Summary
Het huidige protocol beschrijft een efficiënte methode voor optimalisatie van de verwerkingstechnologie van Tiebangchui verwerkt met hooglandgerstwijn op basis van een Box-Behnken ontwerpresponsoppervlak in combinatie met de entropiemethode.
Abstract
De verwerking van toxische etnomedicijnen is van groot belang voor hun veilige klinische toepassing. Daarom moeten de beperkingen van traditionele verwerking worden aangepakt en moet de verwerkingsmethode van etnogeneesmiddelen worden gestandaardiseerd met behulp van moderne onderzoeksmethoden. In deze studie werd de verwerkingstechnologie van een veelgebruikt Tibetaans medicijn Tiebangchui (TBC), de gedroogde wortel van Aconitum pendulum Busch, verwerkt met hooglandgerstwijn geoptimaliseerd. Het gehalte aan Diester-diterpenoïde alkaloïde (DDA) (aconitine, 3-deoxyaconitine, 3-acetylaconitine) en monoester-diterpenoïde alkaloïde (MDA) (benzoylaconine) werden gebruikt als evaluatie-indicatoren en de gewichtscoëfficiënt van elke evaluatie-index werd bepaald door de entropiemethode.
De single factor test en het Box-Behnken-ontwerp werden gebruikt bij het onderzoeken van de invloed van de verhouding tussen hooglandgerstwijn en TBC, plakdikte van TBC en verwerkingstijd. Uitgebreide scoring werd uitgevoerd op basis van het objectieve gewicht van elke index bepaald door de entropiemethode. De optimale verwerkingsomstandigheden van TBC met hooglandgerstwijn waren als volgt: de hoeveelheid hooglandgerstwijn is vijf keer die van TBC, een weektijd van 24 uur en een TBC-dikte van 1,5 cm. De resultaten toonden aan dat de relatieve standaardafwijking tussen de verificatietest en de voorspelde waarde minder dan 2,55% was en dat de geoptimaliseerde verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hooglandgerstwijn eenvoudig, haalbaar en stabiel is en dus een referentie kan zijn voor industriële productie.
Introduction
Tiebangchui (TBC), de gedroogde wortel van Aconitum pendulum Busch, is een bekende Tibetaanse geneeskunde en werd oorspronkelijk vastgelegd in het klassieke Tibetaanse medische boek "Four Medical Tantra"1,2. Volgens "Drug Standards of the Ministry of Health of the People's Republic of China (Tibetan Medicine)", is TBC effectief in het verdrijven van kou, het verlichten van pijn, het verdrijven van wind en het kalmeren van shock, en wordt vaak gebruikt voor de behandeling van reumatoïde artritis in klinieken 3,4,5.
TBC bevat voornamelijk alkaloïden, waaronder zeer giftige diester-diterpenoïde alkaloïden (DDA's), en de matig toxische monoester-diterpenoïde alkaloïden (MDA's)6,7,8. Deze chemische componenten zijn actieve ingrediënten met medicinale effecten, maar zijn giftig. Een van de beroemdste actieve en toxische ingrediënten, aconitine, veroorzaakt vergiftiging wanneer het hoger is dan 1 mg9. Daarom kan onjuist of overmatig gebruik van TBC leiden tot vergiftiging en zelfs de dood, en de toxiciteitsverzwakking en werkzaamheidsreservering van TBC is cruciaal voor de veilige klinische toepassingervan 10,11.
Verwerking is een effectieve methode voor het ontgiften van TBC. Volgens oude Tibetaanse medicijnboeken is verwerking met hooglandgerstwijn een efficiënte manier om toxiciteit te verminderen en de werkzaamheid van TBC te behouden. TBC wordt gedrenkt in hooglandgerstwijn, één nacht bewaard, gedroogd en toegevoegd aan medicijnen12. De specifieke verwerkingstechnologie en mogelijke beïnvloedende factoren worden echter zelden gerapporteerd en het traditionele verwerkingsproces is vaak afhankelijk van ervaring en mist gestandaardiseerde methoden. Daarom zijn moderne wetenschappelijke en technologische methoden nodig voor het optimaliseren en standaardiseren van het verwerkingsproces.
De Box-Behnken ontwerpmethode wordt gebruikt bij het onderzoeken van interacties tussen verschillende factoren en hun invloed op uitgebreide scoring door middel van kwadratische polynomiale fitting. Dit ontwerp maakt de intuïtieve observatie van optimale omstandigheden mogelijk en is op grote schaal gebruikt op het gebied van farmacie13. De Box-Behnken-ontwerpmethode, gebaseerd op de entropiemethode, heeft bijvoorbeeld met succes de verwerkingstechnologie van roerbakken met azijn van Curcuma Longa Radix14 geoptimaliseerd. In deze studie werd het Box-Behnken response surface experimentele ontwerp in combinatie met de entropiemethode gebruikt bij het optimaliseren van de verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hooglandgerstwijn. De geoptimaliseerde verwerkingstechnologie zal naar verwachting kwaliteitscontrole en veilig klinisch gebruik garanderen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
In deze studie werd de verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hoogland gerstwijn geoptimaliseerd met een Box-Behnken ontwerp in combinatie met de entropiemethode. DDA- en MDA-gehalte werden gebruikt als evaluatie-indicatoren en de gewichtscoëfficiënt van elke evaluatie-index werd bepaald door de entropiemethode.
1. Experimentele voorbereiding
- Bereid hoogland gerst wijn15.
- Neem 500,00 g zwarte hooglandgerstrijst en voeg vijf keer de hoeveelheid water toe. Kook de rijst tot het resterende water is opgenomen (~2 uur). Giet het uit, wacht tot de temperatuur daalt tot 37 °C, voeg 4 g Jiuqu toe (zie materiaaltabel), meng goed, sluit het blik af, wikkel de container in met watten en laat het 7 dagen stoven.
- Voeg op de 7e dag 300 ml water toe en sluit opnieuw af. Begin op de 8e dag met het verwijderen van de wijn en vervang deze daarna door 300 ml water. Verzegel en fermenteer gedurende 1 dag, neem de wijn en voeg opnieuw 300 ml water toe. Herhaal deze procedure drie keer en combineer de likeuren.
