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Methodenartikel

Verwendung von induzierbaren osteoblastischen Abstammungs-spezifischen Stat3-Knockout-Mäusen zur Untersuchung des Alveolarknochenumbaus während kieferorthopädischer Zahnbewegung

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DOI:

10.3791/65613

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21. Juli 2023

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Diese Studie stellt ein Protokoll für die Verwendung von induzierbaren Osteoblasten-spezifischen Stat3-Knockout-Mäusen zur Untersuchung des Knochenumbaus unter kieferorthopädischer Kraft zur Verfügung und beschreibt Methoden zur Analyse des alveolären Knochenumbaus während kieferorthopädischer Zahnbewegungen, wodurch ein Licht auf die mechanische Biologie des Skeletts geworfen wird.

Zusammenfassung

Der Alveolarknochen ist mit einer hohen Umsatzrate der am aktivsten umbauende Knochen im Körper. Die kieferorthopädische Zahnbewegung (OTM) ist ein gängiger künstlicher Prozess des Umbaus des Alveolarknochens als Reaktion auf mechanische Krafteinwirkung, aber der zugrunde liegende Mechanismus bleibt schwer fassbar. Bisherige Studien waren aufgrund von Einschränkungen im Tiermodell nicht in der Lage, den genauen Mechanismus des Knochenumbaus zu jeder Zeit und in jedem Raum aufzudecken. Der Signalwandler und Aktivator der Transkription 3 (STAT3) ist wichtig für den Knochenstoffwechsel, aber seine Rolle in Osteoblasten während der OTM ist unklar. Um in vivo den Nachweis zu erbringen, dass STAT3 zu bestimmten Zeitpunkten und in bestimmten Zellen während der OTM an der OTM beteiligt ist, haben wir ein Tamoxifen-induzierbares Osteoblastenlinien-spezifisches Stat3-Knockout-Mausmodell generiert, kieferorthopädische Kraft angewendet und den alveolären Knochenphänotyp analysiert.

Mikro-Computertomographie (Micro-CT) und Stereomikroskopie wurden verwendet, um die OTM-Distanz zu erfassen. Die histologische Analyse wählte den Bereich, der sich innerhalb von drei Wurzeln des ersten Molaren (M1) im Querschnitt des Oberkieferknochens befindet, als Region of Interest (ROI) aus, um die metabolische Aktivität von Osteoblasten und Osteoklasten zu bewerten, was auf die Wirkung der kieferorthopädischen Kraft auf den Alveolarknochen hinweist. Kurz gesagt, wir stellen ein Protokoll für die Verwendung von induzierbaren osteoblastenspezifischen Stat3-Knockout-Mäusen zur Verfügung, um den Knochenumbau unter kieferorthopädischer Kraft zu untersuchen und Methoden zur Analyse des alveolären Knochenumbaus während der OTM zu beschreiben und so ein neues Licht auf die mechanische Biologie des Skeletts zu werfen.

Einleitung

Es ist allgemein bekannt, dass Knochen während des gesamten Lebens als Reaktion auf mechanische Kräfte nach dem Wolffschen Gesetz 1,2 ständig rekonstruiert werden. Geeignete mechanische Stimulation, wie Schwerkraft und tägliche Bewegung, erhalten Knochenmasse und -stärke und beugen Knochenschwund vor, indem sowohl Osteoblasten als auch Osteoklasten stimuliert werden. Osteoklasten, die für den Knochenabbau verantwortlich sind 3,4,5,6,7, und Osteoblasten, die für die Knochenbildung verantwortlich sind

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Protokoll

Alle hier beschriebenen Methoden mit Tieren wurden von der Ethikkommission des Shanghai Ninth People's Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine (Nr. 82101048) genehmigt.

1. Etablierung induzierbarer Osteoblasten-spezifischer Stat3-Knockout-Mäuse

ANMERKUNG: Stat3 fl/fl Mäuse wurden kommerziell gewonnen; der Col1α2CreERT2-Stammwar ein Geschenk (siehe Materialtabelle für alle Details). Für alle Tiere wurden standardisiertes Laborpelletfutter und -wasser sowie Standard-Laborumgebungsbedingungen (Raumtemperatur bei 22 °....

