0 Aufrufe • 3:59 Min. • April 30th, 2023
- Zur Vorbereitung der Injektion legen Sie mit einem Wurmstocher eine Spur aus Halogenkohlenwasserstofföl auf ein Agarose-Pad. Legen Sie die Würmer in das Öl und immobilisieren Sie sie, indem Sie sie vorsichtig auf das Agarpad drücken. Stellen Sie sicher, dass das Öl die Tiere vollständig bedeckt. Es lässt Sauerstoff zu den Würmern gelangen und verhindert gleichzeitig das Austrocknen. Legen Sie als Nächstes das Agarose-Pad auf ein Injektionsmikroskop und positionieren Sie die Nadel senkrecht zum Wurm, wobei Sie auf das distale Ende eines Gonadenarms abzielen.
Schieben Sie die Nadel vorsichtig durch die Nagelhaut und injizieren Sie die gewünschte Nukleinsäure oder Verbindung in den Gonadenarm. Jeder Gonadenarm enthält ein Keimbahn-Synzytium, das sich zu einzelnen Eizellen entwickelt. Material, das in die distale Gonade injiziert wird, wird in diese Eizellen eingebaut und wirkt sich auf die nächste Generation aus.
Ersetzen Sie nach dem Einspritzen der Schnecken das Öl durch M9-Puffer. Sobald sich die Würmer in Bewegung setzen, übertragen Sie sie auf eine NGM-Agarplatte mit bakterieller Nahrung. Im folgenden Protokoll wird die Gonaden-Mikroinjektionsmethode verwendet, um einen Cas9-Ko
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