- Breng aan de kook, zet het vuur laag en ga door met koken totdat het resterende water is opgenomen.
- Om verwerkte producten te bereiden, weegt u de TBC nauwkeurig in een container, voegt u hooglandgerstwijn toe en laat u deze 1 dag weken. Droog vervolgens in een elektrische droogoven met constante temperatuur.
OPMERKING: De droogtemperatuur moet lager zijn dan 40 °C om veranderingen in de alkaloïdesamenstelling te voorkomen. - Bereid de oplossing van het testmonster voor.
- Weeg tbc-verwerkt productpoeder (2 g) nauwkeurig af in een erlenmeyer, voeg 40% ammoniakoplossing toe en voer ultrasone extractie uit met isopropanol-ethylacetaat (1:1) gemengde oplosmiddelen (50 ml) (vermogen: 200 W; frequentie: 40 kHz; temperatuur: 40 °C) gedurende 30 minuten.
OPMERKING: Om 40% ammoniakoplossing te bereiden, brengt u 40 ml ammoniak over in een maatkolf van 100 ml en verdunt u vervolgens met zuiver water. - Pas de geëxtraheerde oplossing aan op het oorspronkelijke gewicht door een mengsel van isopropanol en ethylacetaat (1:1 v/v) toe te voegen.
- Breng de geëxtraheerde oplossing (25 ml) nauwkeurig over in een kolf met ronde bodem voor de terugwinning van het oplosmiddel onder verlaagde druk totdat het droog is.
- Breng ten slotte 0,05% zoutzuur-methanoloplossing over om het residu van stap 1.3.3 op te lossen in een maatkolf van 5 ml en verdun met 0,05% methanolhydrochlorideoplossing. Filtreer de oplossing door een microporeus membraanfilter van 0,22 μm voordat het in de high-performance vloeistofchromatografiesystemen (HPLC) wordt geïnjecteerd.
OPMERKING: Bereid 0,05% methanolhydrochloridezuur door 0,05 ml zoutzuur toe te voegen aan een maatkolf van 100 ml en vervolgens te verdunnen met methanol.
- Weeg tbc-verwerkt productpoeder (2 g) nauwkeurig af in een erlenmeyer, voeg 40% ammoniakoplossing toe en voer ultrasone extractie uit met isopropanol-ethylacetaat (1:1) gemengde oplosmiddelen (50 ml) (vermogen: 200 W; frequentie: 40 kHz; temperatuur: 40 °C) gedurende 30 minuten.
- Bereid een standaardoplossing door 5,18 mg benzoylaconine, 13,13 mg aconitine, 10,05 mg 3-deoxyaconitine en 10,09 mg 3-acetylaconitine nauwkeurig af te wegen en plaats de vaste stoffen vervolgens afzonderlijk in een maatkolf van 5 ml. Verdun met 0,05% methanolhydrochlorideoplossing.
2. Chromatografische toestand
- Stel de chromatografische condities in zoals weergegeven in tabel 1 voor HPLC. Details van de gebruikte instrumenten zijn te vinden in de Tabel van Materialen.
3. Test van het aanpassingsvermogen van het systeem
- Bereik van lineariteit
OPMERKING: Eerst gebruikten we HPLC om de piekgebieden van benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine in het monster te bepalen en vervolgens willekeurig het piekgebied van één bekende concentratie standaardoplossing te bepalen. Vervolgens vergeleken we het verschil tussen twee piekgebieden (monsteroplossing en standaardoplossing) om de concentratie van benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine in verschillende monsters te schatten en vervolgens de standaardoplossing aan te passen in een lineair bereik om de concentratie van het monster in de curve op te nemen. De standaardcurveconcentraties zijn weergegeven in tabel 2.- Bereid benzoylaconitine referentieoplossingen die 1,036 mg/ml, 0,518 mg/ml, 0,2072 mg/ml, 0,1036 mg/ml en 0,0518 mg/ml bevatten.
- Bereid aconitinereferentieoplossingen met 1,313 mg/ml, 0,5252 mg/ml, 0,2626 mg/ml, 0,1313 mg/ml en 0,05252 mg/ml.
- Bereid 3-deoxyaconitinereferentieoplossingen met 1,005 mg/ml, 0,5025 mg/ml, 0,201 mg/ml, 0,1005 mg/ml en 0,402 mg/ml.
- Bereid 3-acetylaconitine referentieoplossingen met 0,2018 mg/ml, 0,1009 mg/ml, 0,04036 mg/ml, 0,02018 mg/ml en 0,01009 mg/ml.
- Onderzoek de lineariteit van elke verbinding door het piekgebied versus de injectieconcentratie uit te zetten.
- Om de precisietest uit te voeren, injecteert u zes keer per dag 10 μl van elke referentieoplossing in het HPLC-systeem en gebruikt u dezelfde HPLC-omstandigheden als beschreven in stap 2.1 om de monsters uit te voeren Noteer het piekoppervlak van elk onderdeel.
- Voer intraday-stabiliteitstests uit door 10 μl van de bereide monsteroplossing te injecteren via stap 1.3 en bepaal de piekgebieden na 0 uur, 2 uur, 4 uur, 8 uur, 14 uur, 12 uur en 24 uur16.
- Voer een reproduceerbaarheidstest uit door zes monsters van dezelfde partij TBC te nemen om de testmonsteroplossing te bereiden, volgens stap 1.3. Injecteer 10 μL van elk monster in het HPLC-systeem en voer de monsters uit zoals beschreven in stap 2.1.
- Voer de hersteltest uit om de nauwkeurigheid van de methode te evalueren. Voeg 100% van de standaardoplossing van elke indexcomponent (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine) toe aan de testoplossing om respectievelijk de herstelsnelheid te berekenen. Als het gehalte aan benzoylaconitine bijvoorbeeld 0,1524 mg / ml in het TBC-monster is, weegt u nauwkeurig 0,1524 mg benzoylaconitine-normen af en voegt u deze toe aan het TBC-monster en bereidt u vervolgens de testmonsteroplossing voor volgens stap 1.3. Voer deze voorbeelden uit met dezelfde HPLC-omstandigheden die worden beschreven in stap 2.1. Bereken het herstelpercentage met behulp van vergelijking (1):
(1)
Hier is A de hoeveelheid component (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine of 3-acetylaconitine) die in de monsteroplossing moet worden gemeten, B de hoeveelheid standaard toegevoegde (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine of 3-acetylaconitine) en C de gemeten waarde van de oplossing die de standaardoplossing en de monsteroplossing bevat (zie tabel 3). Raadpleeg stap 2.1 voor de chromatografische omstandigheden om de bovenstaande stappen uit te voeren. De terugvorderingssnelheid weerspiegelt de mate van verlies van de doelcomponent (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine of 3-acetylaconitine) tijdens de monsteranalyse; Hoe hoger het herstelpercentage, hoe lager het verlies van de doelcomponent.
