Keratinozyten-Koloniebildungs-Assay: Ein In-vitro-Assay zur Beurteilung der Fähigkeit von Keratinozyten, zu Kolonien zu wachsen

- Der Assay zur Koloniebildung bestimmt die Fähigkeit einzelner Zellen, sich zu vermehren und Kolonien zu bilden. Beginnen Sie mit einer herausgeschnittenen Haut vom Rücken der Maus in einer Kulturplatte. Kratzen Sie das Unterhautgewebe und das Fett von der ventralen Seite der Haut ab. Behandeln Sie das Gewebe mit einer Verdauungslösung. Die proteolytischen Enzyme in der Lösung bauen die extrazelluläre Matrix ab und induzieren die Dissoziation der epidermalen Zellen.

Kratzen Sie vorsichtig die Epidermisschicht ab, um die dissoziierenden Zellen und Haare in ein Erntemedium freizusetzen. Filtern Sie die Suspension durch ein geeignetes Sieb, um Haare oder Ablagerungen einzufangen und erhalten Sie eine einzellige Suspension von Epidermiszellen. Übertragen Sie das gewünschte Volumen dieser Zellsuspension in eine kollagenbeschichtete Platte, die eine adhärente Schicht aus wachstumsgehemmten Feederzellen enthält. Ergänzen Sie mit einem geeigneten Medium, das das Überleben der Keratinozyten begünstigt.

Während der Kultur heften sich die Keratinozyten an die Feederschicht. Darüber hinaus sezernieren diese Feeder-Zellen Wachstumsfaktoren und synthetisieren extrazelluläre Matrixproteine, die