Quantifizierung von bakteriellem Alginat mit dem Uronsäure-Carbazol-Assay

Nehmen Sie eine Kultur des Bakteriums Pseudomonas aeruginosa in Brühe.

Die Kultur auf Isolationsagar aufsetzen und inkubieren, um das Bakterienwachstum und die Produktion von Alginat, einem Exopolysaccharid, das aus Uronsäuren besteht, zu fördern.

Geben Sie isotonische Kochsalzlösung auf den Bakterienrasen und kratzen Sie, um die Bakterienzellen zusammen mit Alginat zu sammeln.

Übertragen Sie die Suspension in ein Röhrchen, wirbeln Sie sie ein, um den Inhalt zu dispergieren, und legen Sie sie auf Eis, um einen enzymatischen Abbau zu verhindern.

Messen Sie die optische Dichte (OD), um die Bakteriendichte zu bestimmen.

Geben Sie die Bakteriensuspension in die Säure-Borat-Lösung und mischen Sie, um das Alginat zu Uronsäuremonomeren zu hydrolysieren.

Fügen Sie Carbazol, ein chromogenes Reagenz, hinzu und inkubieren Sie. Unter sauren Bedingungen reagiert das Reagenz mit Uronsäuren zu farbigen Komplexen.

Messen Sie die Absorption, um den Uronsäuregehalt zu quantifizieren, der die Alginatkonzentration widerspiegelt.

Bestimmen Sie die Alginatkonzentration anhand einer Standardkurve und dividieren Sie sie dann durch die gemessene Bakterienzelldichte, um die Alginatproduktion pro Biomasseeinheit zu