(1)4. Single factor test van TBC verwerkt met highland gerst wijn
OPMERKING: De verhouding tussen hooglandgerstwijn en TBC, plakdikte van TBC en inweektijd zal van invloed zijn op het oplossen van meer toxische componenten (aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine) in TBC tijdens de TBC verwerkt met hooglandgerstwijn17. De single factor test en het Box-Behnken-ontwerp werden gebruikt om de invloed van de verhouding van hooglandgerstwijn tot TBC, plakdikte van TBC en inweektijd te onderzoeken.
- Voer de highland barley wine addition test (A) uit door vijf groepen tests op te zetten, elk met 30 g TBC, waarbij de hoeveelheid highland gerstwijn twee, drie, vier, vijf en zes keer de hoeveelheid TBC in het recept is. De weektijd is 12 uur en de plakjes zijn 1,0 cm dik18.
OPMERKING: Elke groep van dezelfde conditietest moet in drie parallelle groepen worden verwerkt. - Voer de inweektijdtest (B) uit door vijf groepen tests in te stellen, elk met 30 g TBC. De inweektijden zijn 12 uur, 24 uur, 36 uur en 48 uur. De hoeveelheid hooglandgerstwijn is vijf keer die van TBC en de plakjes zijn 1,0 cm dik19.
OPMERKING: Elke groep van hetzelfde conditie-experiment moet in drie parallelle groepen worden verwerkt. - Voer de snijdiktetest (C) uit door vijf groepen tests in te stellen, elk met 30 g TBC. De plakjes zijn 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 en 2,5 cm dik, de weektijd is 24 uur en de hoeveelheid hooglandgerstwijn is vijf keer die van TBC20.
OPMERKING: Elke groep van hetzelfde conditie-experiment moet in drie parallelle groepen worden verwerkt. - Weeg verwerkte producten nauwkeurig af voor elke testgroep om de testmonsteroplossing te bereiden volgens stap 1.3. Bepaal het piekoppervlak van elk monster met behulp van HPLC en gebruik de standaardcurve om de hoeveelheden MDA's en DDA's te schatten. In de standaardcurve is y het piekgebied en x de inhoud. Het gehalte aan MDA's is benzoyl-aconitine en het gehalte aan DDA's is de som van aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine.
- Gebruik de totale inhoud van DDA's en de inhoud van MDA's als evaluatie-indicatoren en bepaal de gewichtscoëfficiënt van elke evaluatie-index en de uitgebreide scoring via de entropiemethode (sectie 5).
LET OP: TBC is giftig en daarom moeten beschermende maatregelen worden genomen tijdens de verwerking.
5. Entropiemethode om de uitgebreide scoring te berekenen
OPMERKING: We gebruiken de experimentele gegevens van de snijdiktetest in de single factor-test als voorbeeld om het berekeningsproces in detail te illustreren. We gebruiken het piekoppervlak van de componenten in elk monster in aanvullende tabel S1 en de standaardcurve in tabel 2 om het gehalte aan MDA's en DDA's te berekenen (zie aanvullende tabel S2). In de lineaire vergelijking is y het piekgebied en x de inhoud. In deze studie werd de matig toxische MDA (benzoylaconitine) gebruikt als de positieve indicator en het totale gehalte aan DDA's (aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine) met hoge toxiciteit werd gebruikt als de negatieve indicator. Het gehalte aan MDA's is benzoyl-aconitine en het gehalte aan DDA's is de som van aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine. Elke steekproef heeft twee evaluatie-indicatoren: i = 1,2,...,n en j = 1,2,... m21.
- Gebruik Vergelijking (2) om de inhoud van MDA's22 te standaardiseren.
(2)
Dus
OPMERKING: Xij is de waarde van de j-de indicator van het i-de monster. Xij* is de gestandaardiseerde waarde van Xij. Bijvoorbeeld, i = 3 en j = 1, X31 vertegenwoordigt de waarde van de eerste indicator van het derde monster, en
is de gestandaardiseerde waarde van de eerste indicator in de derde steekproef. zijn weergegeven in aanvullende tabel S3. 
- Gebruik vergelijking (3) om de totale inhoud van de DDA's23 te standaardiseren.
(3)
OPMERKING: Hier vertegenwoordigt i = 3, j = 2, de tweede indicator van het derde monster.
de gestandaardiseerde waarde van de tweede indicator in het derde monster. 
zijn opgenomen in aanvullende tabel S3. - Gebruik vergelijkingen (4) en (5) om de entropiewaarde (Hj) van elke indicator23 te definiëren.
- Bereken de waarschijnlijkheid van de j-de studie onder de i-de evaluatie-indicator Pij met behulp van vergelijking (4).
(4)
Voor nummer 3,
OPMERKING: De waarschijnlijkheidswaarden voor de eerste indicator en de tweede indicator van de derde steekproef zijn respectievelijk 0,2374 en 0,2812.
zijn opgenomen in aanvullende tabel S3. - Bereken de informatie-entropie Hj.
(5)
OPMERKING: H 1 is de entropie van de eerste indicator (MDA's) en H2 is de entropie van de tweede indicator (DDA's) in de snijdiktetest.
- Bereken de waarschijnlijkheid van de j-de studie onder de i-de evaluatie-indicator Pij met behulp van vergelijking (4).
- Gebruik vergelijking (6) om de indicatorgewichten (Wj)23 te berekenen.
(6)
= 33,3%
= 66,7%
OPMERKING: Wjis de gewichtscoëfficiënt van elke indicator. In de snijdiktetest is de gewichtscoëfficiënt van de positieve indicator (MDA's) en negatieve indicator (DDA's) respectievelijk 33,3% en 66,7%. - Gebruik vergelijking (7) om de uitgebreide score van de indicatorente berekenen 23.
