Drosophila Burrowing and Tunneling Assay: Eine Methode zur Beurteilung der Gewebehypoxie bei Fliegenlarven

- Um den Käfig zur Embryoentnahme einzurichten, verwenden Sie Traubensaft-Agar-Platten, die mit frischer Hefepaste ergänzt sind, und setzen Sie die Platten auf Käfige mit männlichen und weiblichen Drosophila-Fliegen des entsprechenden Genotyps. Der Geruch der Hefe und des Traubensaftes ist attraktiv und fördert die Eiablage durch die Weibchen. Lassen Sie die Eiablage für einen bestimmten Zeitraum zu. Entfernen Sie dann die erwachsenen Tiere und inkubieren Sie die Embryoplatten 24 Stunden lang, um die ersten Larven im Stadium zu erhalten. Übertragen Sie dann vorsichtig ein paar einzelne Larven von der Traubensaftplatte auf eine reine Agar-Testplatte, bei der ein Loch in der Mitte der Platte in den Agar ausgeschnitten und mit Hefepaste gefüllt wurde.

Junge Larven müssen fressen, um an Körpergewicht zuzunehmen, um sich zu entwickeln, also graben sie sich in die Nahrungsquelle, die Hefepaste, ein. Während ihrer Entwicklung treten die Larven in eine Wanderphase ein und tunneln sich von der Nahrung weg, um einen Ort für die Verpuppung zu suchen. Um die Hypoxie zu beurteilen, untersuchen Sie die Tunnelmuster, die die Larven im Substrat bilden. Fehlender oder unzureichender Tunnelbau ist e