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Ergebnisse

Unter Verwendung dieses Protokolls haben wir ein induzierbares osteoblastenspezifisches Stat3-Knockout-Mausmodell (Stat3Col1α2ERT2) etabliert, um die Auswirkungen der STAT3-Deletion auf den kieferorthopädischen, kraftgetriebenen alveolären Knochenumbau zu untersuchen (Abbildung 1A,B). Die STAT3-Deletion in Osteoblasten wurde durch Immunfluoreszenzfärbung des Alveolarknochens bestätigt (Abbildung 1C).

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Diskussion

Da Zahnfehlstellungen zu den häufigsten oralen Erkrankungen gehören, die die Atmung, das Kauen, das Sprechen und sogar das Aussehen beeinträchtigen, steigt die Nachfrage nach Kieferorthopädie von Tag zu Tag, wobei die Inzidenz laut einer früheren epidemiologischen Umfrage von 70 % auf 93 % steigt31,32. Wie der alveoläre Knochenumbau beschleunigt werden kann, um die Effizienz der kieferorthopädischen Behandlung sicher zu steigern, ist zu einem heißen Thema in dies.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte zu deklarieren.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde teilweise durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (81870740, 82071083, 82271006, 82101048, 81800949) unterstützt. die Natural Science Foundation of Shanghai (21ZR1436900, 22ZR1436700); das Programm des Shanghai Academic/Technology Research Leader (20XD1422300); Klinischer Forschungsplan des SHDC (SHDC2020CR4084); der interdisziplinäre Forschungsfonds des Shanghai Ninth People's Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine (JYJC201902, JYJC202116); das Innovationsforschungsteam der High-Level Local Universities in Shanghai (SSMUZLCX20180501); Der Forschungsdisziplinfonds Nr. KQYJXK2020 vom Ninth People's Hospita....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
1x PBSBeijing Solarbio Wissenschaft & Technology Co., Ltd. P1020
4% ParaformaldehydWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1101
Alizarin rotSigma-AldrichA5533
Anti-CTSK AntikörperSanta Cruzsc-48353
Anti-OPN AntikörperR& D Systems, Minneapolis, MN, USAAF808
CalceinSigma-AldrichC0875
Geschlossene SchraubenfedernInnovatives Material und Geräte, Shanghai, ChinaCS1006B
Col1α 2CreERT2 MäuseEin Geschenk von Bin Zhou, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinesische Akademie der Wissenschaften.
DexmedetomidinhydrochloridOrionintie Corporation, Orion Pharma Espoo Standort
EDTABeyotime BiotechanologyST069
EinbetttanksCitotest Labware Manufacturing Co., Ltd80106-1100-16
EthanolSinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.
ImageJ SoftwareNIH, Bethesda, MD, USA
Einbettmedium mit DAPIBeyotime BiotechanologyP0131
Maus-DissektionsplattformShanghai Huake Experimental Devices and Materials Co., Ltd.HK105
ParaffinSangon Biotech Co., Ltd.
Primer für die GenotypisierungStat3 F-TTGACCTGTGCTCCTACAAAAA; Stat3 R-CCCTAGATTAGGCCAGCACA; Cre F-CGATGCAACGAGTGATGAGG; Cre R-CGCATA ACCAGTGAAACAGC
Protease KSigma-Aldrich539480
Selbsthärtendes Restaurationsharz3M ESPE, St. Paul, MN, USA712-035<
em>Stat3fl/fl miceGemPharmatech Co., LtdD000527
TamoxifenSigma-AldrichT5648
TRAP FärbekitSigma-Aldrich387A
Tris-HClBeyotime BiotechanologyST780
Universelles GewebefixiermittelWuhan Servicebio Technology Co., Ltd.G1105
XylolSinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.
ZoletilVIRBAC 
Verifizierter Lieferant - 100092183Verifizierter Lieferant - A60188910023418

Referenzen

  1. Frost, H. M. The Utah paradigm of skeletal physiology: an overview of its insights for bone, cartilage and collagenous tissue organs. Journal of Bone and Mineral Metabolism. 18 (6), 305-316 (2000).
  2. Frost, H. M.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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