Isolierung von Melanom-Stammzellen: Eine Methode zur Gewinnung von CD133-positiven und -negativen Melanomzellen durch magnetisch aktivierte Zellsortierung

- Das Melanom beherbergt eine kleine Subpopulation von Krebsstammzellen, die sowohl die Fähigkeit zur Selbsterneuerung als auch zur Tumorinitiierung besitzen. CD133 oder Prominin-1, ein Pentaspin-Transmembran-Glykoprotein, ist einer der Schlüsselmarker, die von metastasierten Melanom-Krebsstammzellen exprimiert werden. Um CD133-positive Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit einer Suspension der primären Melanomzellen in einem geeigneten Puffer.

Inkubieren Sie mit einem Blockierungsreagenz, das Proteine enthält, die unspezifische Bindungsstellen auf der Zelloberfläche blockieren. Behandeln Sie die Zellen mit biotinylierten CD133-Primärantikörpern. Diese Antikörper binden an CD133-Antigene, die auf CD133-positiven Zellen exprimiert werden. Fügen Sie nun der Suspension magnetische Anti-Biotin-Mikrokügelchen hinzu. Inkubieren Sie, damit die Mikrokügelchen an die Biotin-markierten Zellen binden können.

Führen Sie schließlich die inkubierte Suspension durch eine Säule, die in einem Magnetfeld platziert ist. Unter magnetischer Beeinflussung bleiben alle CD133-positiven Zellen, die mit den Mikrokügelchen markiert sind, an der Säule haften, während die unmarkierten Zellen die Säule passiere