Dieses Protokoll bietet eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Analyse der atherosklerotischen Belastung bei Mäusen. Ermittler können dieses Protokoll verwenden, um die Häufigkeit, den Ort und die Größe von atherosklerotischen Läsionen bei verschiedenen Tieren zu vergleichen.
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Methodenartikel
Bildgebung und Analyse von ölrot-o-gefärbten ganzen Aortenläsionen in einem Aneurysma-Hyperlipidämie-Mausmodell
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Apolipoprotein E (Apoe)- oder Low Density Lipoprotein Receptor (Ldlr)-defiziente hyperlipidämische Mäuse sind die beiden am häufigsten verwendeten Modelle für die Atheroskleroseforschung. Sie werden verwendet, um den Einfluss verschiedener genetischer Faktoren und verschiedener Zelltypen auf die atherosklerotische Läsionsbildung zu untersuchen und die Entwicklung neuer Therapien zu testen. Isolierung, Exzision der gesamten Aorta und Quantifizierung von Oil Red O-gefärbten atherosklerotischen Läsionen sind grundlegende morphometrische Methoden zur Bewertung der atherosklerotischen Belastung. Das Ziel dieses Protokolls ist es, eine optimierte, schrittweise chirurgische Methode zu beschreiben, um atherosklerotische Läsionen in Mausaorten mit Oil Red O zu sezieren, zu fixieren, zu isolieren, zu färben, abzubilden und zu analysieren. Da sich atherosklerotische Läsionen überall im gesamten Aortenbaum bilden können, hat diese gesamte Aorta-Öl-Rot-O-Färbemethode den Vorteil, dass lipidbeladene Plaques in der gesamten Aorta und allen Zweigen in einer einzigen Maus bewertet werden. Zusätzlich zur Öl-Rot-O-Färbung können frisch isolierte ganze Aorten für eine Vielzahl von In-vitro- und In-vivo-Experimenten und Zellisolierungen verwendet werden.
Einleitung
Koronare Herzkrankheit, eine der Haupttodesursachen in den USA, wird in der Regel durch Atherosklerose verursacht, ein Prozess, der zur Bildung von Plaque in den Arterienwänden führt1. Hyperlipidämie-anfällige Apoe- und Ldlr-defiziente Mäuse sind von zentraler Bedeutung für die Untersuchung von Atherosklerose und ihren Komplikationen und die Entwicklung von Therapien2,3,4,5. Die Quantifizierung atherosklerotischer Läsionen aus einer En-face-Aorta ist eine wichtige Endpunktanalyse zur Bewertung der Au....
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Protokoll
mT/mG (Lagernummer 007676) und Apoe-/- (Lagernummer 002052) Mäuse wurden vom Jackson Laboratory gekauft. Myh11-CreERT2-Mäuse waren ein Geschenk von Stefan Offermanns (erhältlich im Jackson Laboratory als Lagernummer 019079). Tgfbr2fl/fl-Mäuse wurden von Harold L. Moses (Vanderbilt University) gewonnen. Alle Tierverfahren wurden unter Verwendung von Protokollen durchgeführt, die vom Yale University Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt wurden.
1. Mäuse
- Produzieren Sie MYH11-CreERT2;mT/mGf/f; Apoe-/- und M....
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Ergebnisse
In diesem Protokoll wurden atherosklerotische Läsionen in TGFβR2iSMC-Apoe-Mäusen nach 4 Monaten mit einer HCHF-Diät analysiert7. Neben einer ausgedehnten Atherosklerose entwickelten diese Mäuse, wie bereits berichtet, sowohl thorakale als auch abdominale Aortenaneurysmen. Im Vergleich zu Apoe-/- Mäusen zeigten die Aortenwände der TGFβR2iSMC-Apoe-Mäuse eine schwere Atherosklerose, was die Sezierung der Läsionen erschwerte (Abbildung 2C,D,E.......
