Mechanische Dissoziation: Eine Methode, um lebensfähige Zellen aus einem Gewebe zu gewinnen

Wiegen Sie zunächst ein Gewebefragment und messen Sie dessen Länge, Breite und Höhe. Legen Sie das Gewebe in eine Kulturschale mit einem Nährmedium und zerkleinern Sie es mit einem Skalpell in kleine Stücke. Übertragen Sie alles zur Homogenisierung mit einer Pasteurpipette in ein C-Röhrchen.

Legen Sie das Rohr in einen mechanischen Dissoziator und führen Sie die Zyklen nach Bedarf durch. Die Apparatur nutzt mechanische Kräfte, um lebensfähige Einzelzellen aus der Gewebeprobe zu extrahieren und gleichzeitig die zelluläre Integrität, einschließlich der Oberflächenproteine, zu erhalten. Dekantieren Sie das Homogenat durch ein Zellsieb, das auf einem Zentrifugenröhrchen befestigt ist.

Rehomogenisieren Sie das restliche Gewebe und seihen Sie das Homogenat durch das Zellsieb in das Röhrchen ab. Das Homogenat zentrifugieren und den Überstand entfernen. Suspendieren Sie nun das Zellpellet wieder im Kulturmedium und geben Sie eine kleine Menge der Zellsuspension in ein Röhrchen mit Trypanblau-Färbung

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Nach der Färbung werden die Zellen auf einen Objektträger für das Hämozytometer übertragen. Zählen Sie die transparenten lebensfähigen Zellen. Die abgestorbenen Zellen nehmen den Fleck auf, da