JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:23 Min. • April 30th, 2023
- Ruhende Melanozyten-Stammzellen werden als Reaktion auf UV-Strahlung oder Haarenthaarung aktiviert. Aktivierte Melanom-Stammzellen können zum kutanen Melanom führen - einer Form von Hautkrebs. Um das Melanom zu untersuchen, bereiten wir gefrorene Hautgewebeblöcke vor, um die nativen Strukturen der DNA und Proteine während des Fixierungsverfahrens zu erhalten.
Beginnen Sie damit, eine euthanasierte Melanommaus auf eine Operationsliege zu legen und Haare aus dem dorsalen Bereich der Haut über dem Schwanz zu entfernen. Schneiden Sie die Haut heraus und bedecken Sie sie mit einem Filterpapier. Tauchen Sie anschließend das Filterpapier mit dem Hautgewebe für die gewünschte Zeit in neutral gepuffertes Formalin. Formalin dringt in das Hautgewebe ein und bindet an die Aminosäuren, was die Vernetzung von Proteinen bewirkt und somit zu einer Gewebefixierung führt.
Entfernen Sie das Hauttuch vom Papier und schneiden Sie das Taschentuch ab, um Stücke in der gewünschten Größe zu erhalten. Betten Sie nun die Gewebestücke vertikal in einen mit OCT-Medium gefüllten Kryomould ein und legen Sie die Kryomoulds auf Trockeneis. OCT ist eine Probenmatrix, die sich beim Einfrieren verfestigt und eine g
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