Generierung dendritischer Zellen aus Knochenmark: Eine Methode zur Erzeugung dendritischer Zellen aus Knochenmark der Maus

- Dendritische Zellen oder DCs sind wichtige antigenpräsentierende Zellen, die T-Zellen aktivieren. Bei leukämischen Patienten exprimieren diese Zellen tumorassoziiertes Antigen schlecht und lösen keine antigenspezifische Immunantwort aus. Dendritische Zellen sind im Knochenmark reichlich vorhanden. Und daher ist das Knochenmark der bevorzugte Ort für ihre Isolierung, um ihre Rolle bei Krebs zu untersuchen.

Um dendritische Zellen zu gewinnen, extrahieren Sie das Knochenmark aus dem Oberschenkelknochen oder dem Schienbein einer euthanasierten Maus, indem Sie es mit einer mit Medien gefüllten Spritze ausspülen. Zentrifugieren Sie das Pellet und resuspendieren Sie es in Ammoniumchlorid-Kalium oder ACK-Puffer, um die Erythrozyten zu lysieren. Fügen Sie nun Nährmedien hinzu, um die Lyse zu stoppen und zu zentrifugieren. Resuspendieren Sie das Pellet in den Nährmedien, die ein Antibiotikum enthalten. Fügen Sie Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor oder GM-CSF hinzu und übertragen Sie die Zellsuspension auf eine Petriplatte.

Inkubieren Sie die Platte für die gewünschte Zeitdauer. GM-CSF hilft Vorläuferzellen, sich in dendritische Zellen zu differenzieren. Aktivieren Sie s