(7)
Voor nummer 3,
OPMERKING: Si is de uitgebreide score van elk monster. We moeten de hoogste score behalen als centraal punt in het Box-Behnken-ontwerp. S 1, S 2, S 3, S 4 en S5 zijn weergegeven in aanvullende tabel S3.
(2)
is de gestandaardiseerde waarde van de eerste indicator in de derde steekproef. zijn weergegeven in aanvullende tabel S3. 
(3)
de gestandaardiseerde waarde van de tweede indicator in het derde monster. 
zijn opgenomen in aanvullende tabel S3.
(4)
zijn opgenomen in aanvullende tabel S3.
(5)
(6)
= 33,3%
= 66,7%
(7)
6. Box-Behnken ontwerp
- Gebruik via de single factor test de conditie met de hoogste uitgebreide score (zie tabel 4, tabel 5, tabel 6 en figuur 2) als het middelpunt van het responsoppervlak. Gebruik de hoeveelheid hooglandgerstwijn (A), de weektijd (B) en de plakdikte van TBC (C) als de beïnvloedende factoren en de uitgebreide score als de responswaarde24.
OPMERKING: Op basis van de gegevens over één factor in tabel 4, tabel 5 en tabel 6 wordt de hoogste uitgebreide score berekend met vergelijkingen (2), (3), (4), (5), (6) en (7) in sectie 5, en wordt het beste punt verkregen. De hoeveelheid hooglandgerstwijn was vijf keer die van TBC, de weektijd was 36 uur en de snijdikte was 1,0 cm.
7. Box-Behnken ontwerp software operatie stappen
- Open de software (zie Materiaaltabel) en selecteer Nieuw ontwerp | Box-Behnken Design (zie stap 5.1; Aanvullend dossier 1).
- Voer het aantal beïnvloedende factoren in en voer de niveau-informatie in (drie-niveau-drie-factor; zie tabel 7). Het Box-Behnken ontwerp is samengesteld uit 17 experimenten in deze studie. Klik ten slotte op Doorgaan (zie stap 5.2; Aanvullend dossier 1).
- Stel de uitgebreide score (Y) in met vergelijkingen (2), (3), (4), (5), (6) en (7) in sectie 5 als antwoord. Voer het aantal responswaarden in (afbeelding toont slechts één responswaarde) en klik op Voltooien (zie stap 5.3; Aanvullend dossier 1).
- Verwerk de TBC met hooglandgerstwijn volgens de ontwerpresultaten en voltooi het experiment op basis van de 17 scenario's die zijn ontworpen voor het responsoppervlak.
- Bereid de monsteroplossingen voor door stap 1.3 te volgen en bereken het totale gehalte van de MDA's en DDA's door het HPLC-systeem.
- Bereken de uitgebreide score voor elke groep met vergelijkingen (2), (3), (4), (5), (6) en (7) in stap 5 en voer de scoreresultaten in (zie stap 5.4; Aanvullend dossier 1).
- Klik op analyseren om de datum- en modelgegevens te analyseren (zie stap 5.4.1; Aanvullend dossier 1).
- Voer statistische validatie uit van polynomiale vergelijkingen en responsoppervlakanalyse uitgezet in 3D-modelplots die door de software zijn verkregen.
- Klik op ANOVA in het bovenste menu en bekijk de resultatentabel.
- Klik op Optimalisatie om de voorspelde optimale procesomstandigheden weer te geven (zie stap 5.4.2; Aanvullend dossier 1).
8. Validatietest
- Volgens de resultaten voorspeld van het Box-Behnken responsoppervlakontwerp, identificeert u in stap 7.3 de optimale verwerkingsconditie van TBC. Hier is het als volgt: TBC wordt 24 uur geweekt in vijf keer de hoeveelheid hooglandgerstwijn en de dikte van de TBC is 1,5 cm. Neem het optimale niveau van beïnvloedende factoren als verwerkingsomstandigheden en stel drie parallelle sets experimenten op om de stabiliteit van de verwerkingstechnologie te verifiëren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
In deze studie gaven de precisie, stabiliteit, herhaalbaarheid en monsterherstel van TBC aan dat de methode haalbaar is. De vier indexcomponenten in TBC hadden een goede lineaire relatie binnen een specifiek concentratiebereik. Typische chromatogrammen zijn weergegeven in figuur 1. De precisietestresultaten (tabel 8) toonden aan dat de relatieve standaardafwijking (RSD) van de piekgebieden 2,56%, 1,49% en 2,03% was voor respectievelijk benzoylaconine, aconitine en 3-deoxyaconitine en 0,21% voor 3-acetylaconitine, wat aangeeft dat de precisie van het instrument goed was. Het stabiliteitsonderzoek dat gedurende 24 uur (n = 6) werd uitgevoerd, wees op relatieve standaardafwijkingswaarden van respectievelijk 2,76%, 2,21%, 2,98% en 2,31% voor benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine (tabel 9), wat suggereert dat de monsteroplossing gedurende 24 uur stabiel was. De resultaten van de herhaalbaarheidstest (tabel 10) toonden aan dat de RSD's van de piekgebieden van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-deoxyaconitine respectievelijk 2,80%, 2,92%, 2,92% en 2,07% waren, wat aantoont dat de herhaalbaarheid van deze methode goed was. De resultaten van het herstelexperiment gaven aan dat de gemiddelde herstelpercentages van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-deoxyaconitine respectievelijk 99,7%, 100,84%, 103,27% en 100,92% waren.
De single factor test van TBC verwerkt met hoogland gerstwijn onthulde dat de hoeveelheid hoogland gerstwijn vijf keer die van TBC was, de weektijd was 36 uur en de snijdikte was 1,0 cm (figuur 2). De experimentele opzet en resultaten van het responsoppervlakmodel zijn weergegeven in tabel 11. De resultaten van de experimentele ANOVA zijn weergegeven in tabel 12. De factoren worden door regressie aangepast om een kwadratische multinomiale regressievergelijking te verkrijgen (8). A: Highland gerst wijn toevoeging; B: inweektijd; C: snijdikte. De resultaten toonden aan dat het model goed was uitgerust en in staat was om de relatie te voorspellen tussen de uitgebreide score van toevoeging van hooglandgerstwijn, de weektijd en de plakdikte. De volgorde van de factoren door de sterkte van de effecten was toevoeging van hooglandgerstwijn > plakdikte van medicinale kruiden > weektijd.
