Tief dermalen Injektion als ein Modell von Candida Albicans Infektion der Haut für histologische Analysen

Zusammenfassung

Hier beschreiben wir ein Protokoll, histologische und molekulare Analyse von Hautproben nach Candida Albicans intradermale Injektion ermöglicht. Dieses Protokoll hält die strukturelle Integrität der Haut und erlaubt die Lokalisierung von Gewebe-Resident oder neu rekrutierten Immunzellen sowie die Verteilung der Erreger.

Zusammenfassung

Die Haut ist ein extrem erweiterten Organ des Körpers, und durch diese große Oberfläche ist es kontinuierlich Mikroorganismen ausgesetzt. Hautschäden kann leicht zu Infektionen in der Dermis führen, was wiederum bei der Verbreitung von Krankheitserregern in die Blutbahn führen kann. Verstehen, wie das Immunsystem bekämpft Infektionen im sehr frühen Stadium und wie der Host die Erreger beseitigen kann, ist ein wichtiger Schritt um die Basis für zukünftige therapeutische Interventionen gesetzt. Hier beschreiben wir ein Modell der Candida Albicans -Infektion, die die Prozesse zu, die früh während einer Infektion visualisieren, auch wenn der Erreger ist die epitheliale Barriere sowie die Immunantwort ausgelöst durch die C. Albicans vergangen auftreten Invasion. Diese Infektionsmodell verwendet, histologische Analysen durchzuführen, die die Immunzellen zu zeigen, die die Haut sowie die Präsenz und die Lokalisation des Erregers zu infiltrieren. Proben gesammelt, nachdem die Infektion für die RNA-Extraktion verarbeitet werden kann.

Einleitung

Der menschliche Körper ist mit einer extrem hohen Anzahl von Mikroorganismen bedeckt. Die Hautoberfläche ist der Lebensraum von fast 1 Million Bakterien pro Quadratzentimeter¹. Diese Zahl spiegelt jedoch nicht die ganze Vielfalt der Mikroorganismen, die die Haut kolonisiert. Neben Bakterien ist der menschliche Körper kolonisiert durch viele Pilzarten, darunter C. Albicans, die in der Lage, sowohl auf die Schleimhaut und die Haut Ebene²überleben.

Der Anteil der Menschen mit der Diagnose mit Pilzinfektionen sind in den letzten Jahren enorm gestiegen. Dies ist vor allem aufgrund der höhe....

Protokoll

Die Verfahren wurden alle unter den institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) genehmigt und unter der Aufsicht des Department of Animal Resources bei Kindern betrieben's Hospital (Bogen) am Krankenhaus Boston der Kinder oder wurden von den italienischen genehmigt Ministerium für Gesundheit und unter institutionellen Animal Care Committee der Universität Mailand-Bicocca durchgeführt.

1. C. Albicans Vorbereitung

1. Kultur C. Albicans, Stamm CAF3-1¹³, in Röhrchen mit reichen Medium (Hefe-Extrakt Pepton Traubenzucker (YEPD), 1 % (w/V) Hefeextrakt, 2 % (w/V) von Bacto Pepton, 2 % ....

Ergebnisse

Durch die Injektion des Krankheitserregers direkt in die Tiefe Derma bleibt die strukturelle Morphologie des Gewebes intakt (Abbildung 1A).

Die Aufrechterhaltung der strukturellen Integrität der Haut ermöglicht die Erkennung von Immunzellen und ihre Lokalisation am Ort der Infektion. Die höhere Vergrößerung dargestellt in Abbildung 1 b zeigt, dass der Abszess ist vor al.......

Diskussion

Hier haben wir eine Methode von C. Albicans -Infektion des entzündlichen Prozesses zu studieren, die auf Pilz Eingang in die Tiefe Derma initiiert wird.

Obwohl Haut Abszessbildung ein relativ seltenes Ereignis bei C. Albicans Infektion^{15 ist}, Injektion des Pilzes direkt in die Tiefe Derma ermöglicht es, nicht nur das Studium der Pilz-driven Abszessbildung, sondern auch die Analyse der spezifischen Immunantwort Zellen, die teilnehmen, um Pilz Ausbreitun.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Reagents
PBS	Euroclone	ECB4053L	warm in 37 & Grad; C-Bad vor Gebrauch
H-OCT	Compound Histo-Line Laboratories	R0030
Gill's Hematoxilyn	Histo-Line Laboratories	09-178-2
Eosin Y-Lösung, alkoholische	Histo-Line Laboratories	09-209-05
Ethanol absolute	Scharlau	ET00232500
Citro-HISTOCLEAR	Histo-Line Laboratories	R0050
Eukitt, Eindeckmedium	bio-optica
Aceton	sigma-aldrich	179124
PAS Färbesystem	sigma-aldrich	395B-1KT
Bacto Pepton	BD	211677
Bacto Hefeextrakt	BD	212750
D(+)-Glucose wasserfrei für die Molekularbiologie	Applichem PanReac	50-99-7
Uridin	Merck Millipore	8451
HEPES	Applichem PanReac	A1070,0500
Safe-Lock Röhrchen 2 mL	eppendorf	30121597
TRIzol Reagent	Life Technologies	15596018	Giftig, ätzend und erbgutverändernd. Verwenden Sie alle erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen
Rneasy Mini Kit	QIAGEN	74104
flüssiger Stickstoff			Tragen Sie Augenschutz
Instrument
Coulter Counter-Particle Count	Beckman Coulter
Centrifuge 5415 R	eppendorf
MC 3000 Mikrotom-Kryostat	histo-line laboratories
TissueLiser	QIAGEN
strong>Materials0,3
ml Insulinspritze mit einer 30G x 8mm Nadel	BD	324826
Chirurgische Zange
Chirurgische Schere
Basisform	Einweg-histo-line Laboratorien	2781
Positiv geladene Biomikroskop-Objektträger	bio-optica	09-2000
Deckgläser 24 x 50 mm	thermo scientific	11911998

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