्रिया में या तो 0 एनएम या 250 एनएम सुमो-बीकसी 1 एन-टर्मिनल में या तो ( ए ) ऊर्ध्वाधर पॉलीक्लाइलाइड देशी जेल पर 30 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस या क्षैतिज polyacrylamide देशी जेल में डुप्लिकेट नमूनों के लिए 30 मिनट के लिए विश्लेषण किया गया। ( बी ) 2 घंटे में 120 डिग्री सेल्सियस 4 डिग्री सेल्सियस या ( सी ) 5.5 एच पर 120 डिग्री सेल्सियस 4 डिग्री सेल्सियस इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
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Discussion
मूल polyacrylamide जैल प्रोटीन आरएनए बातचीत की जांच के लिए एक अमूल्य उपकरण हैं और परंपरागत रूप से इन जैल खड़ी 2 , 3 के electrophoresed हैं। हमने प्रोटोकॉल के एक संशोधन का उपयोग किया है, जो देशी पॉलीएक्लालाईमाइड जैल बनाते हैं और क्षैतिज रूप से 1 , 4 , 6 , 7 , 15 के इलेक्ट्रोफोरेस हैं। फ्लोरोसेंटली लेबल वाले आरएनए सबस्ट्रेट्स के साथ संयोजन में प्रयुक्त ये परिवर्तन प्रोटीन-आरएनए बाइंडिंग इंटरैक्शन के जैवरासायनिक विश्लेषण के लिए कई फायदे प्रदान करते हैं। इन फायदों में निम्नलिखित शामिल हैं: बफर के मिश्रण को एक ऊर्ध्वाधर उपकरण की तुलना में सरलीकृत किया जाता है, जिसके लिए बफर को निम्न कक्ष से ऊपरी, क्षैतिज जैल को स्थानांतरित करने के लिए बड़े कुओं से उत्पन्न किया जा सकता है जो लार् के विश्लेषण के लिए एक अधिक क्षमता प्रदान करता हैगेर के नमूने, क्षैतिज जैल पर वैद्युतकणसंचलन अक्सर ऊर्ध्वाधर जैल की तुलना में आरएनए-प्रोटीन परिसरों के बेहतर समाधान प्रदान करते हैं, और क्षैतिज जेल वैद्युतकणसंचलन विश्लेषण के दौरान कई बार बिंदुओं पर छवि प्रयोग करने की क्षमता प्रदान करता है।
एक अन्य प्रमुख लाभ यह है कि क्षैतिज प्रारूप स्वयं बड़ी मात्रा में कुओं के साथ जैल बनाने के लिए उधार देता है जो समानांतर 1 में कई नमूने का विश्लेषण करने की क्षमता प्रदान करता है। आरएनए-प्रोटीन इंटरैक्शन का विश्लेषण करने के लिए यह सुविधा उनके जैव रासायनिक उपकरण के रूप में काफी विस्तार करती है। उदाहरण के लिए, क्षमता से अधिक नमूनों का विश्लेषण करने के लिए प्रतियोगिता प्रयोगों 15 के उपयोग के माध्यम प्रोटीन शाही सेना जटिल गठन की मात्रात्मक मानकों की जांच की सुविधा, विश्लेषण 15 के साथ ही बाध्यकारी जटिल घटकों 15 के stoichiometry परिभाषित करने के लिए तैयार किया गया है प्रयोगों बंद k। इसके अलावा, एक का उपयोग करेंफ्लोरोसेंट आरएनए सबस्ट्रेट्स एक एकल प्रतिक्रिया से प्रतिदीप्ति ध्रुवीकरण बाध्यकारी assays के रूप में कई विश्लेषण करने के लिए संभव बनाता है और दोनों मात्रात्मक और गुणात्मक बाध्यकारी डेटा 5 , 15 प्राप्त करते हैं ।
क्षैतिज जेल सेटअप से इष्टतम परिणाम प्राप्त करने के लिए, इमेजिंग के लिए परिसरों की गुणवत्ता में सुधार के लिए कई मापदंडों को समायोजित किया जा सकता है। इन में जेल का एक्रेलमाइड प्रतिशत बदलना शामिल है ताकि मुक्त आरएनए से प्रोटीन-आरएनए परिसरों को अलग करने और बढ़ाने के लिए यह आसान हो सके। हालांकि, आकार के कारण कम प्रतिशत एसीयलाइड जैल को संभालना मुश्किल हो सकता है। हम उन जैल का उपयोग करना सबसे आसान पाते हैं जिनके पास 7.5% या उससे अधिक का एसीयलामाइड एकाग्रता है। इसके अलावा, यदि आवश्यक हो तो प्रोटीन-आरएनए परिसरों की स्थिरता में सुधार के लिए वैद्युतकणसंचलन की स्थिति को बदला जा सकता है; वैद्युतकणसंचलन वोल्टेज समायोजन, कमरे के तापमान पर जेल चलने inste4 डिग्री सेल्सियस का विज्ञापन और पूर्व-रन की स्थिति का समायोजन
