Intrathorakale Injektion: Abgabe von Verbindungen an das Herz eines erwachsenen Zebrafisches

- Legen Sie zunächst einen nassen Schwamm mit einem Schlitz auf eine Petrischale. Als nächstes betäuben Sie einen erwachsenen Fisch mit Tricainlösung und übertragen Sie ihn vorsichtig mit der Bauchseite nach oben in den Schlitz. Stellen Sie die Petrischale unter ein Stereomikroskop und beobachten Sie die Bewegung des schlagenden Herzens unter der Haut.

Positionieren Sie eine Mincroinjektionsnadel in einem Winkel von 45 Grad von der Körperachse über dem schlagenden Herzen, das sich zwischen dem Operculum und dem Brustgürtel befindet. Führen Sie die Nadel vorsichtig durch die Haut in das Perikard ein, eine dünne Membran, die das Herz umgibt. Geben Sie die Injektionsmischung in das Perikard.

Die Aufnahme enthält einen Tracer-Farbstoff wie Phenolrot, um die Bewegung der Lösung zu verfolgen. Ziehen Sie die Nadel aus dem Brustkorb zurück. Setzen Sie den Fisch sofort in den Auffangtank mit dem Systemwasser und überwachen Sie ihn, um sich vollständig von der Narkose zu erholen. Im folgenden Protokoll werden wir eine intrathorakale Injektion durchführen, um eine Testsubstanz zu verabreichen und ihre Auswirkungen auf die Herzregeneration zu untersuchen.

- Fangen Sie mit einem Netz einen erwachsenen Fisch und geben Sie ihn in die Betäubungslösung. Nach ein bis zwei Minuten, wenn der Fisch aufhört zu schwimmen und die Bewegung des Operculums reduziert ist, berühren Sie den Fisch mit einem Plastiklöffel, um sicherzustellen, dass er nicht auf jeglichen Kontakt reagiert. Setzen Sie den Fisch dann schnell und vorsichtig mit der Bauchseite nach oben in die Rille des nassen Schwamms ein. Der Kopf des Fisches sollte von der dominanten Hand des Bedieners weg zeigen.

Beobachten Sie unter dem Stereomikroskop genau die Bewegung des schlagenden Herzens unter der Haut des Fisches. Visuell bestimmen Sie den Injektionspunkt oberhalb des schlagenden Herzens und in der Mitte des Dreiecks, das durch die ventralen Knorpelplatten definiert wird. Führen Sie die Spitze der Kapillare in einem Winkel zwischen 30 und 45 Grad relativ zur Körperachse ein. Dringen Sie mit der Spitze der Mikrokapillare sanft in die Haut in das Perikard ein.

Sobald sich die Nadel im Perikard befindet, drücken Sie das Pedal des Mikroinjektors, um die Injektion abzuschließen. Ziehen Sie nach der Injektion die Kapillare vorsichtig aus dem Thorax zurück und bringen Sie den Fisch sofort in ein Aquarium mit Systemwasser zur Erholung. Überwachen Sie den Fisch, bis er sich vollständig von der Narkose erholt hat. Um die Auswirkungen der Injektion zu analysieren, entnehmen Sie das Herz zum gewünschten Zeitpunkt und bereiten Sie es für die weitere Analyse vor.