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Methodenartikel

In vitro Aufschluss von Emulsionen in einem einzigen Tröpfchen durch mehrphasigen Austausch simulierter Magen-Darm-Flüssigkeiten

3.4K Aufrufe

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DOI:

10.3791/64158

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18. November 2022

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Eine hängende Tropfen-Oberflächenfilmwaage, die mit einem Multi-Subphasen-Austausch mit dem Spitznamen OCTOPUS implementiert ist, ermöglicht die Nachahmung von Verdauungsbedingungen durch den sequentiellen Subphasenaustausch der ursprünglichen Bulk-Lösung mit simulierten Magen-Darm-Flüssigkeiten. Der simulierte In-vitro-Aufschluss wird überwacht, indem in situ die Grenzflächenspannung der aufgeschlossenen Grenzflächenschicht aufgezeichnet wird.

Zusammenfassung

Emulsionen werden derzeit verwendet, um Nährstoffe und Medikamente zu verkapseln und zu liefern, um verschiedene Magen-Darm-Erkrankungen wie Fettleibigkeit, Nährstoffanreicherung, Nahrungsmittelallergien und Verdauungskrankheiten zu bekämpfen. Die Fähigkeit einer Emulsion, die gewünschte Funktionalität bereitzustellen, nämlich eine bestimmte Stelle im Magen-Darm-Trakt zu erreichen, die Lipolyse zu hemmen / zu verzögern oder die Verdaulichkeit zu erleichtern, hängt letztendlich von ihrer Anfälligkeit für enzymatischen Abbau im Magen-Darm-Trakt ab. In Öl-in-Wasser-Emulsionen sind Lipidtröpfchen von Grenzflächenschichten umgeben, in denen die Emulgatoren die Emulsion stabilisieren und die verkapselte Verbindung schützen. Das Erreichen einer maßgeschneiderten Verdaulichkeit von Emulsionen hängt von ihrer ursprünglichen Zusammensetzung ab, erfordert aber auch die Überwachung der Entwicklung dieser Grenzflächenschichten, da sie verschiedenen Phasen der gastrointestinalen Verdauung unterzogen werden. Eine hängende Tropfenfolienwaage, die mit einem Multi-Subphasen-Austausch implementiert ist, ermöglicht die Simulation des In-vitro-Aufschlusses von Emulsionen in einem einzigen wässrigen Tröpfchen, das in Öl getaucht wird, indem ein kundenspezifisches statisches Aufschlussmodell angewendet wird. Der Transit durch den Magen-Darm-Trakt wird durch den Subphasenaustausch der ursprünglichen Tröpfchenlösung mit künstlichen Medien nachgeahmt, die die physiologischen Bedingungen jedes Kompartiments / Schritts des Magen-Darm-Trakts nachahmen. Die dynamische Entwicklung der Grenzflächenspannung wird in situ während der gesamten simulierten gastrointestinalen Verdauung aufgezeichnet. Die mechanischen Eigenschaften der verdauten Grenzflächen, wie Grenzflächendilatationselastizität und Viskosität, werden nach jeder Verdauungsphase (Mund-, Magen-, Dünndarm) gemessen. Die Zusammensetzung jedes Verdauungsmediums kann abgestimmt werden, um die Besonderheiten der Verdauungsbedingungen, einschließlich Magen-Darm-Erkrankungen und Verdauungsmedien für Säuglinge, zu berücksichtigen. Die spezifischen Grenzflächenmechanismen, die die Proteolyse und Lipolyse beeinflussen, werden identifiziert und liefern Werkzeuge zur Modulation der Verdauung durch die Grenzflächentechnik von Emulsionen. Die erzielten Ergebnisse können manipuliert werden, um neuartige Lebensmittelmatrices mit maßgeschneiderten Funktionalitäten wie geringer Allergenität, kontrollierter Energieaufnahme und verminderter Verdaulichkeit zu entwerfen.

Einleitung

Zu verstehen, wie Fett verdaut wird, was den Emulsionsaufschluss beinhaltet, ist wichtig, um Produkte mit maßgeschneiderter Funktionalität rational zu entwerfen1. Das Substrat für die Fettverdauung ist eine Emulsion, da Fett beim Verzehr durch mechanische Einwirkung und Mischen mit Biotensiden in Mund und Magen emulgiert wird. Außerdem ist das meiste Fett, das vom Menschen konsumiert wird, bereits emulgiert (wie Milchprodukte), und im Falle von Säuglingen oder einigen älteren Menschen ist dies die einzige Form des Konsums. Daher ist das Design von emulsionsbasierten Produkten mit spezifischen Verdauungsprofilen in der Ernährung sehr wichtig

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Protokoll

1. Reinigungsreihenfolge für alle Glaswaren, die in oberflächenwissenschaftlichen Experimenten verwendet werden

  1. Schrubben Sie die Glaswaren mit einer konzentrierten Reinigungslösung (siehe Materialtabelle), die in Wasser (10%) verdünnt ist.
  2. Spülen Sie gründlich mit einer Sequenz aus Leitungswasser, Propanol, destilliertem Wasser und Reinstwasser. In einer Kabine trocknen und bis zum Gebrauch in einem geschlossenen Schrank aufbewahren.