कई फायदे के बावजूद क्षैतिज देशी जेल वैद्युतकणसंचलन assays के कुछ सीमाएं भी हैं। उदाहरण के लिए, एक फ्लोरोसेंट आरएनए सबस्ट्रेट्स का उपयोग करके इसकी उपयोगिता को अधिकतम किया गया है। चुना फ्लोरोफोरे पर निर्भर करता है और आरएनए के आकार, ऐसे substrates प्राप्त महंगा हो सकता है। इसके अतिरिक्त, क्षैतिज जैल आमतौर पर ऊर्ध्वाधर जैल से अधिक बड़े होते हैं और इसलिए बहुआयामी सामग्री जैसे कि पॉलीएक्लीमाइड और डीईपीसी-इलाज समाधान की आवश्यकता होती है।
क्षैतिज मूल जेल वैद्युतकणसंचलन में आणविक स्क्रीन के लिए एक सत्यापन उपकरण के रूप में इस्तेमाल होने की संभावना है जो कि यौगिकों की पहचान करना चाहते हैं जो नैदानिक रूप से प्रासंगिक आरएनए-प्रोटीन बातचीत 16 को लक्षित करते हैं। इस तरह की स्क्रीन आमतौर पर आगे के अध्ययन के लिए प्रासंगिक यौगिकों की पहचान करने के लिए समाधान जैव रासायनिक assays का उपयोग करते हैं। ऊर्ध्वाधर स्वरूप प्रावधान की तुलना में क्षैतिज प्रारूप की उच्च क्षमतासंभावित उम्मीदवारों के माध्यमिक सत्यापन के लिए एक उपकरण के रूप में देशी जेल वैद्युतकणसंचलन को लागू करने का अवसर।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
हम आंकड़े तैयार करने के लिए लौरा वेंडरप्लेग का धन्यवाद करते हैं। शीट प्रयोगशाला में कार्य एनएसएफ अनुदान 1050395 और एनआईएच अनुदान (R21HD076828) द्वारा समर्थित है। राइडर प्रयोगशाला में कार्य एनआईएच अनुदान R01GM117237 और R01GM117008 द्वारा समर्थित है। मेगन डौडल, नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ मेडिकल मेडिकल साइंसेज ऑफ नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (टी 32 जीएम 80034 9) के माध्यम से विस्कॉन्सिन-मैडिसन ग्रेजुएट स्कूल और जैव प्रौद्योगिकी प्रशिक्षण कार्यक्रम के माध्यम से एक विज्ञान आधारित जीआरएस उन्नत अवसर फैलोशिप द्वारा समर्थित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Horizontal Gel Box | OWL | N/A | Product no longer made. Similar gel boxes can be found at Thermo Scientific, A-series gel boxes. Catalog Number: A2-BP |
| 24-well large large horizontal gel electrophoresis combs | OWL | N/A | Product no longer made. Similar gel boxes can be found at Thermo Scientific, A-series gel box combs. Catalog Number: A2-24C |
| Powerpac 300 | Bio-Rad | 1655050 | |
| Mini-Protean II Electrophoresis Cell | Bio-Rad | 165-2940 | |
| InstaPAGE-19 40% 19:1 Acrylamide/Bis | IBI | IB70015 | |
| TEMED | IBI | IB70120 | |
| APS | IBI | IB70080 | |
| Yeast tRNAs | Ambion | AM7119 | |
| Fluorescein labeled RNA | IDT | N/A | Order can be made custom to length and desired sequence |
| EDTA tetrasodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | E5391-1KG | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H4034-500G | |
| Tris Base Ultrapure | US Biological | T8600 | |
| Boric Acid | Fisher Scientific | BP168-500 | |
| Potassium Chloride | Fisher Scientific | BP366-1 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-500 | |
| DEPC | Sigma-Aldrich | 1609-47-8 | |
| Dithiothreitol (DTT) | Sigma-Aldrich | 3483 12 3 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | 9048-46-8 |
References
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