(8)
Volgens vergelijking (8) wordt Design-Expert 8.0.6-analysesoftware gebruikt om een 3D-curve te plotten via stap 7.2.1 (figuur 3). Een steilere helling van het responsoppervlak duidt op een sterkere horizontale interactie van factoren, en een zachtere helling is het tegenovergestelde. De p-waarde (p < 0,0001) van het model in tabel 12 laat zien dat het model significant is, met een R2 van 0,9754 en een niet-significante misfitterm (p = 0,7253), wat aangeeft dat het model goed past en beter de relatie weerspiegelt tussen de toevoeging van hooglandgerstwijn, weektijd, plakdikte van geneeskrachtige kruiden, en algemene score.
Volgens het objectieve gewicht van elke index bepaald door de analytische entropiemethode, werd uitgebreide scoring uitgevoerd en werd de optimale verwerkingsconditie van TBC als volgt bepaald: TBC wordt 24 uur geweekt in vijf keer de hoeveelheid hooglandgerstwijn en de dikte van de TBC is 1,5 cm. De validatietestresultaten toonden aan dat de totale DDA's respectievelijk 0,6963, 0,6793 en 0,7023 mg / g waren, en het MDA-gehalte in drie sets parallelle tests was 0,2096, 0,2237 en 0,2109 mg / g. De gemiddelde totaalscore was 83. De RSD tussen de verificatietest en de voorspelde waarde was minder dan 1,8%, wat aangeeft dat de geoptimaliseerde verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hooglandgerstwijn eenvoudig, haalbaar en stabiel is, wat een referentie vormt voor industriële productie.
Figuur 1: Representatieve chromatogrammen van de vier karakteristieke componenten na instelling van de in stap 2.1 genoemde chromatografische omstandigheden (n = 1). (A) Typische chromatogrammen van de referentieoplossing. Piek 1 is benzoylaconine, piek 2 is aconitine, piek 3 is 3-deoxyaconitine en piek 4 is 3-acetylaconitine. B) Typische chromatogrammen van de monsteroplossing. Piek 1 is benzoylaconine, piek 2 is aconitine, piek 3 is 3-deoxyaconitine en piek 4 is 3-acetylaconitine. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: De uitgebreide score van de single factor test van TBC verwerkt met hoogland gerst wijn (n = 3). (A) Hoeveelheid hooglandgerstwijn (tijden); (B) Inweektijd (h); (C) Dikte van de plak (cm). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: 3D response surface map van het effect van interactie van verschillende factoren op uitgebreide scoring. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Conditie | Parameter |
| Chromatografische kolom | Ultieme ODS-3 C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) |
| Mobiele fase | Acetonitril (A) - 0,04 mol/L ammoniumacetaatoplossing (B) pH= 8,5 ± 0,5 |
| Gradiënge-elutie | 0-10 min, 0% -70% A; 10-15 min, 70-50% A; 15-30 min, 50-40% A; 30-38min, 40-15% A; 38-45 min, 15-15% A; 45-55 min, 15-70% A |
| Debiet | 1 ml/min |
| Kolom temperatuur | 30 °C |
| Golflengte detecteren | 235 NM |
| Monstervolume | 10 μL |
Tabel 1: De chromatografische omstandigheden die in dit experiment zijn gesteld. Details over de chromatografische kolom, de mobiele fase, de gradiëntre-elutie, de stroomsnelheid, de kolomtemperatuur, de detectiegolflengte en het monstervolume.
| Index componenten | Lineaire vergelijking | Bereik van lineariteit (mg / ml) | R2 |
| Benzoylaconine | y=11.658.706.1677x +19.717.0872 | 1.036-0.0518 | 0.9995 |
| Aconitine | y=11.199.784,3030x -67.641,2429 | 1.313-0.05252 | 0.9999 |
| 3-Deoxyaconitine | y=11.214.550,3140x +59.795,9119 | 1.005-0.0402 | 0.9999 |
| 3-Acetylaconitine | y=9.887.511.9074x +26.713.6359 | 0.2018-0.01009 | 0.9994 |
Tabel 2: De lineaire relatie van de indexcomponenten in TBC. De vier indexcomponenten in TBC hadden een goede lineaire relatie in een specifiek concentratiebereik.
| Index componenten | Bekend gehalte (mg) | Hoeveelheid (mg) toevoegen | Meethoeveelheid (mg) | Terugvorderingen (%) | Gemiddelde terugvorderingen (%) | RSD (%) |
| Benzoylaconine | 0.1558 | 0.1295 | 0.2901 | 96.4 | 99.7 | 3.14 |
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2849 | 98.46 | |||
| 0.156 | 0.1295 | 0.2871 | 101.24 | |||
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2923 | 104.95 | |||
| 0.1449 | 0.1295 | 0.2736 | 99.38 | |||
| 0.1566 | 0.1295 | 0.2839 | 98.3 | |||
| Aconitine | 0.3099 | 0.3283 | 0.645 | 102.07 | 100.84 | 2.02 |
| 0.3153 | 0.3283 | 0.6371 | 98.02 | |||
| 0.2928 | 0.3283 | 0.6314 | 103.14 | |||
| 0.2969 | 0.3283 | 0.6325 | 102.23 | |||
| 0.3035 | 0.3283 | 0.6343 | 100.76 | |||
| 0.3094 | 0.3283 | 0.6339 | 98.84 | |||
| 3-Deoxyaconitine | 0.1789 | 0.201 | 0.3788 | 99.45 | 103.27 | 2.65 |
| 0.1793 | 0.201 | 0.3845 | 102.09 | |||
| 0.1741 | 0.201 | 0.3774 | 101.14 | |||
| 0.1635 | 0.201 | 0.3753 | 105.37 | |||
| 0.1708 | 0.201 | 0.383 | 105.57 | |||
| 0.1653 | 0.201 | 0.3783 | 105.97 | |||
| 3-Acetylaconitine | 0.0169 | 0.02 | 0.0374 | 102.5 | 100.92 | 1.15 |
| 0.0168 | 0.02 | 0.037 | 101 | |||
| 0.0166 | 0.02 | 0.0366 | 100 | |||
| 0.0161 | 0.02 | 0.0365 | 102 | |||
| 0.017 | 0.02 | 0.0369 | 99.5 | |||
| 0.0171 | 0.02 | 0.0372 | 100.5 |
Tabel 3: De resultaten van de meting van de terugwinningssnelheid van het monster. De RSD van het herstelpercentage van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine was respectievelijk 3,14%, 2,02%, 2,65% en 1,15%.