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Diskussion
Apolipoprotein E (Apoe) und Low Density Lipoprotein Rezeptor (Ldlr) defiziente Mäuse sind nützlich für die Untersuchung der Entwicklung und Behandlung von Atherosklerose. Forscher können die Auswirkungen von Genetik und therapeutischen Manipulationen auf die Initiierung, Progression und Regression von Atherosklerose-bedingten Krankheiten unter Verwendung der Öl-Rot-O-Färbung der gesamten Aorta bewerten9. Aorta Oil Red O Färbung und Läsionsquantifizierung ist der Goldstandard-Endp.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären keine konkurrierenden finanziellen Interessen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde zum Teil durch einen Joint Biology Consortium Microgrant unterstützt, der im Rahmen des NIH-Zuschusses P30AR070253 (P.-Y.C.) und HL135582 (M.S.) bereitgestellt wurde. Wir danken R. Webber und L. Coon für die Aufrechterhaltung der in dieser Studie verwendeten Mäuse.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1,5 mL Eppendorf Tube | DENVILLE | C2170 | |
| 10 mL Spritze | BD | 302995 | |
| 16% Formaldehyd | Polysciences | 18814-10 | |
| 70% Ethanol | VWR | RC2546.70-5 | Zur Reinigung der Sezierwerkzeuge |
| Schwarzes Sezierwachs | CR Scientific | C3541 | |
| Maisöl | Sigma | C8267 | Lösungsmittel für Tamoxifen |
| DNeasy Blut & Taschentuch-Set | QIAGEN | 69506 | Zur Isolierung von DNA aus dem Mausohr |
| Dulbecco' s Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (1X DPBS), pH 7,4 | Gibco | 14190-144 | |
| Feine Schere | Fine Science Tools | 14059-11 | Zum Schneiden der Maushaut und zum Öffnen des Brustkorbs |
| Fisherbrand Economy Plain Glass Mikroskop Objektträger | Fisher Scientific | 12-550-A3 | |
| Cholesterinreiche Ernährung mit hohem Fettgehalt | Forschung Diäten | D12108 | Zur Induktion von Arteriosklerose |
| Bildgebung Software | National Institutes of Health | Image J | Quantifizierung von Aortenläsionen |
| Isopropanol | VWR | JT9079-5 | |
| Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | Zum Reinigen der Glasobjektträger |
| McPherson-Vannas Micro Dissecting Federschere | ROBOZ | RS-5602 | Zum Trennen des Herzens und der Aorta und des Aufschneidens der Aorta und der Aortenäste |
| Steuerungssoftware für Mikroskope | Olympus | DP Controller | Für die Aortenbildgebung |
| Minutien pins | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Needle-25G | BD | 305124 | |
| NonWoven Sponge | McKesson | 94442000 | |
| Oil Red O | Sigma | O-0625 | Zum Färben von Atherosklerose-Läsionen |
| Pall Acrodisc Sterile Spritze Filter mit Supermembran | VWR | 28143-312 | Zum Filtern von Arbeitsöl Rot O Lösung |
| Federschere | Fine Science Tools | 15021-15 | Zum Sezieren und Reinigen der Aorta |
| Statistische Software | GraphPad | Prism 8 | die statische Analyse |
| Nikon | SMZ1000 | Für die Dissektion der Aorta | |
| Stereomikroskop | Olympus | SZX16 | Für die Bildgebung der Aorta |
| Tamoxifen | Sigma | T5648 | Zur Induktion der Cre-loxP-Rekombination |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound, Sakura Finetek | VWR | 25608-930 | |
| Pinzette Style 4 | Elektronenmikroskopie Sciences | 0302-4-PO | Zum Schneiden der Maushaut und zum Öffnen des Brustkorbs |
| Pinzette Style 5 | Elektronenmikroskopie Sciences | 0302-5-PO | Zum Präzieren und Reinigen Die Aorta |
Referenzen
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
- Plump, A. S., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
