Minimierung der Venenblutung nach der Infusion während der intrahepatischen Inseltransplantation bei Mäusen

Zusammenfassung

Hier stellen wir verfeinerte chirurgische Verfahren zur erfolgreichen Durchführung der intraportalen Inseltransplantation, einem klinisch relevanten, aber technisch anspruchsvollen chirurgischen Eingriff, bei Mäusen vor.

Zusammenfassung

Obwohl die Leber derzeit als primärer Transplantationsort für menschliche Inseln in klinischen Umgebungen akzeptiert wird, werden Inseln in den meisten präklinischen Inseltransplantationsstudien von Nagetieren unter die Nierenkapsel transplantiert. Dieses Modell wird häufig verwendet, da die murine intrahepatische Inseltransplantation technisch eine Herausforderung darstellt und ein hoher Prozentsatz der Mäuse an chirurgischen Komplikationen sterben könnte, insbesondere an Blutungen von der Injektionsstelle nach der Transplantation. In dieser Studie werden zwei Verfahren gezeigt, die die Häufigkeit von Pfortaderblutungen nach der Infusion minimieren können. Die erste Methode wendet einen resorbierbaren hämostatischen Gelatineschwamm auf die Injektionsstelle an, und die zweite Methode besteht darin, die Inselinjektionsnadel zuerst durch das Fettgewebe und dann in die Pfortader zu durchdringen, indem das Fettgewebe als physikalische Barriere verwendet wird, um Blutungen zu stoppen. Beide Methoden könnten den blutungsbedingten Mäusetod wirksam verhindern. Der gesamte Leberabschnitt mit Inselverteilung und Anzeichen einer Inselthrombose nach der Transplantation, ein typisches Merkmal für die intrahepatische Inseltransplantation, wurden vorgestellt. Diese verbesserten Protokolle verfeinern die intrahepatischen Inseltransplantationsverfahren und können Labors helfen, das Verfahren zur Untersuchung des Überlebens und der Funktion von Inselchen in präklinischen Umgebungen einzurichten.

Einleitung

Die intraportale Inseltransplantation (IIT) über die Pfortader ist die am häufigsten verwendete Methode für die Transplantation menschlicher Inseln in klinischen Umgebungen. Das IIT-Modell der Maus bietet eine großartige Gelegenheit, die Inseltransplantation zu untersuchen und vielversprechende interventionelle Ansätze zu testen, die die Wirksamkeit der Inseltransplantation verbessern ^können1. IIT wurde erstmals in den 1970er Jahren beschrieben und von mehreren Gruppen verwendet1,2,3,4,5.^<....

Protokoll

Alle Verfahren wurden mit Genehmigung der Institutional Animal Care and Use Committees an der Medical University of South Carolina und des Ralph H Johnson Medical Center in Charleston durchgeführt.

1. Diabetes-Induktion mit Streptozotocin (STZ)

1. Vorbereitung der Empfängermäuse:
   1. Wiegen Sie alle Mäuse einzeln.
   2. Überprüfen Sie den Blutzuckerspiegel aus einer Blutprobe der Heckvene mit einem Glucometer.
2. STZ-Dosisbestimmung für drei verschiedene Szenarien:
   1. Bei Mäusen mit Fettlebererkrankung eine Dosis STZ [40 mg/kg/Tag, intraperitoneale (i.p.) Injektion] für 5 aufeinanderfolgende Tage.

Ergebnisse

Über die Vene portal führten wir syngene und xenogene Inseltransplantationen durch. Die Funktion des Inseltransplantats wurde in beiden Inseltransplantationsmodellen dosisabhängig beobachtet. Im syngenen Inseltransplantationsmodell mit C57BL/6-Mäusen führte die Transplantation von 250 Inseln zu einer vorübergehenden Normoglykämie, bevor die Mäuse zur Hyperglykämie zurückkehrten. Mäuse, die 500 Inseln erhielten, erreichten und hielten die Normoglykämie länger als 30 Tage nach der Transplantation aufrecht (

Diskussion

In dieser Studie wurden zwei verbesserte Verfahren demonstriert, die Blutungen verhindern und die Mausmortalität während der Maus-IIT reduzieren können. Diese Studie ermöglicht es den Forschern, das Inseltransplantationsmodell zu visualisieren, das bei der Untersuchung der sofortigen blutvermittelten Entzündungsreaktion nach der Transplantation einzigartig ist. Das IIT-Modell ist ein unverwechselbares Modell für die Untersuchung des Überlebens von Inselzellen und hepatischer ischämischer Verletzungen als Reaktion auf die.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
10% neutrales gepuffertes Formalin v/v	Fisher Scientific	23426796
1 mL Spritze mit Nadel	AHS	AH01T 20 mL
Spritze	BD	301031
25G x 5/8" Injektionsnadeln	BD	305122
Alkoholvorbereitungspads, steril	Fisher Scientific	22-363-750
Tieranästhesie System	VetEquip, Inc.
Buprenorphinhydrochlorid, Injektion	Par Sterile Products, LLC	NDC 42023-179-05
Zentrifugenröhrchen, 15 mL	Fisher Scientific	0553859A
CMRL-1066	Corning	15110CV
DMEM	Corning	10013CV
Ethanol, absolut (200 proof), molekularbiologische Qualität	Fisher Scientific
Extra feine Mikro-Präparierschere 4" gerade scharf	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-5882
Fötales Rinderserum (FBS)	Corning	35011CV
FreeStyle  Blutzuckermessgerät	Abbott	Lite
FreeStyle Blutzuckerteststreifen	Abbott	Lite
Gelfoam (resorbierbarer Gelatineschwamm, USP)	Pharmazie & Upjohn Company	34201
Graefe Pinzette 4" extra zarte Spitze	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-5136
Heizkissen	Amazon	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner Nadelhalter 5,25"	Roboz Chirurgisches Instrument Co.	RS-7850
Insulinspritze mit 27-Gauge-Nadel	BD	879588
Jod-Vorbereitungspads	Fisher Scientific	19-027048
Isofluran	Piramal Intensivpflege	NDC 66794-017-25
Penicillin/Streptomycin (P/S)	HyClone	SV30010
Polypropylen-Naht 4-0	Med-Vet International	MV-8683
Polypropylen-Nahtmaterial 5-0	Med-Vet International	MV-8661
Natriumchlorid, 0,9 % intravenöse Lösung	VWR	2B1322Q
Streptozocin (STZ)	Sigma	S0130
OP-Tuch, steril	Med-Vet International	DR1826
Gewebekassette	Fisher Scientific	22-272416

901806BP2818500