| Getal | Highland gerst wijn toevoeging test (tijden) | Gehalte aan MDA's (mg/g) | Gehalte aan DDA's (mg/g) | Uitgebreide puntentelling/punten |
| 1 | 2 | 0.1875 | 0.8254 | 58.98421777 |
| 2 | 3 | 0.1099 | 0.9847 | 0.056898711 |
| 3 | 4 | 0.2296 | 0.8487 | 71.12048666 |
| 4 | 5 | 0.2161 | 0.6894 | 94.6966946 |
| 5 | 6 | 0.2006 | 0.7472 | 78.22537224 |
Tabel 4: De resultaten van de single factor test van de verhouding tussen hoogland gerstwijn en TBC.
| Getal | Inweektijdtest (h) | Gehalte aan MDA's (mg/g) | Gehalte aan DDA's (mg/g) | Uitgebreide puntentelling/punten |
| 1 | 6 | 0.236292609 | 1.047811476 | 59.67501032 |
| 2 | 12 | 0.193880685 | 1.164420534 | 23.10718817 |
| 3 | 24 | 0.229606225 | 0.848736346 | 53.86313899 |
| 4 | 36 | 0.151447388 | 0.701045217 | 79.15664943 |
| 5 | 48 | 0.193311963 | 0.767427412 | 68.88872066 |
Tabel 5: De resultaten van de single factor test van de inweektijd.
| Getal | snijdiktetest (cm) | Gehalte aan MDA's (mg/g) | Gehalte aan DDA's (mg/g) | Uitgebreide puntentelling/punten |
| 1 | 0.5 | 0.1043 | 0.6190 | 66.96 |
| 2 | 1 | 0.1709 | 0.6992 | 75.05 |
| 3 | 1.5 | 0.1507 | 0.6954 | 66.23 |
| 4 | 2 | 0.1459 | 0.8347 | 20.66 |
| 5 | 2.5 | 0.1451 | 0.8298 | 21.79 |
Tabel 6: De resultaten van de single factor test van de plakdikte van TBC.
| Niveau | Factor | ||
| A (hoeveelheid hooglandgerstwijn, tijden) | B (inweektijd, h) | C (plakdikte, cm) | |
| 1.0000 | 4.0000 | 24.0000 | 0.5000 |
| 2.0000 | 5.0000 | 36.0000 | 1.0000 |
| 3.0000 | 6.0000 | 48.0000 | 1.5000 |
Tabel 7: Box-Behnken design response surface level factor tabel.
| Piekgebied in indexcomponenten | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD (%) |
| Benzoylaconine | 1281252 | 1290912 | 1198912 | 1256056 | 1256704 | 1266738 | 2.56% |
| Aconitine | 2861208 | 2881686 | 2785022 | 2790990 | 2859024 | 2799395 | 1.50% |
| 3-Deoxyaconitine | 2356317 | 2328383 | 2429059 | 2350987 | 2406114 | 2450374 | 2.04% |
| 3-Acetylaconitine | 2008110 | 2021560 | 2014519 | 2015881 | 2015209 | 2012529 | 0.22% |
Tabel 8: De resultaten van de precisiemeting. De RSD van de piekgebieden van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine waren respectievelijk 2,56%, 1,49%, 2,03% en 0,22% (n = 6).
| Piekgebied in indexcomponenten | 0 | 2 | 4 | 8 | 12 | 24 | RSD (%) |
| Benzoylaconine | 191657 | 189590 | 193934 | 205135 | 196159 | 195954 | 2.76 |
| Aconitine | 312259 | 310240 | 294331 | 309104 | 312199 | 305360 | 2.22 |
| 3-Deoxyaconitine | 230174 | 246787 | 239760 | 249302 | 248806 | 243396 | 2.98 |
| 3-Acetylaconitine | 17086 | 16953 | 16826 | 16914 | 16979 | 17896 | 2.31 |
Tabel 9: De resultaten van de stabiliteitstest. De RSD van de piekgebieden van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine waren respectievelijk 2,76%, 2,21%, 2,98% en 2,31% (n = 6).
| Piekgebied van indexcomponenten | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD (%) |
| Benzoylaconine | 191067 | 192795 | 191058 | 192907 | 179103 | 192008 | 2.79 |
| Aconitine | 308142 | 313754 | 290487 | 294740 | 301515 | 307654 | 2.92 |
| 3-Deoxyaconitine | 249021 | 249456 | 243963 | 232781 | 240524 | 234661 | 2.92 |
| 3-Acetylaconitine | 17465 | 17451 | 17247 | 16691 | 17608 | 17686 | 2.07 |
Tabel 10: De resultaten van de reproduceerbaarheidstest. De RSD van de piekgebieden van benzoylaconine, aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine waren respectievelijk 2,79%, 2,92%, 2,92% en 2,07% (n = 6).
