Drosophila Quantifizierung der neuromuskulären Verbindung (NMJ): Eine Methode zur Beurteilung der synaptischen Morphologie und Funktion

- Zuerst Immunfärbung von Drosophila-Larven mit Markern, die verschiedene Aspekte von NMJs oder neuromuskulären Verbindungen hervorheben. Dies ist die Region, in der das Ende eines Motoneuron-Axons mit einem Muskel in Kontakt kommt, und seine Morphologie wird als Messwert für die synaptische Funktion verwendet.

Das Axon endet in mehreren Ästen, die Ausbuchtungen bilden, die als Boutons bezeichnet werden. Neurotransmitter werden aus den Boutons freigesetzt und bewirken eine Muskelkontraktion. Bereiche, in denen Neurotransmitter freigesetzt werden, werden als aktive Zonen bezeichnet. Hier ist ein Marker spezifisch für ein synaptisches Protein, das das NMJ umreißt, und der andere Marker ist für ein Protein, das in aktiven Zonen vorhanden ist.

Nehmen Sie als Nächstes NMJ-Bilder mit Hilfe der Mikroskopie auf und beurteilen Sie deren Morphologie quantitativ mit einer halbautomatischen Bildanalysesoftware. Wenden Sie eine voreingestellte Reihe von Softwarebefehlen auf die Bilder an. Die Ausgabedateien enthalten analysierte NMJ-Bilder und Morphologieergebnisse. Zu den Features, die gemessen werden können, gehören die Anzahl und Oberfläche der Boutons, die NMJ-Länge und die Anzahl der Verzw