2. Probenvorbereitung

  1. Bereiten Sie künstliche Verdauungsmedien gemäß den standardisierten INFOGEST-Protokollen

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Ergebnisse

Dieser Abschnitt zeigt verschiedene Beispiele für Aufschlussprofile, die mit dem OCTOPUS gemessen wurden. Das allgemeine Erscheinungsbild der simulierten Aufschlussprofilübereinstimmungen ist in Abbildung 4B dargestellt. Die Grenzflächenspannung wird im Verdauungsprofil meist gegen die Zeit dargestellt. Die verschiedenen betrachteten Phasen/Verdauungsschritte werden in unterschiedlichen Farben dargestellt. Die erste Phase bildet die Ausgangsschicht und entspricht je nach Fall der Adsorptions.......

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Diskussion

Dieser Artikel beschreibt ein verallgemeinertes Protokoll zur Messung der In-vitro-Verdauung von Grenzflächenschichten unter Verwendung von Pendant-Drop-Geräten. Das Protokoll kann an die spezifischen Anforderungen des Experiments angepasst werden, indem die Zusammensetzung der Verdauungspuffer abgestimmt wird, die auf dem harmonisierten Protokoll INFOGEST11,20 basieren, um den Vergleich mit der Literatur zu erleichtern. Die Verdauungsenzyme und Biotensi.......

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine bekannten konkurrierenden finanziellen Interessen oder persönlichen Beziehungen haben, die die in diesem Papier berichtete Arbeit beeinflusst haben könnten.

Danksagungen

Diese Forschung wurde durch die Projekte RTI2018-101309-B-C21 und PID2020-631-116615RAI00 finanziert, gefördert durch MCIN/AEI/10.13039/501100011033 und durch "EFRE A way of making Europe". Diese Arbeit wurde (teilweise) von der Biocolloid and Fluid Physics Group (siehe PAI-FQM115) der Universität Granada (Spanien) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Alpha-Chymotrypsin aus der Bauchspeicheldrüse des RindesSigma-AldrichC4129Enzym
Beta-LactoglobulinSigma-AldrichL0130Emulgfier
RinderserumalbuminSigma-Aldrich9048-46-8Emulgrier
CaCl2Sigma-Aldrich10043-52-4
Kronton InstrumenteCentrikon T-124Zur Trennung von Öl und Harzen
CitruspektinSigma-AldrichP9135Emulsfier
Co-Lipase AUS DER BAUCHSPEICHELDRÜSE DES SCHWEINSSigmaC3028Enzym
CONTACTOUniversität Granada (UGR)https://core.ugr.es/dinaten/, letzter Zugriff: 18.07.2022
DINATENUniversität Granada (UGR)https://core.ugr.es/dinaten/, letzter Zugriff: 18.07.2022
MagenlipaseLipolytechRGE15-1GEnzym
Humanserum AlbuminSigma-Aldrich70024-90-7Emulgator
INFOGESThttp://www.proteomics.ch/IVD/
Lipase aus der Bauchspeicheldrüse des Schweins, Typ IISigma-AldrichL33126Enzym
Magnesiummetasilikat HarzeFluka1343-88-0Harze zur Reinigung von Öl
Micro 90International ProdukteM-9051-04Reiniger
NaClSigma7647-14-5Elektrolyt
NaH2PO4Scharlau10049-21-5Zur Herstellung
von Puffer OCTOPUSProducciones Cientí ficas y Té cnicas S.L. (G&oakute; Behälter, Spanien)Pendandt Drop Equipment mit Multi-Subphasen-Austausch
Sigma-Aldrich1514Öl
Pankreas aus der Bauchspeicheldrüse des SchweinsSigmaP7545-25 gEnzym
PepsinSigma-AldrichP6887Enzym
Pluronic F127SigmaP2443Emulgator
Pluronic F68SigmaP1300Emulgor
NatriumdesoxycholatSigmaGallensalze
NatriumglycodeoxycholatSigmaC9910Gallensalze
NatriumtaurocholatSigma86339Gallensalze
SpritzenfilterMillex-DPSLGP033R  Spritzenvorsatzfilter 0,22 & Mikro; m Porengröße Polyethersulfon
TrypsinSigma-AldrichT1426Enzym
Elektrolytzentrifuge Olivenöl

Referenzen

  1. McClements, D. J. The biophysics of digestion: Lipids. Current Opinion in Food Science. 21, 1-6 (2018).
  2. McClements, D. J., Li, Y. Structured emulsion-based delivery systems: Controlling the digestion and release of lipo....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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