| Getal | A (Highland gerstwijn toevoeging, tijden) | B (Inweektijd, h) | C (Snijdikte, cm) | Gehalte aan MDA's (mg/g) | Gehalte aan DDA's (mg/g) | Uitgebreide puntentelling/punten |
| 1 | 4 | 36 | 0.5 | 0.1032 | 0.6882 | 28.2 |
| 2 | 5 | 48 | 1.5 | 0.1688 | 0.6588 | 56.49 |
| 3 | 6 | 24 | 1 | 0.1236 | 0.6535 | 33.02 |
| 4 | 5 | 24 | 1.5 | 0.2201 | 0.692 | 87.23 |
| 5 | 5 | 36 | 1 | 0.2094 | 0.6199 | 70.71 |
| 6 | 5 | 24 | 0.5 | 0.1809 | 0.5689 | 48.56 |
| 7 | 4 | 24 | 1 | 0.2016 | 0.7744 | 90.74 |
| 8 | 5 | 36 | 1 | 0.2169 | 0.6889 | 85.15 |
| 9 | 5 | 36 | 1 | 0.2103 | 0.6802 | 80.5 |
| 10 | 6 | 36 | 0.5 | 0.1036 | 0.5072 | 0.36 |
| 11 | 6 | 36 | 1.5 | 0.1089 | 0.5062 | 2.86 |
| 12 | 4 | 48 | 1 | 0.1789 | 0.6789 | 64.6 |
| 13 | 6 | 48 | 1 | 0.1036 | 0.5536 | 7.55 |
| 14 | 5 | 36 | 1 | 0.2062 | 0.6084 | 67.33 |
| 15 | 4 | 36 | 1.5 | 0.1832 | 0.6954 | 69.31 |
| 16 | 5 | 48 | 0.5 | 0.1759 | 0.5569 | 44.21 |
| 17 | 5 | 36 | 1 | 0.2161 | 0.6894 | 84.82 |
Tabel 11: Ontwerp en resultaten van de responsoppervlakontwerptest.
| Bron | Som van kwadraten | Df | Mean Vierkant | F -waarde | P-waarde |
| Model | 14403.27 | 9 | 1600.36 | 30.8 | <0,0001 |
| Een | 5463.26 | 1 | 5463.26 | 105.15 | <0,0001 |
| B | 939.61 | 1 | 939.61 | 18.08 | 0.0038 |
| C | 1117.7 | 1 | 1117.7 | 21.51 | 0.0024 |
| BLOEDGROEP | 0.11 | 1 | 0.11 | 0.00216 | 0.9642 |
| WISSELSPANNING | 372.68 | 1 | 372.68 | 7.17 | 0.0316 |
| V. Chr | 174.11 | 1 | 174.11 | 3.35 | 0.1099 |
| A2 | 4133.52 | 1 | 4133.52 | 79.55 | <0,0001 |
| B2 | 28.63 | 1 | 28.63 | 0.55 | 0.482 |
| C2 | 1890.1 | 1 | 1890.1 | 36.38 | 0.0005 |
| Overgebleven | 363.71 | 7 | 51.96 | ||
| Gebrek aan pasvorm | 93.28 | 3 | 31.09 | 0.46 | 0.7253 |
| Pure fout | 270.43 | 4 | 67.61 | ||
| Cor Totaal | 14766.99 | 16 |
Tabel 12: ANOVA voor het regressiemodel.
Aanvullend dossier 1: Een gedetailleerde gids van de Box-Behnken ontwerpsoftware. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende tabel S1: Piekoppervlak van het monster van de snijdiktetest door HPLC. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende tabel S2: Gehalte aan MDA's (benzoylaconine) en DDA's (aconitine, 3-deoxyaconitine en 3-acetylaconitine) in de snijdiktetest. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende tabel S3: Uitgebreide score van de snijdiktetest. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Als een veelgebruikt Tibetaans medicijn met toxische effecten, is het toxiciteitsverzwakkende effect van verwerking uiterst belangrijk voor de klinische toepassing van TBC25. In deze studie werd de verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hoogland gerstwijn geoptimaliseerd. Door de belangrijkste actieve ingrediënten te beoordelen en de farmacologische effecten van TBC te relateren, ontdekten we dat TBC-alkaloïden ontstekingsremmende en pijnstillende effecten hebben en kunnen worden gebruikt om reumatoïde artritis te behandelen. In deze studie werd een matig toxische MDA gebruikt als positieve indicator. De totale inhoud van DDA's werd gebruikt als negatieve indicator. De entropiemethode werd gebruikt bij het berekenen van de indexgewichten en het optimaliseren van de verwerkingstechnologie26.
Tijdens het experiment moeten twee punten in het bijzonder worden opgemerkt. Ten eerste zijn drie parallelle sets experimenten vereist voor elke voorwaarde van een enkele factor om de nauwkeurigheid van latere resultaten te verbeteren. Ten tweede worden bij de berekening van de uitgebreide scores de gestandaardiseerde waarden van elke indicator vermenigvuldigd met de wegingsfactor in plaats van de onbewerkte gegevens. Deze procedure garandeert de nauwkeurigheid van de berekeningsresultaten. Bovendien moet de R2-waarde in ANOVA zo dicht mogelijk bij één liggen; anders liggen de niveaus van factoren extreem dicht bij elkaar, met weinig invloed op de resultaten; Het verschil tussen de niveaus moet matig groot zijn.
Hoewel het gebruik van multi-index uitgebreide scoring in combinatie met de responsoppervlakmethode zorgt voor de precieze voorspelling van het verwerkingsproces van TBC, heeft het wel beperkingen. Ten eerste, wanneer laboratoria HPLC gebruiken om geïndiceerde componenten in geneesmiddelen te meten, kunnen menselijke fouten optreden als gevolg van de kleine schaal van experimenten. Meer overtuigende resultaten kunnen worden verkregen als een proefevaluatie wordt uitgevoerd in een grote kruidenverwerkingsfabriek. Ten tweede is de Box-Behnken ontwerpmethode niet geschikt voor optimalisatie van het hele proces. Na het importeren van de experimentele gegevens in de responsoppervlaksoftware, moet de modelterm significant zijn (p < 0,05) en het gebrek aan pasvorm moet niet-significant zijn (p > 0,05) in de ANOVA-gegevens. Als het resultaat wordt omgekeerd, is het proces niet geschikt voor optimalisatie door deze methode.
Kortom, vergeleken met de veelgebruikte single factor test, uniform ontwerp, orthogonaal ontwerp en sterpuntontwerp, is de Box-Behnken responsoppervlakbenadering een experimentele optimalisatieontwerpmethode die multivariate lineaire en kwadratische termmodel past27. Het model voorspeld door de Behnken response surface methode heeft continuïteit en hoge experimentele nauwkeurigheid, en voorspelt optimale punten28,29. In het huidige experiment werd het voorkeursproces van TBC bepaald door uitgebreide scores op basis van de single factor test, en de uiteindelijke validatietest week niet veel af van de voorspelde waarde, wat aangeeft dat het geselecteerde model redelijk is en referenties kan bieden voor de verwerkingstechnologie van TBC verwerkt met hooglandgerstwijn. De geoptimaliseerde verwerkingstechnologie kan informatie en richtlijnen bieden voor de studie van het toxiciteitsverzwakkende effect van de verwerking van andere toxische etnische geneesmiddelen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen belangenconflicten bekend te maken.
