Novo ensaio de mergulho de tanque: um método para estudar respostas inatas de estresse em zebrafish

- Para começar, coloque uma luz infravermelha atrás do novo tanque e uma folha de acrílico branco entre o tanque e a luz para difundir a luz e evitar o brilho. Agora encha 3/4 do tanque com água do sistema de peixes gerada pela osmose reversa da água da torneira. Transfira um peixe aclimatado de um tanque de retenção para um béquer contendo água do sistema de peixes e deixe descansar por mais 10 minutos.

Usando uma imagem de vídeo ainda emoldurada para encontrar as áreas superior, média e inferior do tanque calculando a altura do tanque e dividindo-a por 3, determinar o tempo gasto em cada área e a distância total percorrida usando software de rastreamento. Um peixe adulto, quando colocado em um tanque desconhecido, geralmente mostra uma preferência pela metade inferior, devido ao estresse. À medida que o nível de estresse reduz, ele gradualmente nada até o topo com mais frequência. Teste pelo menos 10 peixes por experimento. Em um protocolo de exemplo, veremos a configuração experimental para um novo teste de mergulho de tanque.

- Comece preenchendo um béquer de 250 mililitros e pelo menos dois tanques de retenção com água do sistema de peixes. Na manhã do teste, transfira pelo menos 10 zebrafish adultos para cada condição experimental em tanques de retenção individuais antes de transferir todos os peixes para a sala de comportamento para aclimatação por pelo menos uma hora. Rotule os tanques de tal forma que a condição ou genótipo dos animais seja cego para o experimentador, e use uma rede para colocar suavemente um único adulto no béquer pré-preenchido.

Deixe o peixe adulto se aclimatar no béquer por 10 minutos antes de despejar suavemente a água e o peixe do béquer no tanque experimental. Assim que o peixe estiver no tanque, inicie a gravação da câmera e se afaste da configuração para evitar sofrimento adicional ao peixe.