Acknowledgments
Dit werk werd financieel ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr. 82130113), de China Postdoctoral Science Foundation (nr. 2021MD703800), de Science Foundation for Youths of Science & Technology Department van de provincie Sichuan (nr. 2022NSFSC1449) en het "Xinglin Scholars" Research Promotion Program van Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (nr. BSH2021009).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS000905 | |
| 3-Acetylaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010552 | |
| 3-Deoxyaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS011258 | |
| Benzoylaconine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010300 | |
| Circulating water vacuum pump | Gongyi City Yuhua Instrument Co., Ltd | SHZ-DIII | |
| Design-Expert | State-East Corporation | 8.0.6 | |
| Electric constant temperature drying oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | 101-3-BS | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| High performance liquid chromatography | Shimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltd | shimadzu 2030 | |
| Highland barley rice | Kangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province | 20221015 | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rotary evaporator | Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory | RE-2000A | |
| Starter of liquor-making | Angel Yeast CO., Ltd | BJ22-104 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
References
- Zhang, J., et al. Study of quality standards for Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 40 (9), 2100-2103 (2018).
- Liu, X. F., et al. Study on toxicity reduction and effect preservation of the compatibility of Tibetan medicine Aconitum pendulum Busch and Terminalia chebula Retz. Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica. 13 (3), 69-72 (2022).
- Luo, D. S. Chinese Tibetan herbs. 63, Ethnic publishing House. Beijing. (2007).
- Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum Busch and A. flavum Hand-Mazz: A narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. Journal of Ethnopharmacology. 292, 115216 (2022).
- Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Frontiers in Pharmacology. 13, 938915 (2022).
- Zhang, Y., Fu, X. Y. UPLC Simultaneous determination of six esteric alkaloids components in Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 16 (5), 62-65 (2020).
- Wang, Y. J., et al. Determination of alkaloid content in different medicinal parts of the folk medicine. Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 32 (8), 1390-1393 (2010).
- Shao, C. L., Fu, J. L., Fu, S. X., Ma, H. W., Sun, X. D. Toxicity research and processing methods of Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 10 (2), 32-34 (2014).
- Chan, T. Y. K.
- Li, S. L., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115 (2022).
- Zhao, M. Y. Study on identification and processing attenuation of Tibetan drug Bangna. Southwest Jiaotong University. , (2018).
- Tibet Autonomous Region Food and Drug Administration. Tibetan herbal medicine concoction specification. , Tibetan People's Publishing House. Lhasa. 135 (2008).
- Abd-El-Aziz, N. M., Hifnawy, M. S., El-Ashmawy, A. A., Lotfy, R. A., Younis, I. Y. Application of Box-Behnken design for optimization of phenolics extraction from Leontodon hispidulus in relation to its antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities. Scientific Reports. 12 (1), 8829 (2022).
- Quan, L., et al. Optimization of processing technology of stir-frying with vinegar of Curcuma Longa Radix by orthogonal design and Box-Behnken design-response surface based on entropy method. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (8), 1823-1828 (2018).
- Jia, F. C., et al. Research on the brewing technology of Tibetan traditional barley liquor based on response surface method. Food and Fermentation Industries. 45 (22), 171-178 (2019).
- Zhao, X. H., et al. Determination of osthol in different traditional Chinese medicines by HPLC. Chinese Journal of Pharmaceutics. 19 (5), 154-158 (2021).
- Feng, Z. G., et al. Processing methods and the underlying detoxification mechanisms for toxic medicinal materials used by ethnic minorities in China: A review. Journal of Ethnopharmacology. 305, 116126 (2023).
- Wang, D. M., Lu, Z. J., Wang, Y. H., Zhang, C. S. Applying grading methods of synthesizing multiple guidelines to optimizing alcohol-steam processing technology from Ploygonatum odordatum. Journal of Zhejiang A & F University. 30 (1), 100-106 (2013).
- He, N. L., Bao, M. L., Ba, G. N. Study on the best processing technology of Terminalia Decoction soaking iron. Journal of Medicine & Pharmacy of Chinese Minorities. 20 (9), 36-38 (2014).
- Liu, C., et al. Optimization of processing technology for Saposhnikoviae Radix by Box-Behnken design-response surface methodology. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 20 (5), 18-21 (2014).
- Ferreira, S. L. C., et al. Box-Behnken design: an alternative for the optimization of analytical methods. Analytica Chimica Acta. 597 (2), 179-186 (2007).
- Dong, R., Lu, Y., Wang, P. The process optimization of vinegar roasting of Bupleurum chinense by entropy weight method combined with Box-Behnken response surface method and its protective effect on mice liver injury. Science and Technology of Food Industry. 42 (23), 209-217 (2021).
- Li, W. J., et al. Analysis on the times of Polygonati Rhizoma steamed by multiple times based on entropy weight and gray relative analysis method. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 36 (11), 6764-6769 (2021).
- Huang, B. J., Liu, X. T., Mao, Y. M., Qi, B., Liu, L. Response surface methodology combined with analytic hierarchy process to optimize the processing technology of Custutae semen with wine. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 33 (8), 1890-1894 (2022).
- Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
- Xie, H. H., et al. Metabolomics study of aconitine and benzoylaconine induced reproductive toxicity in Be Wo cell. Chinese Journal of Analytical Chemistry. 43 (12), 1808-1813 (2015).
- Han, Y. F., et al. Optimization of extraction process for Yangyin Runmu granules by Box-Behnken design based on entropy weight method-analytic hierarchy process method. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy. 39 (7), 896-903 (2022).
- Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Clinamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (8), 1838-1842 (2022).
- Pan, Y. L. Optimization of stir-baking process of Coix lacryma-Jobi Var.Mayuen Kernel by Box-Behnken response surface methodology. Shandong Chemical Industry. 51 (14), 73-75 (2022).
